免疫电泳(immunoelectrophoresis)实验
免疫电泳(immunoelectrophoresis )是将电泳和琼脂扩散结合起来,用于分析抗原组成的一种定型方法,具有灵敏快速的优点。该实验可分为如下两个步骤:1.电泳 将待检的可溶性物质在琼脂板上进行电泳分离。由于各种可溶性蛋白分子的大小、质量与所带电荷不同,在电场的作用下,其带电分子的运动速度具有一定的规律,因此通过电泳能够把混合物中的各种不同成分分离开。2.琼脂扩散 电泳后在琼脂槽中加入相应抗血清,然后置湿盒内进行双扩散。当抗原与抗体相遇且比例适合时,可形成不溶性复合物,出现特异性沉淀线,根据沉淀线的数量和位置,可鉴定分析各种抗原成分及其性质。【材料】1.抗原:正常人血清;抗体:兔抗人血清。2.1% 离子琼脂(用离子强度 0.05 、pH8.6 的巴比妥缓冲液配制)。3.载玻片、直径 3mm 的打孔器、2 × 6 × 6 聚苯乙烯塑料条、微量加样器、电泳仪、吸管等。【方法】1.制琼脂板 载玻片放于水平台面上,将塑料条放置......阅读全文
免疫分析法的电泳技术
基本原理:免疫扩散与电泳技术相结合。 类型:对流免疫电泳、火箭免疫电离、免疫电泳、双向免疫电泳(交叉免疫电泳) 对流免疫电泳 基本原理:多数蛋白质抗原在碱性缓冲液中带负电荷,在电泳时从负极向正极移动。抗体在碱性缓冲液只带微弱的负电 荷,且相对分子质量较大,电泳力较小,在琼脂电渗力作用 下由
火箭免疫电泳基本原理
火箭免疫电泳(Rocket immunoelectrophoresis)基本原理:也称免疫扩散,抗原在含有定量抗体的琼脂糖中泳动,两者比例适宜时,在较短时间内生成锥形的沉淀峰。在一定浓度范围内,沉淀峰的高度与抗原含量成正比。
免疫电泳实验_打孔与加样
试剂、试剂盒Tris-巴比妥缓冲液贮液电极缓冲液琼脂糖溶液实验步骤打孔器直径可为 2.0 mm、2.5 mm、4.0 mm,相应于 1.5 mm 厚度凝胶的样品体积为 2 μl、5 μl 和 10 μl。最佳加样量为 1~15 μl。加样时,针要插入孔中的所有方向,以防止空气在加样孔中的 “座垫”
火箭免疫电泳的实验材料介绍
(一)材料和试剂1、PH8.6,0.1M巴比妥--巴比妥钠缓冲液巴比妥钠 10.3 g巴比妥 1.84 g硫柳汞 100 mg(防腐剂)蒸馏水加热溶解并定容至500ml2、1%预复琼脂(或琼脂糖)1g琼脂(或琼脂糖)加蒸馏水100ml溶化即可。3、1.5%琼脂糖凝胶1.5g琼脂糖加50ml蒸馏水置水
火箭免疫电泳实验的材料介绍
(一)材料和试剂 1、PH8.6,0.1M巴比妥--巴比妥钠缓冲液 巴比妥钠 10.3 g 巴比妥 1.84 g 硫柳汞 100 mg(防腐剂) 蒸馏水加热溶解并定容至500ml 2、1%预复琼脂(或琼脂糖) 1g琼脂(或琼脂糖)加蒸馏水100ml溶化即可。 3、1.5%琼脂糖凝
火箭免疫电泳实验材料和设备
(一)材料和试剂1、PH8.6,0.1M巴比妥--巴比妥钠缓冲液巴比妥钠 10.3 g巴比妥 1.84 g硫柳汞 100 mg(防腐剂)蒸馏水加热溶解并定容至500ml2、1%预复琼脂(或琼脂糖)1g琼脂(或琼脂糖)加蒸馏水100ml溶化即可。3、1.5%琼脂糖凝胶1.5g琼脂糖加50ml蒸馏水置水
多克隆抗体的免疫电泳实验
【实验原理】 免疫电泳又称为γ球蛋白电泳或免疫球蛋白电泳技术,这是一种能够判断血液中三种免疫球蛋白IgM'' IgG'' IgA含量水平的实验方法。在这项实验技术中,首先利用蛋白质的分子量和所带电荷的比值运用水平琼脂糖凝胶电泳技术将蛋白质进行分离,然后将特异性
多克隆抗体的免疫电泳实验
【实验原理】免疫电泳又称为γ球蛋白电泳或免疫球蛋白电泳技术,这是一种能够判断血液中三种免疫球蛋白IgM'' IgG'' IgA含量水平的实验方法。在这项实验技术中,首先利用蛋白质的分子量和所带电荷的比值运用水平琼脂糖凝胶电泳技术将蛋白质进行分离,然后将特异性的抗体
对流免疫电泳实验失败原因
1.电泳液的PH值不对。2.电极插反了。3.抗原抗体含量低了
沉淀反应实验:对流免疫电泳
对流免疫电泳是在琼脂扩散基础上结合电泳技术而建立的一种简便而快速的方法。此方法能在短时间内出现结果,故可用于快速诊断,敏感性比双向扩散技术高10-15倍。血清蛋白在PH8.6条件下带负电荷,所以在电场作用下都向E极移动。但由于抗体分子在这样的PH条件下只带微弱的负电荷,而且它的分子量又较大(为r球蛋
火箭免疫电泳实验原理及操作
一、实验原理火箭免疫电泳(rocket immunoelectrophoresis,RIEP)是将单向免疫扩散和电泳相结合的一种定量检测技术。电泳时,含于琼脂凝胶中的抗体不发生移动,而在电场的作用下促使样品中的抗原向正极泳动。当抗原与抗体分子达到适当比例时,形成一个形状如火箭的不溶性免疫复合物沉
火箭免疫电泳实验的操作步骤
1、抗原、抗体浓度的选择以分别固定抗原含量与抗体浓度的方法,选取最小抗原量与最低抗体浓度,在免疫电泳后能出现最清晰项端狭窄且尖的锥形沉淀峰,长达2~5cm者为标准。一般抗原用量为0.5~5微克,抗血清用量为5~10微升,稀释度于1:10~1:200之间进行选择。2、预复琼脂玻板的制备将溶化的1%预复
对流免疫电泳的实验原理
在pH值8.6的琼脂凝胶中,抗体球蛋白只带有微弱的负电荷,而且它分子又较大,所以泳动慢,受电渗作用的影响也大,往往不能抵抗电渗作用,故在电泳时,反而向负极倒退。而一般抗原蛋白质常带较强的负电荷,分子又较小,所以泳动快,虽然由于电渗作用泳动速度减慢,但仍能向正极泳动。如将抗原置阴极,抗体置阳极,电泳时
火箭免疫电泳的简介
火箭免疫电泳(rocket immunoelectrophoresis,RIEP)是将单向免疫扩散和电泳相结合的一种定量检测技术。 电泳时,含于琼脂凝胶中的抗体不发生移动,而在电场的作用下促使样品中的抗原向正极泳动。当抗原与抗体分子达到适当比例时,形成一个形状如火箭的不溶性免疫复合物沉淀峰,峰
火箭免疫电泳的概念简介
火箭免疫电泳(rocket immunoelectrophoresis,RIEP)是将单向免疫扩散和电泳相结合的一种定量检测技术。电泳时,含于琼脂凝胶中的抗体不发生移动,而在电场的作用下促使样品中的抗原向正极泳动。当抗原与抗体分子达到适当比例时,形成一个形状如火箭的不溶性免疫复合物沉淀峰,峰的高度与
火箭免疫电泳的定义和应用介绍
火箭免疫电泳(rocket immunoelectrophoresis,RIEP)是将单向免疫扩散和电泳相结合的一种定量检测技术。电泳时,含于琼脂凝胶中的抗体不发生移动,而在电场的作用下促使样品中的抗原向正极泳动。当抗原与抗体分子达到适当比例时,形成一个形状如火箭的不溶性免疫复合物沉淀峰,峰的高度与
火箭免疫电泳是什么?
火箭免疫电泳(rocket immunoelectrophoresis,RIEP)是将单向免疫扩散和电泳相结合的一种定量检测技术。电泳时,含于琼脂凝胶中的抗体不发生移动,而在电场的作用下促使样品中的抗原向正极泳动。当抗原与抗体分子达到适当比例时,形成一个形状如火箭的不溶性免疫复合物沉淀峰,峰的高度与
火箭免疫电泳的实验材料和设备
(一)材料和试剂1、PH8.6,0.1M巴比妥--巴比妥钠缓冲液巴比妥钠 10.3 g巴比妥 1.84 g硫柳汞 100 mg(防腐剂)蒸馏水加热溶解并定容至500ml2、1%预复琼脂(或琼脂糖)1g琼脂(或琼脂糖)加蒸馏水100ml溶化即可。3、1.5%琼脂糖凝胶1.5g琼脂糖加50ml蒸馏水置水
单向、双向免疫琼脂扩散和免疫电泳(图)(四)
(三) 免疫电泳(Immunoelectrophoresis)——示教一、基本原理免疫电泳法是将凝胶电泳与双向免疫扩散两种技术相结合的一种实验方法。在电场作用下标本中各组分因电泳迁移率不同而分成区带,然后沿电泳平行方向将凝胶挖一沟槽,将抗体加入沟槽内,使抗原与抗体相互扩散而形成沉淀线。根据沉淀线的数
交叉亲和免疫电泳的概念
中文名称交叉亲和免疫电泳英文名称crossed affinity immunoelectrophoresis定 义在第一向电泳的凝胶中加入能与待查抗原(蛋白质)结合的成分(如凝集素),电泳分离后,与该成分(凝集素)结合的抗原保留于凝胶中,再在含有抗体的凝胶中沿着垂直于第一次分离的方向上进行第二向电
交叉亲和免疫电泳的定义和应用介绍
中文名称交叉亲和免疫电泳英文名称crossed affinity immunoelectrophoresis定 义在第一向电泳的凝胶中加入能与待查抗原(蛋白质)结合的成分(如凝集素),电泳分离后,与该成分(凝集素)结合的抗原保留于凝胶中,再在含有抗体的凝胶中沿着垂直于第一次分离的方向上进行第二向电
关于免疫诊断方法—沉淀反应(precipitation)概述
可溶性抗原与相应抗体在有适量电解质存在下,出现肉眼可见的沉淀现象,称为沉淀反应。参与反应的抗原称沉淀原(precipitinogen),抗体称沉淀素(precipitin)。沉淀原可以是多糖、蛋白质、类脂等,由于其体积小,相对反应面积大,故试验时需对抗原进行稀释,以避免后带现象。应用较早的沉淀反
单向定量免疫电泳(火箭免疫电泳)
实验原理单向定量免疫电泳又称火箭电泳(rocket immunoelectrophoresis)。在琼脂内掺入适量的抗体,在电场作用下,定量的抗原泳动遇到琼脂内的抗体,形成抗原—抗体复合物沉淀下来。走在后面的抗原继续在电场作用下向正极泳动,遇到琼脂内沉淀的抗原—抗体复合物,抗原量的增加造成抗原过
常见的免疫检测技术
(一)皮内试验 (intrader rpmal test,ID) 宿主在病原体刺激后,体内产生亲细胞性抗体(IgE和IgG4)。当其与相应抗原结合后,肥大细胞和嗜碱性粒细胞脱颗粒,释放生物活性物质,引起注射抗原的局部皮肤出现皮丘及红晕,以此便可判断体内是否某有种特异性抗体存在。 (二)免疫扩散(
关于火箭免疫电泳的实验操作步骤介绍
1、抗原、抗体浓度的选择 以分别固定抗原含量与抗体浓度的方法,选取最小抗原量与最低抗体浓度,在免疫电泳后能出现最清晰项端狭窄且尖的锥形沉淀峰,长达2~5cm者为标准。一般抗原用量为0.5~5微克,抗血清用量为5~10微升,稀释度于1:10~1:200之间进行选择。 2、预复琼脂玻板的制备
火箭免疫电泳的实验操作注意事项
1、抗原、抗体浓度的选择以分别固定抗原含量与抗体浓度的方法,选取最小抗原量与最低抗体浓度,在免疫电泳后能出现最清晰项端狭窄且尖的锥形沉淀峰,长达2~5cm者为标准。一般抗原用量为0.5~5微克,抗血清用量为5~10微升,稀释度于1:10~1:200之间进行选择。2、预复琼脂玻板的制备将溶化的1%预复
对流免疫电泳实验报告结果分析
对流免疫电泳是在琼脂扩散基础上结合电泳技术而建立的一种简便而快速的方法。此方法能在短时间内出现结果,故可用于快速诊断,敏感性比双向扩散技术高10~15倍。对流免疫电泳实质上是定向加速度的免疫双扩散技术,其基本原理是:在琼脂板上打两排孔,左侧各孔加人待测抗原,右侧孔内放人相应抗体,抗原在阴极侧,抗体在
免疫电泳实验技术原理和操作方法
(一)原理免疫电泳是琼脂平板电泳和双相免疫扩散两种方法的结合。将抗原样品在琼脂平板上先进行电泳,使其中的各种成分因电泳迁移率的不同而彼此分开,然后加入抗体做双相免疫扩散,把已分离的各抗原成分与抗体在琼脂中扩散而相遇,在二者比例适当的地方,形成肉眼可见的沉淀弧。该方法可以用来研究:①抗原和抗体的相对应
免疫电泳
实验概要蛋白质是一种两性电解质,它同时具有游离氨基和羧基。每种蛋白质都有自己的等电点。在等电点时,蛋白质所带的正负电荷相等。在pH值大于等电点的溶液中,羧基解离多,此时蛋白质带负电荷,带负电荷的蛋白质在电场中向正极移动;在pH值小于等电点的溶液中,氨基解离多,此时蛋白质带正电荷,在电场中向负极移动。
免疫电泳
实验概要本实验介绍了免疫电泳(immunoelectrophoresis,IE)实验原理及操作流程。蛋白质是一种两性电解质,它同时具有游离氨基和羧基。每种蛋白质都有自己的等电点。在等电点时,蛋白质所带的正负电荷相等。在pH值大于等电点的溶液中,羧基解离多,此时蛋白质带负电荷,带负电荷的蛋白质在电场中