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RNA大量转录合成

实验材料 模板 DNA 或质粒试剂、试剂盒 TE TE 饱和酚 氯仿异内醇 3mol LNaAc 无水乙醇 5X 转录缓冲液 lOOmmoL LDTT RNasin rATPrGTPrUTPrCTP SF6T3 或 T7RNA 聚合酶 异戊醇 DNase 7.5mol L 乙酸铵 无水乙醇 乙醇实验步骤 一材料与设备1) 模板 DNA 或质粒2)TE3)TE 饱和酚:氯仿4) 氯仿:异内醇 (24:1)5)3mol/LNaAc(pH5.2)6) 无水乙醇7)5X 转录缓冲液:200 mmol/LTris-HCl(pH7.9),30 mmol/LMgCl2,10 mmol/L 亚精胺,50 mmol/LNaCl8)lOOmmoL/LDTT9)RNasin10)rATP,rGTP,rUTP,rCTP,各 2.5 mmoI/L11)SF6,T3 或 T7RNA 聚合酶12)TE-饱和的酚:氯仿:异戊醇 (25:24:1,PH4.5)1......阅读全文

Cell:武汉大学阐明真核基因中的转录调控机制

  近日,来自武汉大学、加州大学圣地亚哥分校的研究人员在新研究中证实,SR蛋白与7SK和启动子相关新生(Nascent )RNA协同作用,促进了转录过程中停顿的聚合酶释放。这一研究发现为阐明真核基因中的转录调控机制,深入了解相关疾病提供了重要的理论依据。相关论文发表在5月9日的《细胞》(Cell

3.1.1 RNA 标准转录反应

利用 DNA 聚合酶 I 的大片段(Klenow 酶)的 3'— 5'外切酶活性将 3'黏性末端转化成平末端。具体方法是在体外转录体系尚未加入核苷酸和 RNA 聚合酶时,加入 Klenoow 片段 (终浓度为 5U/ug),于 22℃ 孵育 15mim, 然后再加入核苷酸混合物和RNA 聚合酶实验材

《PNAS》:RNA“质检员”被发现

在8月14日的《PNAS》网络版上,来自日本京都大学的研究人员发表的最新研究成果发现,脊椎动物细胞内有一套严格的"质量管理"机制来确保只有正确的信息从细胞核传递到细胞质,以防止不可靠信息在蛋白质合成过程中发挥作用。 DNA复制过程是以DNA双链中的一条链为模板合成的RNA,而由于合成蛋白组的核糖体在

细胞周期-1

以有丝分裂方式增殖的细胞从一次分裂结束到下一次分裂结束所经历的过程。这一过程周而复始。细胞周期是50年代细胞学上重大发现之一。在这之前认为有丝分裂期是细胞增殖周期中的主要阶段,而把处于分裂间期的细胞视为细胞的静止阶段。1951 年霍华德等用32P-磷酸盐标记了蚕豆根尖细胞,通过放射自显影研究根尖

RNA 标准转录反应

实验材料 模板 DNA 或质粒试剂、试剂盒 TE 异丙醇 3mol LNaAc 无水乙醇 5×转录缓冲液 l00 mmol L DTT RNasin rATPrGTPrUTP 各 2.5 mmol L [α42P] rCTP SPGT3 或 T7RNA 聚合酶 TE-饱和的酚氯仿异戊醇 DN

光活化的核苷酸类似物介导的RNA-蛋白的交联实验

实验方法原理 光化学交联技术是研究核搪核蛋内复合物中 RNA 与蛋白的相互作用的有效手段。 其基本原理是未经任何化学修饰的 RNA -蛋白天然复合物在短波长紫外线(254 nm ) 照射时,RNA 中的核苷酸和蛋白质中的氨基酸会产生光化学反应,转变为活性状态,进而形成分子间共价交联。实验材料

光活化的核苷酸类似物介导的RNA-蛋白的交联实验

            实验方法原理 光化学交联技术是研究核搪核蛋内复合物中 RNA 与蛋白的相互作用的有效手段。 其基本原理是未经任何化学修饰的 RNA -蛋白天然复合物在短波长紫外线(254 nm

正粘病毒化学组成及其功能(一)

流感病毒由68%~70%的蛋白质、1%~2%的核糖核酸(RNA)、20%~25%脂质和5%~8%的糖组成。病毒蛋白质含有5种多肽,即血凝素、神经氨酸酶、基质蛋白、核蛋白和多聚酶。  (1) 正粘病毒基因组组成 〖HT5SS〗流感病毒的基因组是由8个分节段的单链、负股RNA组成,

Access RT-PCR系统问题解答

1)什么是Access RT-PCR?2)什么是Access RT-PCR系统?3)总RNA能否作为模板,是否一定需要 poly(A)+RNA?4)使用Access RT-PCR系统需要的RNA的量是多少?5)同一般常用方法相比较,Access RT-PCR系统有哪些优点?6)使用Access RT

光活化的核苷酸类似物介导的RNA-蛋白的交联实验

光化学交联技术是研究核搪核蛋内复合物中 RNA 与蛋白的相互作用的有效手段。 其基本原理是未经任何化学修饰的 RNA -蛋白天然复合物在短波长紫外线(254 nm ) 照射时,RNA 中的核苷酸和蛋白质中的氨基酸会产生光化学反应,转变为活性状态,进而形成分子间共价交联。本实验来源「RNA 实验指导手

分子生物学实验基础知识

分子生物学是在生物化学基础上发展起来的,以研究核酸和蛋白质结构、功能等生命本质的学科,在核酸、蛋白质分子水平研究发病、诊断、治疗和预后的机制。其中基因工程(基因技术,基因重组)是目前分子生物学研究热点,这些技术可以改造或扩增基因和基因产物,使微量的研究对象达到分析水平,是研究基因调控和表达的方法,也

Nat Catalysis:RNA是如何保证被准确转录的?

  生命的信息通过信使RNA的转录和蛋白质的翻译在我们的基因组DNA中编码以执行细胞功能。为了确保准确的转录, RNA聚合酶II将合成并校正信使RNA以去除任何不匹配的错误。  虽然已知RNA聚合酶II对于确保转录的准确性至关重要,但对于这种酶如何完成这项艰巨的任务而言,这是一个长期存在的难题。科学

脱落酸的相关知识

脱落酸是植物五大天然生长调节剂之一,生物学种常用作植物组织培养。脱落酸在衰老的叶片组织、成熟的果实、种子及茎、根部等许多部位形成。水分亏缺可以促进脱落酸的形成。 脱落酸的作用: 1.一直与促进生长,外施脱落酸浓度大时抑制茎、下胚轴、根、胚芽鞘或叶片的生长.浓度低时却促进离体黄瓜子叶

对RNA世界假说产生重要影响的研究

  RNA世界假说,英文为RNA World hypothesis,是科学依据多年的科学研究而提出的一条关于生命科学的理论。其内容为:生命进化的早期,没有蛋白质(酶),某些RNA可以催化RNA的复制——也就是说RNA是唯一的遗传物质,是生命的源头。  RNA自我复制的RNA世界假说的一个重要组成部分

RNA干涉实验——采用RNaseⅢ制备siRNA分子实验

实验方法原理首先在体外以长为 200~1000 bp 的 cDNA 为模板转录合成正义与反义的单链 RNA 分子,然后通过退火形成长的 dsRNA 分子,再用Diccr 核酸酶进行切割得到 siRNA 分子的混合物,通过纯化去除没有被切割的双链 RNA 分子和 DNA 模板以后,siRNA 分子就可

揭秘持续肆虐的新型冠状病毒的样子。

  2020年的春节,是个特殊的春节,各大公共场所停止营业,就连饭店和超市的顾客也比往常少了许多。而这些,都是由于2019年12月出现的一种病毒——2019新型冠状病毒(2019-novel coronavirus, 2019-nCoV)。  国家呼吸系统疾病临床医学研究中心主任、中国工程院院士钟南

PCR技术应用进展

   PCR技术自1985年建立以来,发展之迅速、应用之广泛,表明其具有强大的生命力.近些年来,基于PCR的基本原理,许多学者充分发挥创造性思维,对PCR技术进行研究和改进,使PCR技术得到了进上步地完善,并在此基础上派生出了许多新的用途. 原位PCR技术  原位PCR就是在组织

PCR技术(六):PCR技术应用进展

PCR技术自1985年建立以来,发展之迅速、应用之广泛,表明其具有强大的生命力.近些年来,基于PCR的基本原理,许多学者充分发挥创造性思维,对PCR技术进行研究和改进,使PCR技术得到了进上步地完善,并在此基础上派生出了许多新的用途. 原位PCR技术  原位PCR就是在组织细胞里进行PCR

如何做原核表达(prokaryotic expression)(二)

几个常用的启动子和诱导调控表达系统最早应用于的表达系统是Lac乳糖操纵子,由 启动子Plac + 操纵基因lacO +结构基因组成。其转录受CAP正调控和lacI负调控。lacUV5突变能够在没有CAP的存在下更有效地起始转录,该启动子在转录水平上只受lacI 的调控,因而随后得到了更广泛采用。la

PNAS:研究人员开发癌症基因表达分析新技术

  密歇根大学综合癌症中心的研究人员开发了一项新技术,可更好地了解癌细胞与正常细胞中RNA有可能存在差异的原因,并将推动更深入地了解肿瘤全基因组测序检测。研究人员将这一成果发布在《美国科学院院刊》(PNAS)杂志上。   当研究人员测序癌细胞的RNA时,他们可以将之与正常细胞进行比较,看看哪里存在

RNA分析的几个热点领域及主要技术路线

DNA,RNA和蛋白质是三种重要的生物大分子,是生命现象的分子基础。基因组DNA中的基因通过转录为mRNA并进一步翻译为蛋白质,很多种类的蛋白质在最终发挥功能时又经历磷酸化、糖基化、酶原激活等翻译后修饰。DNA的遗传信息决定生命的主要性状,而mRNA在信息传递中起很重要的作用。其它两大类RNA,rR

广州生物院发现抗结核一线药物吡嗪酰胺的新靶标

  根据世界卫生组织的最新统计,全世界每年新发结核病病例从900万增加至1400万,每年死亡140-150万人(2015年死亡180万人)。结核病(tuberculosis,TB)是由结核分枝杆菌( Mycobacterium tuberculosis, Mtb)引发的主要通过呼吸传播的致死性传染病

分子杂交

一、杂交通过碱基对之间非共价键(主要是氢键)的形成即出现稳定的双链区,这是核酸分子杂交的基础。杂交分子的形成并不要求两条单链的碱基顺序完全互补,所以不同来源的核酸单链只要彼此之间有一定程度的互补顺序(即某种程度的同源性)就可以形成杂交双链。分子杂交可在DNA与DNA、RNA与RNA或RNA与DNA的

分子杂交技术(一)

一、概述  前面已经介绍了核酸分子单链之间有互补的碱基顺序,通过碱基对之间非共价键(主要是氢键)的形成即出现稳定的双链区,这是核酸分子杂交的基础。杂交分子的形成并不要求两条单链的碱基顺序完全互补,所以不同来源的核酸单链只要彼此之间有一定程度的互补顺序(即某种程度的同源性)就可以形成杂交双链。分子杂交

分子杂交技术(一)

一、概述  前面已经介绍了核酸分子单链之间有互补的碱基顺序,通过碱基对之间非共价键(主要是氢键)的形成即出现稳定的双链区,这是核酸分子杂交的基础。杂交分子的形成并不要求两条单链的碱基顺序完全互补,所以不同来源的核酸单链只要彼此之间有一定程度的互补顺序(即某种程度的同源性)就可以形成杂交双链。分子杂交

细胞周期的间期与分裂期阶段介绍

细胞周期(cell cycle)是指细胞从一次分裂完成开始到下一次分裂结束所经历的全过程,分为间期与分裂期两个阶段。(一) 间期间期又分为三期、即DNA合成前期(G1期)、DNA合成期(S期)与DNA合成后期(G2期)。1. G1期(first gap) 从有丝分裂到DNA复制前的一段时期,又称

反义RNA的制备实验

RNA 也可以由线状 DNA 为模板,通过 RNA 聚合酶(如T3、T7 或 SP6 ) 在体外合成。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编:郑晓飞。实验材料限制性内切核酸酶酶水解模板 DNA大肠杆菌 DNA 多聚酶胰 DNaseⅠ试剂、试剂盒氯仿苯酚乙醇DTTrNTP溶液转录缓冲液Tris-Cl盐

2015病毒领域重大研究盘点

  2016年2月14日/生物谷BIOON/--近期塞卡病毒在赤道附近国家开始大肆传播,引起了非常多的新生儿出现“小头症”。虽然这个病毒对于成人来说症状非常轻微,然而对于非常脆弱的孕妇和新生儿而言,简直像噩梦一样的存在。近两年来,仅仅巴西一国,就出现了超过两千例由塞卡病毒引起的小头症。这些年来,病毒

Nature Methods:这个蛋白 能可视化活细胞发育周期的“盲区”

  G1期(first gap):从有丝分裂到DNA复制前的一段时期,又称合成前期,此期主要合成RNA和核糖体。该期特点是物质代谢活跃,迅速合成RNA和蛋白质,细胞体积显著增大。这一期的主要意义在于为下阶段S期的DNA复制作好物质和能量的准备。  S期(synthesis):即DNA合成期,在此期,

RNA的提取和cDNA合成原理和实验方法(3)

第三节 植物病毒RNA 提取大多植物病毒RNA 为单链RNA ,并且其极性与mRNA 极性相同,植物病毒RNA 提取较为简单,一般使用酚氯仿即可获得满意结果。一、材料提纯TMV病毒液(10mg/ml)。二、设备冷冻台式离心机,低温真空干燥仪,电泳仪,电泳槽。三、试剂TE-饱和酚:氯仿(1:1),氯仿