焦磷酸测序技术原理及应用

焦磷酸测序技术(pyrosequencing)是由Nyren等人于1987年发展起来的一种新型的酶联级联测序技术,焦磷酸测序法适于对已知的短序列的测序分析,其可重复性和精确性能与SangerDNA测序法相媲美,而速度却大大的提高。焦磷酸测序技术产品具备同时对大量样品进行测序分析的能力,为大通量、低成本、适时、快速、直观地进行DNA甲基化、SNP等单个/连续多个核苷酸变异进行实时定量检测提供了非常理想的技术操作平台。一. 焦磷酸测序技术原理焦磷酸测序技术是由4种酶催化的同一反应体系中的酶级联化学发光反应。焦磷酸测序技术的原理是:引物与模板DNA退火后,在DNA聚合酶(DNA polymerase)、ATP硫酸化酶(ATP sulfurytase).荧光素酶(1uciferase)和三磷酸腺苷双磷酸酶(Apyrase)4种酶的协同作用下,将引物上每一个dNTP的聚合与一次荧光信号的释放偶联起来,通过检测荧光的释放和强度,达到......阅读全文

DNA测序技术的介绍

  DNA测序技术,又叫基因测序技术。  人类基因组这部由A、T、G、C四个字母组成的卷帙浩繁的生命天书如同一座宝库,保藏着几千年来人们迫切想知道的秘密,DNA测序技术就好似“芝麻开门”这样的咒语,是我们打开宝库的金钥匙。世界上第一个测定DNA序列的方法是由英国生化学家弗雷德里克·桑格尔发明的。自此

什么是DNA测序技术?

DNA测序技术系指分析DNA碱基构成和碱基顺序的技术,即用于确定DNA片段中腺嘌呤(A)、胸腺嘧啶(T)、鸟嘌呤(G)、胞嘧啶(C)的构成和排列方式。一般采用双脱氧链终止法进行DNA测序。其原理是利用2',3'-双脱氧核苷三磷酸(2',3'-ddNTP)作为链终止试剂

DNA测序技术的简介

DNA测序技术,又叫基因测序技术。人类基因组这部由A、T、G、C四个字母组成的卷帙浩繁的生命天书如同一座宝库,保藏着几千年来人们迫切想知道的秘密,DNA测序技术就好似“芝麻开门”这样的咒语,是我们打开宝库的金钥匙世界上第一个测定DNA序列的方法是由英国生化学家弗雷德里克·桑格尔发明的。自此DNA测序

【技术】基因测序那些事

  最早的时候,基因测序只能应用于科研之上,是遗传学及分子生物学一个重要的科研工具。随着测序技术的发展,测序价格大大降低及测序仪的能力越来越高,测序技术应该不仅仅局限于科研市场,越来越多的人想要将测序这种分子生物学技术应用到面向大众的普通消费市场,特别是医疗市场和临床市场,一旦测序技术在这些市场进行

基因测序技术的原理

基因测序技术能锁定个人病变基因,提前预防和治疗。自上世纪90年代初,学界开始涉足“人类基因组计划”。而传统的测序方式是利用光学测序技术。用不同颜色的荧光标记四种不同的碱基,然后用激光光源去捕捉荧光信号从而获得待测基因的序列信息。 最新的基因测序仪中,芯片代替了传统激光镜头、荧光染色剂等,芯片就是测序

Illumina-测序技术原理概述

基因的变异类型有多种(点击查看),对应的分子检测方法亦有多种,针对不同的需求,都有对应的理想检测方法,每个检测平台都有着自己的优势,比如:操作简单:PCR,ARMS-PCR,HRM等时间快速:ARMS-PCR,HRM等成本低:PCR,PCR-RFLP,MassARRAY等准确:Sanger等通量高:

关于DNA测序技术的测序凝胶板的制备

  一、玻璃板的处理  银染测序的玻璃板一定要非常清洁,一般先用温水和去污剂洗涤,再用去离子水冲洗玻璃板,除去残留的去污剂,最后用乙醇清洗玻璃板。玻璃板上遗留的去污剂微膜可能导致凝胶染色时背景偏高(棕色)。短玻璃板经粘合溶液处理可将凝胶化学交联于玻璃板上。这一步对于在银染操作过程中防止凝胶撕裂至关重

影响DNA测序技术测序产物银染的因素

  1. 水的质量对于染色的成功极其重要。超纯水(NANOpureR 或Milli-QR 的水)或双蒸水可获得较好的效果, 如果水中有杂质, 则低分子量条带可能无法出现。  2. 碳酸钠也非常重要。使用新鲜的,美国化学学会级碳酸钠较好,如Fisher和Kodak ACS试剂级碳酸钠(Fisher C

时空分辨单细胞测序技术与其他单细胞测序技术的差异

时空分辨单细胞测序技术与其他单细胞测序技术主要在以下方面存在区别:空间信息获取普通单细胞测序技术:通常不提供细胞在原始组织中的空间位置信息。时空分辨单细胞测序技术:能够同时获取细胞的基因表达等信息以及它们在组织内的空间位置。细胞间相互作用分析普通单细胞测序技术:难以直接推断细胞间基于空间位置的相互作

第二代测序技术:高速发展的高通量测序技术

高通量测序技术是对传统测序一次革命性的改变,一次对几十万到几百万条DNA分子进行序列测定,因此在有些文献中称其为下一代测序技术(next generation sequencing)足见其划时代的改变,同时高通量测序使得对一个物种的转录组和基因组进行细致全貌的分析成为可能,所以又被称为深度测

相比一代测序技术,二代测序技术具有哪些优点

相比一代测序技术,二代测序技术优点如下:1、Illumina 原理:桥式PCR+4色荧光可逆终止+激光扫描成像优势:Illumina的这种测序技术每次只添加一个dNTP的特点能够很好的地解决同聚物长度的准确测量问题,它的主要测序错误来源是碱基的替换。而读长短(200bp-500bp)也让其应用有所局

时空分辨单细胞测序技术和传统单细胞测序技术的区别

时空分辨单细胞测序技术和传统单细胞测序技术主要有以下区别:空间信息获取传统单细胞测序:通常无法获取细胞在组织中的空间位置信息,只是对分离出的单细胞进行独立分析。时空分辨单细胞测序:能够在测定单细胞基因表达等信息的同时,明确细胞在原始组织中的具体空间位置。细胞互作研究传统单细胞测序:难以直观地揭示基于

相比一代测序技术,二代测序技术具有哪些优点

第一代指双脱氧末端终止法,扩增后通过毛细管电泳读取序列,每次获取数据量少第二代为高通量测序,采用微珠或高密度芯片边合成边测序,代表有454,solexa,solid,高通量,可一次获得数G数据,相对与第三代,都仍然需要扩增的方法放大信号,扩增后再检测。第三代特点是单分子测序,多基于纳米科技,无需扩增

焦磷酸酶的功能

此酶的功能乃是在脂代谢(包括脂合成与分解)、钙吸收以及骨形成和DNA合成中扮演重要角色,其他生物化学转化也是如此。

焦磷酸铁的生产方法

一种焦磷酸铁的生产方法,其特征在于:该方法为对普通的焦磷酸铁进行表面修饰,即在焦磷酸铁乳液中投入一定量的硬脂酰乳酸钠和麦芽糊精,边搅拌边加热,加热至82~85℃,反应2~3小时,乳液不分层无沉淀;然后对乳液进行喷雾干燥,设置进风温度180~190℃,出风温度110~120℃,对干燥后的粉体进行筛分,

焦磷酸酶的功能

此酶的功能乃是在脂代谢(包括脂合成与分解)、钙吸收以及骨形成和DNA合成中扮演重要角色,其他生物化学转化也是如此。

焦磷酸硫胺素有哪些用途?

  用于维生素B1缺乏症;维生素B1对维持正常的神经传导、心脏以及消化系统的正常活动具有重要的作用。缺乏时,易患脚气病或多发性神经炎等症。我国规定可用于婴幼儿食品,使用量为4~8mg/kg;在谷类及其制品中使用量为3.0~5.0mg/kg;在饮液、乳饮料中使用量为1~2mg/kg。本品可用硝酸硫胺素

测序技术再现新进展,已开发基于单分子测序平台的单细胞多组学测序技术

  单细胞多组学测序技术是指对一个单细胞同时检测多个组学层面(例如基因组、表观基因组和转录组)的测序技术。这类技术可以更系统、全面地探索细胞异质性以及同一个细胞内的不同组学层面之间的互动关系,有利于更深入地解析复杂的生理、病理过程中细胞类型特异性的分子调控机制1, 2。2019年,Nature Me

单细胞测序技术的技术优势

单细胞测序技术具有许多优势:揭示细胞异质性:能够发现不同细胞之间基因表达和遗传变异的差异。研究细胞发育和分化:追踪细胞在发育过程中的动态变化和谱系关系。解析复杂组织:剖析组织中各种细胞类型的组成和功能。助力疾病研究:在肿瘤学中,有助于了解肿瘤细胞的进化、异质性和耐药机制。

DNA测序技术的现状和发展(三)

1.1.1 摩尔定律对454测序仪的影响454测序仪的迅猛发展不是因为我们想要Sanger测序仪小型化,而是因为新型奔腾芯片的出现以及摩尔定律法则给我们带来的希望。很明显,常规的人类基因测序项目会对我们处理测序技术的能力提出更高要求,这与我们对计算机处理能力的要求是一样的。不过,只有将计算机的电子管

时空分辨单细胞测序技术与传统单细胞测序技术有何不同?

时空分辨单细胞测序技术与传统单细胞测序技术主要有以下几个方面的不同:空间信息获取传统单细胞测序技术通常无法提供细胞在组织中的空间位置信息,只是对分离的单细胞进行独立分析。时空分辨单细胞测序技术能够在获取单个细胞基因表达等信息的同时,明确细胞在组织中的具体位置。细胞间相互作用研究传统技术难以直接揭示细

关于单分子测序技术—第三代测序技术的特点介绍

  1、第三代测序技术实现了DNA聚合酶内在自身的反应速度,一秒可以测10个碱基,测序速度是化学法测序的2万倍。  2、第三代测序技术实现了DNA聚合酶内在自身的延续性,一个反应就可以测非常长的序列。二代测序可以测到上百个碱基,但是三代测序就可以测几千个碱基。  3、第三代测序技术的精度非常高,达到

关于单分子测序技术—第三代测序技术的原理介绍

  第三代测序技术原理主要分为两大技术阵营:  第一大阵营是单分子荧光测序,代表性的技术为美国螺旋生物(Helicos)的SMS技术和美国太平洋生物(Pacific Bioscience)的SMRT技术。脱氧核苷酸用荧光标记,显微镜可以实时记录荧光的强度变化。当荧光标记的脱氧核苷酸被掺入DNA链的时

关于DNA测序技术的测序凝胶的银染介绍

  染色过程要求凝胶浸在塑料盘中。因而至少使用两个盘子,大小与玻璃板类似。在盘中加入新鲜溶液之前须用高质量的水洗涤盘子。  1.电泳完毕后用一个塑料片子小心地分开两板,凝胶应该牢固地附着在短玻璃板上。  2. 固定凝胶:将凝胶(连玻璃板)放入塑料盘,用固定/停止溶液浸没,充分振荡20分钟或直至样品中

全新一代测序技术:没有光的测序

  至今,新一代测序技术已经遍布全球上百个基因组测序中心   ――明斯特大学Dag Harmsen   在去年召开的美国微生物学会上,来自明斯特大学的医学微生物学家Dag Harmsen开始听到了有关德国大肠杆菌疫情爆发的传言,这场疫情首先在德国北部地区爆发,感染了至少4000人,夺去了超过

Illumina宣布测序技术大创新

  生物通报道 Illumina公司近日宣布了一系列产品和技术上的创新,从样品制备到系统改进再到数据分析,这有望带来基因组研究上的新突破。随着平台的不断改进,测序速度、准确性、产量和流程都有望改善。   样品制备新品   简化和加速样品制备的过程对改善测序流程和降低周转时间至关重要,这也是测

基因测序技术引发ZL官司

  两家企业围绕英国牛津纳米孔技术公司研发的紧凑型纳米孔测序设备大动干戈。图片来源:nanoprotech.com  一种价格低廉、方便携带的DNA测序方法,即纳米孔测序正待起飞,但该技术已经引发一家产业巨头和一家备受瞩目的创业公司之间的法律战争。近日,控制着基因测序产业的亿明达公司对牛津纳米孔技术

基因测序技术发展论坛

  由科技部批准,中国分析测试协会主办的第十六届北京分析测试学术报告会暨展览会(BCEIA 2015)将于2015年10月27—30日,在北京国家会议中心举办。除大会报告和分会报告之外,以“生命科学”和“科学仪器应用及检测技术发展”为主题的学术论坛也将如期举行。  “生命科学”学术论坛中“基因测序技

浅议基因测序技术的代际

相对于较早出现的Sanger双脱氧核苷酸测序技术(简称Sanger测序),2005年后出现的NGS测序技术,使得基因组研究进入高通量时代,促进了基因组学科学研究及技术转化应用。在基因组学领域,NGS通常是next-generation sequencing的缩写,意为下一代或者新一代测序技术,亦

测序技术如何助推精准医学?

主要应用领域基因测序的一个重要应用是测出生缺陷,包括单基因病、遗传病、无创产前、基因检测,这是目前应用的最多、最成熟的产业。整个肿瘤基因组结构非常复杂,一个肿瘤基因组数据量大约有几十个G,要完整地测一个肿瘤单细胞,则需要更多工具,数据量也更大。移植配型白血病、骨髓配型,包括基因身份证和整个的器官移植