乳酸脱氢酶同工酶的分离(琼脂糖凝胶电泳法)

一 原理:来源于同一个体或组织,能催化同一反应,而蛋白结构不同的酶称为同工酶。 同工酶的蛋白结构有差别,它们的理化性质也就有所差异。因此可用电泳或其它方法将它们分离开来。例如乳酸脱氢酶(LDH)同工酶,它们都能催化乳酸脱氢产生丙酮酸,但经电泳法分离后,就有5个同工酶区带。 由于同工酶在不同组织,器官中的分布不同,即具有组织器官的特点。因此已利用同工酶的酶谱作临床诊断的依据,也被利用于生物分类及遗传育种等工作中。 本实验用琼脂糖凝胶电泳法分离人血清乳酸脱氢酶5个同工酶(LDH1、LDH2、LDH3、LDH4、LDH5)。 血清乳酸脱氢酶的辅酶是NAD+,当乳酸脱氢酶催化乳酸脱氢时, NAD+ 即被还原成NADH + H+。 二 试剂: 1、巴比妥—HCl缓冲液(pH8.4 0.1M):溶17.0g巴比妥钠于600ml水,加入1M HCl溶液23.5ml,再加蒸馏水至1000ml。 2、0.5M乳酸钠溶液:......阅读全文

血清乳酸脱氢酶同工酶(LDHI)抽血前注意事项

  1、抽血前一天不吃过于油腻、高蛋白食物,避免大量饮酒。血液中的酒精成分会直接影响检验结果。  2、体检前一天的晚八时以后,应开始禁食12小时,以免影响检测结果。  3、抽血时应放松心情,避免因恐惧造成血管的收缩,增加采血的困难。

临床化学检查方法介绍血清乳酸脱氢酶同工酶(LDHI)

血清乳酸脱氢酶同工酶(LDHI)介绍:  人组织中的乳酸脱氢酶(LDH)用电泳法可以分离出5种同工酶区带,根据其电泳迁移率的快慢,依次命名为LDH1,LDH2,LDH3,LDH4,LDH5。不同组织的乳酸脱氢酶同工酶分布不同,存在明显的组织特异性,人心肌、肾和红细胞中以LDH1和LDH2最多,骨骼肌

关于血清乳酸脱氢酶同工酶(LDHI)的注意事项介绍

  (1)抽血前的注意事项  ① 抽血前一天不吃过于油腻、高蛋白食物,避免大量饮酒。血液中的酒精成分会直接影响检验结果。  ② 体检前一天的晚八时以后,应开始禁食12小时,以免影响检测结果。  ③ 抽血时应放松心情,避免因恐惧造成血管的收缩,增加采血的困难。  (2)抽血后应注意  ① 抽血后,需在

血清乳酸脱氢酶同工酶(LDHI)的抽血后注意事项

  1、抽血后,需在针孔处进行局部按压3-5分钟,进行止血。注意:不要揉,以免造成皮下血肿。  2、按压时间应充分。各人的凝血时间有差异,有的人需要稍长的时间方可凝血。所以当皮肤表层看似未出血就马上停止压迫,可能会因未完全止血,而使血液渗至皮下造成青淤。因此按压时间长些,才能完全止血。如有出血倾向,

电泳技术在医学中的应用

目前,该技术已广泛用于蛋白质、多肽、氨基酸、核苷酸、有机物、无机离子等的分离和鉴定,甚至病毒与细胞的研究。特别是电泳所用支持介质由流动相改为固相支持物后,各种各样的电泳分析装置不断推出以适应不同教学、临床和科研工作的需要。当今,电泳技术与质谱技术联用在后基因组学研究中,正发挥者着巨大的作用,为临床检

电泳技术及其临床应用新进展

电泳技术是一门古老而又年轻的技术。早在1809年俄国物理学家Reuss就进行了世界上第一次电泳实验,此后各种电泳技术及仪器相继问世,广泛应用于蛋白质、氨基酸、核酸、其他有机化合物甚至无机离子等领域的分离和/或鉴定。近年来,先进的电泳技术和各种自动电泳分析系统被越来越多的临床实验室所采用检验|地带网搜

大鼠乳酸脱氢酶(LDH)ELISA检测法

大鼠乳酸脱氢酶(LDH)ELISA试剂盒 (用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内) 原理本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗大鼠 LDH 单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的 LDH与单抗结合,加入生物素化的抗大鼠LDH,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的Strep

精浆乳酸脱氢酶同工酶X(LDX)测定方法

1.测定方法及评价LD-X的电泳位置在LD3-LD4之间。活性测定多采用聚丙烯酰胺凝胶电泳、酶联染色及光度计扫描法,求得其相对百分率。国内临床上较为常用。2.参考值 LD-X相对活性≥42.6%。3.临床意义精子发生缺陷时无LD-X形成。少精或无精者可致LD-X活性减低。

琼脂糖凝胶电泳法的相关介绍

  (1)制胶 取琼脂糖约0.2g,加水10ml,置水浴中加热使溶胀完全,加温热的醋酸-锂盐缓冲液(pH3.0)10ml,混匀,趁热将胶液涂布于大小适宜(2.5cm×7.5cm  或4cm×9cm)的玻板上,厚度约3mm,静置,待凝胶结成无气泡的均匀薄层,即得。  (2) 标准品溶液及供试品溶液的制

连续监测法测定乳酸脱氢酶(LD)总活性临床意义呢?

  乳酸脱氢酶是一种含锌的氧化还原酶类,人体以心、肾、骨骼肌含量最丰富,其次为肝、脾、胰及肺组织含量亦较多。  1.原理  340nm处吸光度的增加速率与样品中LD活性成正比。  2.生理变异  血清LD高低和性别关系不大,婴儿酶活性可达成年人两倍,儿童和少年活性比成年人高10%~l5%。  3.参

连续监测法测定乳酸脱氢酶(LD)总活性临床意义

乳酸脱氢酶是一种含锌的氧化还原酶类,人体以心、肾、骨骼肌含量最丰富,其次为肝、脾、胰及肺组织含量亦较多。1.原理340nm处吸光度的增加速率与样品中LD活性成正比。2.生理变异血清LD高低和性别关系不大,婴儿酶活性可达成年人两倍,儿童和少年活性比成年人高10%~l5%。3.参考值 血清LD-P法:2

LDH在医学名词里是什么意思

LDH在医学名词里是乳酸脱氢酶。乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)几乎存在于所有组织中,以心、骨骼肌和肾脏最丰富,其次为肝、脾、胰腺、脑、肺脏等。采用电泳法可将人组织中的乳酸脱氢酶同工酶分离出5种同工酶区带,根据其电泳迁移率的快慢,依次为LDH-2、LDH-1、LDH-

琼脂糖凝胶电泳对核酸的分离方法介绍

1.核酸分子大小与琼脂糖浓度的关系(1)DNA分子的大小 在凝胶中,DNA片段迁移距离(迁移率)与碱基对的对数成反比,因此通过已知大小的标准物移动的距离与未知片段的移动距离时行比较,便可测出未知片段的大小。但是当DNA分子大小超过20kb时,普通琼脂糖凝胶就很难将它们分开。此时电泳的迁移率不再依赖于

乳酸脱氢酶同工酶测定正常参考值及临床意义

中文名称:乳酸脱氢酶同工酶测定 英文名称:Measfurement of LDH I soemzyme in serum 正常参考值:LDH1:130±5.5    LDH2:41±5    LDH3:20±4.5 LDH4:5±3.2      LDH5:4±2.8 临床意义: 急

关于电泳法—琼脂糖凝胶电泳法的操作介绍

  (1) 琼脂糖凝胶电泳法— 制胶 取琼脂糖约0.2g,加水10ml,置水浴中加热使溶胀完全,加温热的醋酸-锂盐缓冲液(pH3.0)10ml,混匀,趁热将胶液涂布于大小适宜(2.5cm×7.5cm或4cm×9cm)的玻板上,厚度约3mm,静置,待凝胶结成无气泡的均匀薄层,即得。  (2) 琼脂糖凝

乳酸脱氢酶测定及临床意义

  英文名称:LDH  正常范围:血清 100~300U/L;       尿 560~2050U/L;       脑脊液含量为血清的1/10。  检查介绍:乳酸脱氢酶是一种糖酵解酶。乳酸脱氢酶存在于机体所有组织细胞的胞质内,其中以肾脏含量较高。乳酸脱氢酶是能催化乳酸脱氢生成丙酮酸的酶      

核酸构型与琼脂糖凝胶电泳分离的关系

  不同构型DNA的移动速度次序为:供价闭环 DNA(covalently closed circular,cccDNA)>直线DNA>开环的双链环状DNA。当琼脂糖浓度太高时,环状DNA(一般为球形)不能进入胶中,相对迁移率为0(Rm=0),而同等大小的直线双链DNA(刚性棒状)则可以长轴方向前进

琼脂糖凝胶电泳仪分离DNA片段的范围

琼脂糖凝胶电泳仪是以琼脂糖凝胶作为载体的电泳,广泛用于核酸的研究,为DNA分子及其片段的分子量测定和DNA分子构象分析提供了重要手段。不同浓度的琼脂糖凝胶分离DNA段的范围如下:一、凝胶总浓度:0.3%dsDNA段的分离范围:5~60kb二、凝胶总浓度:0.6%dsDNA段的分离范围:1~20kb三

琼脂糖凝胶电泳和蛋白质分离纯化

  脂糖凝胶电泳是用琼脂糖作为介质的一种电泳方法,其兼具“分子筛”和“电泳的双重作用。   琼脂糖(Agarose)是一种线性多糖聚合物,是从红色海藻产物琼脂中提取而来的,当琼脂糖溶液加热到沸点后冷却凝固便会形成良好的电泳介质,其密度是由琼脂糖的浓度决定的。   经过化学修饰的低熔点的琼脂糖,在

乳酸脱氢酶的概述

  乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LD/LDH)为含锌离子的金属蛋白,分子量为135~140kD,由H和M两种亚基组成,是糖无氧酵解及糖异生的重要酶系之一,可催化丙酸与L-乳酸之间的还原与氧化反应,也可催化相关的a-酮酸。LDH广泛存在于人体组织中,以肾脏含量最高,其次是心

乳酸脱氢酶的形式

  乳酸脱氢酶有5种同工酶形式,即LDH1、LDH2、LDH3、LDH4、LDH5,可用电泳法进行分离。人体心肌、肾、红细胞以LDH1和LDH2为最多。肝和横纹肌则以LDH4和LDH5为主。脾、胰、甲状腺、肾上腺中LDH3较多。乳酸脱氢酶同工酶是观察心肌疾病、肝胆疾病等的指标之一。

乳酸脱氢酶的测定

  乳酸脱氢酶催化乳酸氧化为丙酮酸为可逆反应,正反两个方向的反应均能测定。但逆反应测得的乳酸脱氢酶活性比正反应高得多,所以采用不同的测定方法得出的结果也会不同。

乳酸脱氢酶的测定

  乳酸脱氢酶催化乳酸氧化为丙酮酸为可逆反应,正反两个方向的反应均能测定。但逆反应测得的乳酸脱氢酶活性比正反应高得多,所以采用不同的测定方法得出的结果也会不同。

乳酸脱氢酶的测定

  乳酸脱氢酶催化乳酸氧化为丙酮酸为可逆反应,正反两个方向的反应均能测定。但逆反应测得的乳酸脱氢酶活性比正反应高得多,所以采用不同的测定方法得出的结果也会不同。

乳酸脱氢酶的检查

  (1)参考值;漏出液LD:接近血清。渗出液LD>200U/L,积液LD/血清LD比值大于0.6。  (2)临床意义:①LD活性增高见于化脓性积液、恶性积液、结核性积液等。化脓性积液LD活性增高最明显,且LD增高程度与感染程度呈正相关;其次为恶性积液;结核性积液LD略为增高。②如果积液LD/血清L

乳酸脱氢酶的简介

  乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LD/LDH)为含锌离子的金属蛋白,分子量为135~140kD,由H和M两种亚基组成,是糖无氧酵解及糖异生的重要酶系之一,可催化丙酸与L-乳酸之间的还原与氧化反应,也可催化相关的a-酮酸。LDH广泛存在于人体组织中,以肾脏含量最高,其次是心

乳酸脱氢酶的简介

  乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LD/LDH)为含锌离子的金属蛋白,分子量为135~140kD,由H和M两种亚基组成,是糖无氧酵解及糖异生的重要酶系之一,可催化丙酸与L-乳酸之间的还原与氧化反应,也可催化相关的a-酮酸。LDH广泛存在于人体组织中,以肾脏含量最高,其次是心

乳酸脱氢酶的定义

乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LD  或LDH  ,EC1.1.1.27 )是一类NAD依赖性激酶,有LDHA、LDHB、LDHC三种亚基,可构成6种四聚体同工酶。 动物乳酸脱氢酶是由4个亚单位组成的四聚体,常见的A、B两种亚基构成的5种LDH同工酶(LDH1-5),C亚基

乳酸脱氢酶的简介

  乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LD/LDH)为含锌离子的金属蛋白,分子量为135~140kD,由H和M两种亚基组成,是糖无氧酵解及糖异生的重要酶系之一,可催化丙酸与L-乳酸之间的还原与氧化反应,也可催化相关的a-酮酸。LDH广泛存在于人体组织中,以肾脏含量最高,其次是心

凝胶电泳技术的特点

以淀粉胶、琼脂或琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等作为支持介质的区带电泳法称为凝胶电泳。聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)除了浓缩效应、电荷效应外,还包括分子筛效应,普遍用于分离蛋白质及较小分子核酸。琼脂糖凝胶电泳适用于分离同工酶及其亚型、大分子核酸等。