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串联体化实验

试剂、试剂盒 溶液与缓冲液LoTEcDNA标签连接酶实验步骤 实验方案 A 和 B1.将切下并纯化的双标签连接为串联体:2.在 16t℃ 下孵育 2 h。3.将双标签串联体上取样于 8% 的聚丙稀酰胺凝胶的一个泳道,用 100bpladder 作为分子量标准,在室温、80℃ 电泳 3 h。4.EB 染色。5.将含有 400bp 或更大串联体的凝胶区切下。6.如同实验方案 8 所描述的那样,从切下的凝胶片段中纯化 DNA 以分离双标签片段。但不要在 37°C 而是在 65℃ 下孵育,离心前不需干冰/乙醇冰浴。7.沉淀后,用 70% 乙醇冲洗沉淀物 2 次,晾干后重新溶于 40ul 的 LoTE 中......阅读全文

“与诺奖同行”成为清华学生的“小目标”

  “巅峰对话”第二十期开幕式上,杨振宁、Aaron Ciechanover、施一公与学生们探讨“科学中的挑战精神与创新思维”。  活动开始前,1957年诺贝尔物理学奖得主杨振宁在学生的镜头前说了这样一句话:“很开心能参加你们年轻人所组织的这个活动,我想这样的活动对于你们也许会有些用处。”  在清华

污水处理实验装置作用发挥Z大化

 污水处理实验装置主要由粗格栅、提升泵房、细格栅、旋流沉砂池、初次沉淀池、生物反应池、二沉池、接触消毒池和污泥浓缩池的等组成。通过模型试验,污水处理实验装置能够掌握城市污水处理中常用的单元操作技术,了解由这些单元操作组成的处理工艺流程,观察污水、污泥和空气在处理过程中的状态。  污水处理实验装置为各

重组蛋白亚单位疫苗:接种3剂次97%接种者产生中和抗体

  中科院微生物所高福院士团队联合安徽智飞龙科马生物制药有限公司研发的重组蛋白亚单位疫苗(ZF2001)1 期和2期临床试验结果表明,该疫苗安全性良好,没有与疫苗相关的严重不良事件,接种3剂次25μg疫苗的97%入组者产生了可以阻断活病毒的中和抗体,中和抗体水平超过康复患者血清。相关成果3月24日发

自噬流的检测方法

  自噬是真核细胞降解长寿蛋白、错误折叠蛋白和受损细胞器的重要生物学过程。细胞自噬由多个步骤组成, 其中包括: ① 吞噬泡的形成; ② 自噬体的形成; ③ 自噬体与溶酶体融合形成自噬溶酶体; ④ 自噬溶酶体的降解。自噬流是这些步骤在细胞内连续出现的动态过程, 自噬流中的任一环节出现障碍自噬将无法完成

第二届质谱论坛:质谱在生物医药中的应用

清华大学 邓海腾教授   来自清华大学生命学院的邓海腾教授做了题为《Application of mass spectrometry beyond Proteomics》的报告,主要内容是关于质谱在代谢组学方面的应用。   回顾质谱百年发展历史,从

MIDASTM确证Biomarker(二)

鉴定过程共进行两次实验,约30多种蛋白质被鉴定出来,已鉴定的蛋白质如表1所示,其中红色标注的蛋白又通过MIDASTM确认。两次实验结果相比较,重叠率低于75%。许多在第一次实验中被鉴定但可信度较低的蛋白质,第二次实验中并未产生更多的MS/MS图谱,没被再次鉴定出来,增加了鉴定与验证确认的难度。

上海生科院Cancer cell发表癌症研究新成果

  来自中国科学院上海生命科学研究院的研究人员证实,VGLL4是胃癌中一种潜在的肿瘤抑制因子,其可通过直接与YAP竞争结合TEADs抑制胃癌生长。并由此提出了对抗YAP驱动的一些人类癌症的一种新治疗策略。这些研究成果在线发表在2月10日的《癌细胞》(Cancer cell)杂志上。   中科院

双通道尤斯灌流室(Ussing Chamber)

  UC-2M双通道尤斯室(尤斯灌流室)基座用于安装各种规格的尤斯室。尤斯室(尤斯灌流室)及其基座共同组成离体组织体外实验装置。将上皮组织安装在尤斯室中,尤斯室内加入生理溶液,并利用基座恒温和通氧,可使离体的上皮组织在较长时间内继续保持生理活性,以便研究者对上皮功能进行体外研究。   UC-2M是

双通道尤斯灌流室(Ussing Chamber)

  UC-2M双通道尤斯室(尤斯灌流室)基座用于安装各种规格的尤斯室。尤斯室(尤斯灌流室)及其基座共同组成离体组织体外实验装置。将上皮组织安装在尤斯室中,尤斯室内加入生理溶液,并利用基座恒温和通氧,可使离体的上皮组织在较长时间内继续保持生理活性,以便研究者对上皮功能进行体外研究。   UC-2M是

第二十八期质谱沙龙活动报道

  三种新型抗胆碱能药物 立体选择性动力学与代谢研究 军事医学科学院 李敬来老师   接下来,来自军事医学科学院毒物药物研究所的李敬来老师,为大家作了题为《三种新型抗胆碱能药物 立体选择性动力学与代谢研究》的报告。李敬来老师,分别从研究背景、研究目的、研究结果三大方面

脉冲场凝胶电泳的分子质量标准

实验方法原理 PFGE 用于分离很大的 DNA 分子,因而需要很高分子质量的标准。这种标准可以按照 Lauer 等(1977 ) 介绍的方法从噬菌体,如 T7 (40kb)、T2 (166kb)和 G (758kb) 提取获得。但是一个更好的覆盖范围更广的系列标准是 λ 噬菌体 DNA

脉冲场凝胶电泳的分子质量标准

            实验方法原理 PFGE 用于分离很大的 DNA 分子,因而需要很高分子质量的标准。这种标准可以按照 Lauer 等(1977 ) 介绍的方法从噬菌体,如 T7 (40kb)、T2

施一公:克服提纯问题,发布最新酵母剪接体结构

  2018年5月25日,清华大学生命学院施一公教授研究组就剪接体的组装机理与结构研究于《科学》(Science)杂志以长文形式再次发表重大研究成果。这篇题为《完全组装的酿酒酵母剪接体激活前结构》(Structures of the Fully Assembled Saccharomyces cer

施一公再发Science 克服提纯问题 发布最新酵母剪接体结构

  2018年5月25日,清华大学生命学院施一公教授研究组就剪接体的组装机理与结构研究于《科学》(Science)杂志以长文形式再次发表重大研究成果。这篇题为《完全组装的酿酒酵母剪接体激活前结构》(Structures of the Fully Assembled Saccharomyces cer

清华大学生科院Cell:酿酒酵母“催化后剪接体”的结构

  这篇题为Structure of the Post-catalytic Spliceosome from Saccharomyces cerevisiae的论文首次展示了pre-mRNA中3’剪接位点的识别状态,该结构为回答RNA剪接反应过程中pre-mRNA中的3’剪接位点如何被识别,第二步转

又1篇Science!施一公组发表冷冻电镜新成果

  这篇题为《完全组装的酿酒酵母剪接体激活前结构》(Structures of the Fully Assembled Saccharomyces cerevisiae Spliceosome Before Activation)的论文报道了酿酒酵母剪接体处于被激活前阶段的两个完全组装的关键构象——

高温高压反应釜主要用于精密化学合成反应的实验

高温高压反应釜的使用压力为9.8Mpa,搅拌转速20~800r/min可调,工作温度300℃,主体接触物料材料为1Cr18Ni9Ti不锈钢,搅拌桨叶的形式为推进式,电机为普通直流电机;常规釜盖开口:气相口配针形阀(进、排气、抽真空用),液相口配针形阀及釜内插底管(反应过程中可用来取样或上出料用),加

港大回应治疗艾滋病药物尚处于动物实验阶段

  IT之家4月28日消息 此前,有消息港大研究人员研发出药物可预防和治疗艾滋病,但昨日香港大学李嘉诚医学院微生物学系教授、艾滋病研究所所长对媒体表示,目前尚为动物实验结果,媒体报道存在夸大成分,未来将进行人体实验,造福病人。  据了解,此次港大研究团队利用基因工程技术,研制出一种新型的串联双价广谱

新型双压线性离子阱质谱仪给蛋白质组学带来革...(一)

Tonya Pekar Second, Justin Blethrow, Jae C. Schwartz, Vlad Zabrouskov, Thermo Fisher Scientific, San Jose, CA关键词:LTQ Velos 线性离子阱,蛋白质学,蛋白鉴定,肽测序、灵敏度、蛋白质

历时十一年!施一公组完成酵母剪接体结构最后拼图

  3月15日,清华大学生命学院施一公教授研究组就剪接体的机理与结构研究,于《细胞》(Cell)期刊发表题为《催化激活状态的酵母剪接体结构揭示RNA剪接分支反应的机理》(Structures of the Catalytically Activated Yeast Spliceosome Revea

第六届中国北京国际食品安全高峰论坛——快速检测技术

  ——快速检测技术专场   2013年4月1~2日,由北京食品学会以及北京食品协会主办,太平洋国际展览(北京)有限公司承办的第六届中国北京国际食品安全高峰论坛在北京国家会议中心拉开帷幕,来自高等院校、科研机构、企事业单位的国内外专家、知

细胞状态差的三大原因实例分析

我们在做技术支持时常常接到用户来电:“老师,我的细胞状态很差,不知道怎么了,您能帮我分析下原因吗?” 细胞状态很差,常常出现的现象是:细胞边缘不清晰、细胞不饱满、折光性差、背景比较脏、黑点很多、细胞碎片多(细胞凋亡后的细胞碎片)、单个细胞内有空泡(凋亡)且空泡比较多;如果细胞出现老化,也就

应用黏粒载体构建基因组DNA文库

            实验方法原理 在 λ 噬菌体中构建基因组 DNA 文库的步骤与在黏粒载体中的步骤基本一致。在这两种系统中,真核 DNA 在体外与载体 DNA 连接,形成能包装到 λ 噬菌体颗粒中

应用黏粒载体构建基因组DNA文库

在 λ 噬菌体中构建基因组 DNA 文库的步骤与在黏粒载体中的步骤基本一致。在这两种系统中,真核 DNA 在体外与载体 DNA 连接,形成能包装到 λ 噬菌体颗粒中的多联体。构建在 λ 噬菌体中的文库以具有感染性的重组噬菌体形式贮存和增殖。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理

应用黏粒载体构建基因组DNA文库

实验方法原理 在 λ 噬菌体中构建基因组 DNA 文库的步骤与在黏粒载体中的步骤基本一致。在这两种系统中,真核 DNA 在体外与载体 DNA 连接,形成能包装到 λ 噬菌体颗粒中的多联体。构建在 λ 噬菌体中的文库以具有感染性的重组噬菌体形式贮存和增殖。实验材料 T4 噬菌体 DNA 连接酶牛小肠碱

实验室中识破各种污染拯救细胞的方法

小伙伴们遇到过这种情况吗?当您的课题进行到白热化程度时却发现细胞被污染了此时大家的心情可谓五味杂陈 形容一下就是问君能有几多愁,眼泪恰似一江春水向东流不过,别担心逍鹏生物炼就火眼金睛帮助大家识破各种污染,拯救您的细胞 我们先来看看污染的真面目,总结下来无非以下几种类型: 

PCR产物的平末端克隆

常规采用的技术路线,实验一般利用噬菌体 T4 DNA 聚合酶等补平扩增 DNA 片段的末端(Weiner 1993; Chuang et al. 1995)。Liu 与 Schwartz (1992) 发现在连接反应的温育过程中,当反应液中存在过量的限制性内切核酸酶能显著地增加重组质粒的产率

PCR产物的平末端克隆

            实验方法原理 靶基因经 PCR 扩增,样品进行必要的纯化回收后,接下来用平末端进行连接克隆也是分子生物学实验中常规采用的技术路线,实验一般利用噬菌体 T4 DNA 聚合酶等补平扩

PCR产物的平末端克隆

靶基因经 PCR 扩增,样品进行必要的纯化回收后,接下来用平末端进行连接克隆也是分子生物学实验中常规采用的技术路线,实验一般利用噬菌体 T4 DNA 聚合酶等补平扩增 DNA 片段的末端(Weiner 1993; Chuang et al. 1995)。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译

微流控芯片技术应对临床检验医学的挑战

一、微流控与微流控芯片微流控(Microfluidics)的含义是微尺度下的流体控制,其研究对象是使用微米级通道操控纳升级以下微量液体的系统[1-3]。鉴于芯片是实现微流体控制的主要平台,因而微流控芯片(Microfluidic chip)是微流控的主要研究内容。微流控芯片的制作主要依托于MEMS(