RNA的琼脂糖凝胶电泳实验原理和步骤
一、实验目的掌握植物总RNA非变性胶电泳的原理和方法。二、实验原理RNA电泳可以在变性及非变性两种条件下进行。非变性电泳使用1.0%--1.4%的凝胶,不同的RNA条带也能分开,但无法判断其分子量。只有在完全变性的条件下,RNA的泳动率才与分子量的对数呈线性关系。因此要测定RNA分子量时,一定要用变性凝胶。在需快速检测所提总RNA样品完整性时,配制普通的1%琼脂糖凝胶即可。 三、实验材料、器具及药品蘑菇的总RNA溶液。 电泳仪,电泳槽,电子天平,移液器,枪头,微波炉,紫外透射检测仪等。 琼脂糖,1XTAE电泳缓冲液,0.5μg/ml溴化乙锭(EB)10X载样缓冲液。四、实验步骤(1)用1×TAE电泳缓冲液制作琼脂糖凝胶,加1×TAE电泳缓冲液至液面覆盖凝胶。(2)在超净工作台上,用移液器吸取总RNA样品4μl于封口膜上。在实验台上再加入5μl 1×TAE电泳缓冲液及1μl 的10X载样缓冲液,混匀后,小心加入点样孔。(......阅读全文
互补RNA的定义
中文名称互补RNA英文名称complementary RNA定 义能与另一条核酸(DNA或RNA)链互补的RNA分子。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)
信使RNA的应用
2020年12月,美国食品和药物管理局(FDA)授权一款运用mRNA(信使核糖核酸)技术研制的新冠疫苗的紧急使用许可。2022年2月,南非一公司3日对当地媒体表示,该公司利用已公开的新冠疫苗核酸序列,开发出非洲大陆首款mRNA(信使核糖核酸)新冠疫苗,计划今年底前开展临床试验。 南非当地时间2022
核RNA的概念
中文名称核RNA英文名称nuclear RNA定 义细胞核内的RNA。如核内不均一RNA、核小RNA、核仁小RNA等。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)
互补RNA的功能
中文名称互补RNA英文名称complementary RNA定 义能与另一条核酸(DNA或RNA)链互补的RNA分子。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)
卫星RNA的加工
在具侵染性小分子RNAs的复制机制中,RNA的加工最令学者们兴趣,即是在多聚体形式与相关的线状和环状单体之间的切割与连接过程。1986年有学者发现烟草环斑病毒ToRSV与卫星RNA 正链二聚体在接点处自我切割,产生具有感染性的线状单休。随后,又发现包含有ASBV的正链与负链的二聚体的体外转录休能够在
间隔RNA的概念
中文名称间隔RNA英文名称spacer RNA定 义初级转录物中由基因间序列编码产生的RNA序列。如哺乳动物核糖体核糖核酸(rRNA)的初级转录物位于18S rRNA和28S rRNA间的一段序列,这些序列不出现在成熟的rRNA中。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)
RNA重组的结构
中文名称RNA重组英文名称RNA recombination定 义RNA分子内或分子间发生的共价重新组合。应用学科遗传学(一级学科),分子遗传学(二级学科)
RNA靶向的定义
中文名称RNA靶向英文名称RNA targeting定 义(1)针对RNA分子设计的一种定向作用技术。包括一些小分子化合物(如抗生素)、反义核酸、反式作用核酶、适配体、干扰小RNA等的应用。(2)由于RNA分子本身具有较大的柔性,能专一地与RNA、DNA和蛋白质相互作用,而成为一种特异的靶向试剂。
重组RNA的定义
中文名称重组RNA英文名称recombinant RNA定 义用人工手段进行了改造和重新组合的RNA。重组RNA可以经重组DNA转录获得,也可以使用专门作用于RNA的酶类(如T4 RNA连接酶、Qβ-RNA复制酶、RNA酶Ⅲ)等工具和技术获得。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(
什么是RNA作图?
中文名称RNA作图英文名称RNA mapping定 义对RNA分子在基因上的定位分析。将RNA与相应的DNA杂交后,用单链特异性核酸酶(常用的如S1核酸酶)切去不发生杂交的单链部分,用以分析RNA与相应DNA的关系,包括确定RNA的5′和3′端、外显子和内含子在DNA上的相应位置等。应用学科生物化
RNA解旋酶的概念
RNA解旋酶(RNA helicases)是一个包含了与RNA代谢(从翻译起始、核糖体形成、前mRNA拼接和mRNA降解)的许多方面有关的蛋白质家族。
RNA病毒的简介
RNA病毒(RNA virus) 也称RNA型病毒。植物病毒,除少数例外(如花椰菜花叶病毒Caulif -lower mosaic virus),几乎都是RNA病毒。RNA病毒冠状病毒直径为80~160nm,为有包膜的单股RNA病毒RNA的复制过程中,其错误修复机制的酶的活性很低很低,几乎是没有
RNA干扰的定义
RNA干扰(RNA interference,RNAi)是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。
RNA干扰主体实验
siRNA表达载体构建好后,即可进行RNA干扰主体实验。RNA干扰主体实验的重点在于:成功将siRNA表达载体导入目的细胞如果目的细胞的质粒转染效率较低(低于70%),则应采用腺病毒或慢病毒载体,利用病毒载体的高感染率、高表达特性,更好地开展RNA干扰主体实验。设置好分组和对照按照nature的标准
RNA干扰回复实验
RNA干扰回复实验,主要是为了说明Off-target效应。Off-target效应Off-target effects(脱靶效应)最早由Dharmacon科学家Jackson和他的同事们提出(Fedorov,Y.,et al. "Off-targeting By siRNA Can Induce
微RNA的概念
微RNA(microRNAs;miRNA,又译小分子RNA)是真核生物中广泛存在的一种长约21到23个核苷酸的RNA分子,可调节其他基因的表达。miRNA来自一些从DNA转录而来,但无法进一步转译成蛋白质的RNA(属于非编码RNA)。miRNA通过与靶信使核糖核酸(mRNA)特异结合,从而抑制转录后
反义RNA的功能
在原核生物中反义RNA具有多种功能,例如调控质粒的复制及其接合转移,抑制某些转位因子的转位,对某些噬菌体溶菌-溶源状态的控制等。下文仅举数例。调控细菌基因的表达反义RNA对编码CAP的基因的调控作用已如前述。这里再介绍一下micF RNA对ompF基因的表达的调控。ompF蛋白质是大肠杆菌的外膜蛋白
RNA印迹杂交
RNA印迹杂交1) Northern印迹的制备预备:1.按下述步骤,每泳道加10~20μg总RNA或0.5~1μg poly(A)+RNA进行甲醛/琼脂糖凝胶电泳,将凝胶放在紫外线透照仪上,旁边置一标尺进行拍照。a. 总RNA(10~20μg)用下列溶液在65℃温育5min:总RNA(1
RNA实验方法
Solublization of RNA in Formamidecontributed by James McCaughern-Carucci, Yale UniversityResuspending RNA in Formamide (as reported by Chomczynski et
细胞RNA含量检测
细胞RNA含量检测 实验步骤
细胞RNA含量检测
实验步骤展开
什么是信使RNA?
信使RNA,中文译名“信使核糖核酸”,是由DNA的一条链作为模板转录而来的、携带遗传信息能指导蛋白质合成的一类单链核糖核酸。
什么是反义RNA?
反义RNA是指与mRNA互补后,能抑制与疾病发生直接相关基因的表达的RNA。它封闭基因表达,具有特异性强、操作简单的特点,可用来治疗由基因突变或过度表达导致的疾病和严重感染性疾病。根据反义RNA的作用机制可将其分为3类:Ⅰ类反义RNA直接作用于靶mRNA的S D序列和(或)部分编码区,直接抑制翻译,
反义RNA的定义
反义RNA是指与mRNA互补的RNA分子,也包括与其它RNA互补的RNA分子。由于核糖体不能翻译双链的RNA,所以反义RNA与mRNA特异性的互补结合, 即抑制了该mRNA的翻译。通过反义RNA控制mRNA的翻译是原核生物基因表达调控的一种方式,最早是在E.coli 的产肠杆菌素的Col E1质粒中
反义RNA的来源
细胞中反义RNA的来源有两种途径:第一是反向转录的产物,在多数情况下, 反义RNA是特定靶基因互补链反向转录产物, 即产生mRNA和反义RNA的DNA是同一区段的互补链。第二种来源是不同基因产物,如OMPF基因是大肠杆菌的膜蛋白基因,与透性有关,其反义基因MICFZE则为另一基因。
卫星RNA的定义
卫星RNA是一类小的非编码RNA,基因组大小为200-1500nt,通常不编码蛋白,完全依赖于辅助病毒来完成复制、包被、移动和传播,且和其辅助病毒的基因组不存在序列同源性。部分卫星RNA可以影响辅助病毒在寄主植物上诱发的症状,多数为减轻,少数会加重寄主症状。传统理论认为卫星RNA是通过与辅助病毒竞争
卫星RNA的特点
1、多个卫星RNA分子可与辅助病毒基因组存在于同一衣壳中。2、对宿主植物无独立的侵染性。3、其复制和包装全部依赖于辅助病毒而后者不依赖于前者。4、不具有mRNA活性。5、与辅助病毒的RNA无同源性。6、能干扰辅助病毒的复制从而降低其增殖量。7、可改变辅助病毒所引起的植物病害程度和症状。8、它对辅助病
卫星RNA的加工
在具侵染性小分子RNAs的复制机制中,RNA的加工最令学者们兴趣,即是在多聚体形式与相关的线状和环状单体之间的切割与连接过程。1986年有学者发现烟草环斑病毒ToRSV与卫星RNA 正链二聚体在接点处自我切割,产生具有感染性的线状单休。随后,又发现包含有ASBV的正链与负链的二聚体的体外转录休能够在
RNA沉默的作用
植物可利用 PTGS 和 TGS 来抵抗病毒侵染, 病毒侵染植物后会产生大量病毒来源的小 RNA (virus-derived small interfering RNAs, vsiRNA), 介导对病毒 RNA 的降解或抑制病毒基因的转录; 而在与植物长期共进化过程中, 病毒编码一个或多个RNA沉
微RNA的作用
人类基因组计划结束后,人们发现编码蛋白质的基因只占总基因组的约2%。而占人类基因组95%的非编码序列竟是产生大量非编码RNA的源泉,这些非编码RNA主要充当调控者的角色,在细胞分化凋亡、生物发育、疾病发生等方面均起重要作用。其实,RNA比DNA更为古老,它组成了地球上最早的生命。生命起源初期,没有由