在质粒载体(plasmidvector)中进行平末端片段的克隆
1、分别设立两个反应，用适当的限制性内切核酸酶消化1－10μg质粒DNA和外源DNA片段，使它们能产生平末端。2、苯酚：氯仿抽提与乙醇沉淀法纯化出已被消化的载体和外源DNA片段。3、分别用TE（pH 8.0）重新溶解纯化出的两种DNA沉淀，使终浓度为100 ng/ml。假设1 bp相当于660Da，计算DNA的终浓度（pmol/ml）。4、将载体DNA去磷酸化。5、按下表将适量的DNA转移至无菌的0.5ml离心管： 管号 DNA A 和E 载体1 [60fmol (~100ng)] B 外源插入片段2 [60fmol (~10ng)] C 和F 载体1 （60fmol）和外源插入片段3 （60......阅读全文
pOSIPKL载体的基本信息和质粒图谱
pOSIP-KL载体载体基本信息载体名称pOSIP-KL载体抗性Kanamycin载体长度6764 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源St-Pierre F, Cui L, Priest DG, Endy D, Dodd IB, Shearwin KE.拷贝数High c
pOSIPKP载体的基本信息和质粒图谱
pOSIP-KP载体载体基本信息载体名称pOSIP-KP载体抗性Kanamycin载体长度6938 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源St-Pierre F, Cui L, Priest DG, Endy D, Dodd IB, Shearwin KE.拷贝数High c
pJW168载体的基本信息和质粒图谱
pJW168载体载体基本信息载体名称pJW168载体抗性Ampicillin载体长度5728 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源Lucigen拷贝数Low copy numberpJW168载体质粒图谱
pSTV29载体的基本信息和质粒图谱
pSTV29载体载体基本信息载体名称pSTV29载体抗性Chloramphenicol载体长度2999 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源TaKaRa拷贝数Medium copy number5'引物M13 fwd3'引物M13 revpSTV29载体质粒
pHSG299载体的基本信息和质粒图谱
pHSG299载体载体基本信息载体名称pHSG299载体抗性Kanamycin载体长度2673 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源Takeshita S, Sato M, Toba M, Masahashi W, Hashimoto-Gotoh T.拷贝数High cop
LITMUS28载体的基本信息和质粒图谱
LITMUS28载体载体基本信息载体名称LITMUS28载体抗性Ampicillin载体长度2823 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源Evans PD, Cook SN, Riggs PD, Noren CJ.拷贝数High copy number启动子lac5'
pMCS5载体的基本信息和质粒图谱
pMCS5载体载体基本信息载体名称pMCS5载体抗性Ampicillin载体长度3081 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源MoBiTec拷贝数High copy number5'引物M13 fwd3'引物M13 revpMCS5载体质粒图谱
pEX1载体的基本信息和质粒图谱
pEX-1载体载体基本信息载体名称pEX-1载体抗性Ampicillin载体长度4505 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源OriGene拷贝数High copy numberpEX-1载体质粒图谱
pUC118载体的基本信息和质粒图谱
pUC118载体载体基本信息载体名称pUC118载体抗性Ampicillin载体长度3162 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源Vieira J, Messing J.拷贝数High copy number5'引物M13 fwd3'引物M13 revpUC
pBluescript－II－KS()载体的基本信息和质粒图谱
pBluescript II KS(-)载体载体基本信息载体名称pBluescript II KS(-)载体抗性Ampicillin载体长度2961 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源Alting-Mees MA, Short JM.拷贝数High copy number
pTYB21载体的基本信息和质粒图谱
pTYB21载体载体基本信息载体名称pTYB21载体抗性Ampicillin载体长度7514 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源Chong S, Montello GE, Zhang A, Cantor EJ, Liao W, Xu MQ, Benner J.拷贝数Hig
pGS21a载体的基本信息和质粒图谱
pGS-21a载体载体基本信息载体名称pGS-21a载体抗性Ampicillin载体长度6169 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源GenScript拷贝数High copy numberpGS-21a载体质粒图谱
质粒载体和外源DNA中限制酶切位点的性质
如今，质粒载体中限制酶切位点的种类极为繁多，因而通常都有可能找到某种带限制酶切位点恰恰与外源DNA片段本身毫无二致的载体。这就具备一个不可比拟的优点，也应是可以用相应的限制酶消化重组质粒崦回收外源DNA。另一种方案，则是把片段插入到载体中能产生匹配末端的任何位点中。例如，识别不同的六核苷酸的限制酶B
pRHA67载体的基本信息和质粒图谱
pRHA-67载体载体基本信息载体名称pRHA-67载体抗性Ampicillin载体长度4745 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源Giacalone MJ, Gentile AM, Lovitt BT, Berkley NL, Gunderson CW,拷贝数High
pEX2载体的基本信息和质粒图谱
pEX2载体载体基本信息载体名称pEX2载体抗性Ampicillin载体长度5787 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源Stanley KK, Luzio JP.拷贝数High copy numberpEX2载体质粒图谱
pOSIPKH载体的基本信息和质粒图谱
pOSIP-KH载体载体基本信息载体名称pOSIP-KH载体抗性Kanamycin载体长度6474 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源St-Pierre F, Cui L, Priest DG, Endy D, Dodd IB, Shearwin KE.拷贝数High c
pEXK载体的基本信息和质粒图谱
pEX-K载体载体基本信息载体名称pEX-K载体抗性Kanamycin载体长度2507 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源Eurofins Genomics筛选标记Neomycin/G418(Geneticin)拷贝数High copy numberpEX-K载体质粒图谱
pLEXXAK™载体的基本信息和质粒图谱
pLEXX-AK™载体载体基本信息载体名称pLEXX-AK™载体抗性Ampicillin载体长度2891 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源Lucigen拷贝数High copy numberpLEXX-AK™载体质粒图谱
pRHA113载体的基本信息和质粒图谱
pRHA-113载体载体基本信息载体名称pRHA-113载体抗性Ampicillin载体长度5837 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源Giacalone MJ, Gentile AM, Lovitt BT, Berkley NL, Gunderson CW,拷贝数Hig
pEX1载体的基本信息和质粒图谱
pEX1载体载体基本信息载体名称pEX1载体抗性Ampicillin载体长度5783 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源Stanley KK, Luzio JP.拷贝数High copy numberpEX1载体质粒图谱
pHSG298载体的基本信息和质粒图谱
pHSG298载体载体基本信息载体名称pHSG298载体抗性Kanamycin载体长度2675 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源Takeshita S, Sato M, Toba M, Masahashi W, Hashimoto-Gotoh T.拷贝数High cop
pACYC177载体的基本信息和质粒图谱
pACYC177载体载体基本信息载体名称pACYC177载体抗性Ampicillin载体长度3941 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源New England Biolabs拷贝数Medium copy numberpACYC177载体质粒图谱
pNEB193载体的基本信息和质粒图谱
pNEB193载体载体基本信息载体名称pNEB193载体抗性Ampicillin载体长度2713 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源New England Biolabs拷贝数High copy number5'引物M13 fwd3'引物M13 revpN
pTXB1载体的基本信息和质粒图谱
pTXB1载体载体基本信息载体名称pTXB1载体抗性Ampicillin载体长度6706 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源Southworth MW, Amaya K, Evans TC, Xu MQ, Perler FB.拷贝数High copy numberpTXB
pHSG396载体的基本信息和质粒图谱
pHSG396载体载体基本信息载体名称pHSG396载体抗性Chloramphenicol载体长度2238 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源Takeshita S, Sato M, Toba M, Masahashi W, Hashimoto-Gotoh T.拷贝数Hi
外源DNA片段在质粒载体中的克隆实
实验方法原理 限制性内切酶可识别特定位点并切割DNA产生粘性末端或平端的外源片段，经DNA的纯化处理后用于连接反应；选择克隆载体pUC18多克隆位点上相应的限制性内切酶切割，并用碱性磷酸酶处理防止载体自连；在连接酶的作用下将外源片段连接到载体上，实现外源片段的克隆。实验材料 DNA片段PUC18试剂
pGEM®T－Easy载体的基本信息和质粒图谱
pGEM®-T Easy载体载体基本信息载体名称pGEM®-T Easy载体抗性Ampicillin载体长度3015 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源Promega拷贝数High copy number5'引物M13 fwd3'引物M13 revpGEM
pOSIPCH载体的基本信息和质粒图谱
pOSIP-CH载体载体基本信息载体名称pOSIP-CH载体抗性Chloramphenicol载体长度6398 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源St-Pierre F, Cui L, Priest DG, Endy D, Dodd IB, Shearwin KE.拷贝数
pOSIPKC载体的基本信息和质粒图谱
pOSIP-KC载体载体基本信息载体名称pOSIP-KC载体抗性Kanamycin载体长度6970 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源St-Pierre F, Cui L, Priest DG, Endy D, Dodd IB, Shearwin KE.拷贝数High c
在质粒载体中进行平末端片段的克隆实验
克隆平末端的目的片段时，为最大量地获得“正确”的连接产物，载体和目的 DNA 在连接反应中的比例必须适当。每一重组体中外源 DNA 的连接方向和插入数量都必须用限制酶酶切图谱分析或其他方法加以鉴定。作为一般规律，如果连接反应中质粒和目的 DNA 摩尔数相等，而且 DNA 的总浓度少于 100 μg/