DNA限制性内切酶酶切分析
一、原理限制性内切酶和基因载体是DNA重组技术中的两个极其重要的方面。限制性内切酶是首先在大肠杆菌中发现的能够分解外来DNA的核酸酶。与核酸外切酶相比，该酶可从DNA双链内部特异的核苷酸序列处将DNA双链切断，产生带有粘性或平头末端的DNA片段。把要克隆的外来DNA和载体DNA用同一种限制性内切酶切割，即可产生带有相同粘性末端的DNA片段。如果同时用两种不同的酶切割，则可产生带不同粘性末端的片段，通过电泳分离出所需要的目的基因片段。把目的基因与切开的载体DNA混合，再经过DNA连接酶处理，转化和筛选即可得到希望的重组子。进行DNA酶切时，根据具体情况可用单酶切或双酶切。特定的酶有其配套的缓冲液。进行双酶切时，应选用两种酶都适合的缓冲液；如果两种酶要求的温度不同时，先在较低温度下酶切，然后在较高的温度下酶切。 二、目的 了解限制性内切酶的特性和DNA分子的结构，掌握DNA限制性内切酶酶切的图谱的分析方法。 三、材......阅读全文
DNA酶切反应
一、 DNA 酶切反应1、将清洁干燥并经灭菌的eppendorf管(最好0.5ml)编号，用微量移液枪分别加入DNA 1μg和相应的限制性内切酶反应10×缓冲液2μl，再加入重蒸水使总体积为19μl，将管内溶液混匀后加入1μl酶液，用手指轻弹管壁使溶液混匀，也可用微量离心机甩一下，使溶液集中在管
限制性内切酶添加保护碱基数目及酶切效率
限制性核酸内切酶产品选择专题&NBS p; 限制性内切酶 保护碱基A-B&NBS p;酶切效率:&NBS p;- 0%&NBS p;- 0-20%- 20-50%- 50-100%*- 反应时间为16小时酶保护碱基数目12345AarI20-5050-100AasI50-100AatII00-202
限制性内切酶质量控制
单位定义 限制性内切酶的一个活性单位是指，在50μl 的反应体系里，采用随酶提供的 NEBuffer，用1个小时的时间，彻底消化1μg底物DNA所需要的酶量。 酶切反应应在带盖的Eppendorf 管中进行，选用技术数据卡上所标明的适宜温度。在确定酶活性之前，浓缩的酶应该用推荐的贮存液稀
限制性内切酶的生理意义
限制作用实际就是限制酶降解外源DNA ，维护宿主遗传稳定的保护机制。甲基化是常见的修饰作用，可使腺嘌呤A和胞嘧啶C甲基化而受到保护。通过甲基化作用达到识别自身遗传物质和外来遗传物质的目的。所以，能产生防御病毒侵染的限制酶的细菌，其自身的基因组中可能有该酶识别的序列，只是该识别序列或酶切位点被甲基
关于限制性内切酶的由来
一般是以微生物属名的第一个字母和种名的前两个字母组成，第四个字母表示菌株（品系）。例如，从Bacillus amylolique faciens H中提取的限制性内切酶称为Bam H，在同一品系细菌中得到的识别不同碱基顺序的几种不同特异性的酶，可以编成不同的号，如HindⅡ、HindⅢ，HpaI
限制性内切酶质量控制
单位定义限制性内切酶的一个活性单位是指，在50μl 的反应体系里，采用随酶提供的 NEBuffer，用1个小时的时间，彻底消化1μg底物DNA所需要的酶量。 酶切反应应在带盖的Eppendorf 管中进行，选用技术数据卡上所标明的适宜温度。在确定酶活性之前，浓缩的酶应该用推荐的贮存液稀释成大约1,
限制性内切酶有哪些作用
不同限制性核酸内切酶识别和切割的特异性不同。DNA在限制性内切核酸酶的作用下，使多聚核苷酸链上磷酸二酯键断开的位置被称为酶切位点（或称为靶序列），可用↓表示。绝大多数的Ⅱ型限制性核酸内切酶，都能识别48个核苷酸组成的特定酶切位点，并且一般是在识别序列内部，如C↓GATCC、AT↓CGAT、GTC↓G
DNA酶切及鉴定
实验概要限制酶主要存在原核细胞中。多数来源于细菌，有的来源于蓝藻和链霉菌，极少数来源于支原体等微生物中，存在原核细胞的限制酶能在特异的识别位点切断外源DNA，如感染的噬菌体。而宿主细胞内的DNA则因它的一些特异识别位点常常由于其中一个碱基的甲基化被保护起来，从而使此位点不再成为限制酶的底物。限制性内
DNA酶切问题集锦
我们在进行分子生物学实验，常需要对DNA片段进行酶切。在此，我们对酶切实验中遇到的一些问题做了相应归纳。带型原因结果分析DNA完全没有被内切酶切割内切酶失活标准底物检测酶活性DNA不纯，含有SDS，酚，EDTA等内切酶抑制因子将DNA过柱纯化，乙醇沉淀DNA条件不适（试剂、温度）检查反应系统是否最佳
DNA重组技术－酶切
实验概要 通过酶切获得可进行体外重组的载体和外源DNA实验原理 DNA重组技术是用内切酶分别将载体和外源DNA切开，经分离纯化后，用链接酶将其连接，构成新的DNA分子。 限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上，并切割双链DN
简述Ⅱ型限制性内切酶的用途
用于DNA基因组物理图谱的组建；基因的定位和基因分离；DNA分子碱基序列分析；比较相关的DNA分子和遗传工程；进行基因工程编辑。 限制性核酸内切酶是由细菌产生的，其生理意义是提高自身的防御能力. 限制酶一般不切割自身的DNA分子，只切割外源DNA。
影响限制性内切酶活性的因素
1、DNA纯度在DNA样品中若含有蛋白质,或没有去除干净制备过程中所用的乙醇、EDTA、SDS、酚、氯仿和某些高浓度金属离子,均会降低限制酶的催化活性,甚至使限制酶不起作用.2、核酸内切限制酶的缓冲液核酸内切限制酶的标准缓冲液包括氯化镁、氯化钠或氯化钾、Tris-HCL、巯基乙醇或二硫苏糖醇(DTT
常见限制性内切酶识别序列(酶切位点)
常见限制性内切酶识别序列(酶切位点)（BamHI、EcoRI、HindIII、NdeI、XhoI等）在分子克隆实验中，限制性内切酶是必不可少的工具酶。无论是构建克隆载体还是表达载体，要根据载体选择合适的内切酶（当然，使用T载就不必考虑了）。先将引物设计好，然后添加酶切识别序列到引物5' 端。
常见限制性内切酶识别序列(酶切位点)
常见限制性内切酶识别序列(酶切位点)（BamHI、EcoRI、HindIII、NdeI、XhoI等）在分子克隆实验中，限制性内切酶是必不可少的工具酶。无论是构建克隆载体还是表达载体，要根据载体选择合适的内切酶（当然，使用T载就不必考虑了）。先将引物设计好，然后添加酶切识别序列到引物5' 端。
简述Ⅱ型限制性内切酶的由来
一般是以微生物属名的第一个字母和种名的前两个字母组成，第四个字母表示菌株（品系）。例如，从Bacillus amylolique faciens H中提取的限制性内切酶称为Bam H，在同一品系细菌中得到的识别不同碱基顺序的几种不同特异性的酶，可以编成不同的号，如HindⅡ、HindⅢ，HpaI
简述限制性内切酶的分布区域
限制性核酸内切酶分布极广，几乎在所有细菌的属、种中都发现至少一种限制性内切酶，多者在一属中就有几十种，例如在嗜血杆菌属中（Haemophilus）现已发现的就有22种。有的菌株含酶量极低，很难分离定性；然而在有的菌株中，酶含量极高．如E. coli的pMB4(EcoRI酶）和H. aegypti
简述Ⅱ型限制性内切酶的生理意义
限制作用实际就是限制酶降解外源DNA [1] ，维护宿主遗传稳定的保护机制。甲基化是常见的修饰作用，可使腺嘌呤A和胞嘧啶C甲基化而受到保护。通过甲基化作用达到识别自身遗传物质和外来遗传物质的目的。所以，能产生防御病毒侵染的限制酶的细菌，其自身的基因组中可能有该酶识别的序列，只是该识别序列或酶切位
限制性内切酶的分类性质的介绍
根据酶的功能特性、大小及反应时所需的辅助因子，限制性内切酶可分为两大类，即I类酶和Ⅱ酶。最早从大肠杆菌中发现的EcoK、EcoB就属于I类酶。其分子量较大；反应过程中除需Mg2+外，还需要S-腺苷-L甲硫氨酸、ATP；在DNA分子上没有特异性的酶解片断，这是I、Ⅱ类酶之间最明显的差异。因此，I类
关于Ⅱ型限制性内切酶的基本介绍
限制性核酸内切酶是可以识别并附着特定的核苷酸序列，并对每条链中特定部位的两个脱氧核糖核苷酸之间的磷酸二酯键进行切割的一类酶，简称限制酶。根据限制酶的结构，辅因子的需求切位与作用方式，可将限制酶分为三种类型，分别是第一型（Type I）、第二型（Type II）及第三型（Type III）。Ⅰ型限
DNA的酶切与连接
实验方法原理 限制性内切酶能够特异性地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异性位点上，并切割双链DNA。 实验材料 标准pUC19
DNA的酶切与连接
实验方法原理 限制性内切酶能够特异性地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异性位点上，并切割双链DNA。实验材料 标准pUC19（2686bp）试剂、试剂盒 EcoRI及其配套的酶切缓冲液 0.5×TBE电泳缓冲液 6×Loading Buffer Goldview 琼脂糖仪
DNA重组技术：酶切、连接
实验原理: DNA重组技术是用内切酶分别将载体和外源DNA切开，经分离纯化后，用链接酶将其连接，构成新的DNA分子。限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上,并切割双链DNA。如EcoRⅠ切割识别序列后产生两个互补的粘性末端。 5’…G↓A
DNA片断的酶切技术
限制性内切酶是一类能识别双链DNA分子中特异核苷酸序列的DNA水解酶,这类酶的发现和应用促进了以DNA重组为基础的生物工程技术的迅猛发展。该类酶是体外剪切基因片段的重要工具，基因物理图谱的绘制、核苷酸序列的测定、基因片段的重组，重组子的筛选、探针的制备及各种杂交、测量基因的拷贝数,基因文库构建,分子
质粒DNA的双酶切
实验概要掌握质粒DNA双酶切的原理和操作方法。实验原理分子生物学实验中，基因的重组与分离涉及到一系列的酶促反应。许多种酶在基因克隆实验中有着广泛的用途。限制性内切酶是一类能识别双链DNA分子特异性核酸序列的DNA水解酶。多种细菌能合成限制性核酸酶，这是它们保护自己，降解外来DNA分子的重要手段。每一
质粒DNA限制性酶切图谱分析
一、DNA的限制性酶切实验原理核酸限制性内切酶 是一类能识别双链ＤＮＡ中特定碱基顺序的核酸水解酶，这些酶都是从原核生物中发现，它们的功能犹似高等功物的免疫系统， 用于抗击外来ＤＮＡ的侵袭。限制性内切酶 以内切方式水解核酸链中的磷酸二酯键， 产生的ＤＮＡ片段５’端为Ｐ，３’端为ＯＨ。1. 限制性内切酶
关于琼脂糖凝胶块中DNA的限制性内切酶消化的简介
1．应使用消毒溶液及戴无菌手套以免DNA降解。 2．在Falcon试管中用1×TE溶液漂洗凝胶块20min 3次，以去除EDTA。 3．混合：酶反应缓冲液（高、中或低盐缓冲液），100mmol/L亚精胺（只用于高盐缓冲液状态），10～20单位的内切酶。20单位的内切酶就足以过夜完全消化10μ
DNA的酶切与连接——DNA片段连接
实验方法原理核酸片段可以通过连接酶的作用连接起来而获得重组分子。实验材料λDNA EcoT14I：由11条DNA片段组成试剂、试剂盒T4 DNA连接酶及其配套的10×连接缓冲液 0.5×TBE电泳缓冲液 6×Loading Buffer Goldview 琼脂糖仪器、耗材电泳仪 水浴锅 移液器 微波
关于Ⅱ型限制性内切酶的分类性质介绍
根据酶的功能特性、大小及反应时所需的辅助因子，限制性内切酶可分为两大类，即I类酶和Ⅱ酶。最早从大肠杆菌中发现的EcoK、EcoB就属于I类酶。其分子量较大；反应过程中除需Mg2+外，还需要S-腺苷-L甲硫氨酸、ATP；在DNA分子上没有特异性的酶解片断，这是I、Ⅱ类酶之间最明显的差异。因此，I类
选择多种限制性内切酶的基本准则
是选择不能在非酶切位点切断靶DNA的酶。裂解核心区的内切酶使反向PCR只能扩增引物所定模板(依赖于引物)的上游或下游区，而不裂解核心区的酶则使两侧序列都扩增。Southern杂交来确定内切酶用以产生大小适于环化及反向PCR的片段的末端片段。
关于DNA酶切反应的简介
1、 将清洁干燥并经灭菌的eppendorf管(最好0.5ml)编号,用微量移液枪分别加入DNA 1μg和相应的限制性内切酶反应10×缓冲液2μl,再加入重蒸水使总体积为19μl,将管内溶液混匀后加入1μl酶液,用手指轻弹管壁使溶液混匀,也可用微量离心机甩一下,使溶液集中在管底。此步操作是整个实