怎么通过QPCR的扩增曲线和溶解曲线来分析结果
1、扩增曲线（如果做双ΔCT法）：（1）扩增曲线必须是S型，有明显的四个时期，且复孔的CT值尽量一致，相差不要超过0.5个CT值（上限是1个CT值）；（2）同一个基因在不同浓度的相同模板下扩增，其相差的CT值为相差浓度倍数的2次开方。当然这是理论值；另外阴性对照不能有扩增（40个循环以后出CT值属正常现象，也可算作没有扩增）。2、溶解曲线：（1）溶解曲线是判断扩增产物是否单一的曲线，顾名思义，其跟模板（或其浓度）没有关系，扩增什么基因就应该有其相对应的溶解曲线；（2）一般SYBR法的目的基因在80~90℃之间；（3）出现其他峰就该考虑是否为引物二聚体（一般为60~75℃之间）视引物长度而定，而基因组DNA污染的峰会在90℃以后。出现引物二聚体可能是引物设计、引物加量等原因所致；（4）基因组DNA那么考虑设计跨内含子引物或者实验之前做gDNA的消除工作。而阴性对照有目的峰那可能就是模板污染，注意实验操作等避免模板污染。3、溶解曲线......阅读全文
SYBRGreen Q-PCR in the ABI 7700
MaterialsROX Passive Reference Dye 25 µM, 50x (Invitrogen, Cat. No. 12223-012)SYBR Green I, "10,000x" concentrate (Molecular Probes, Cat. No. S7563)Su
Q-PCR实验操作流程
Q-PCR实验流程一、 ①实验前准备，每天早上到实验室后，先把超净工作台的紫外灯打开15-20分钟。②超净台前做实验，需佩戴干净的橡胶手套/一次性薄膜手套，RNA抽提需带口罩。③取EP管/枪头时需用镊子，不可以用使用过的手套直接取用。取完EP管/枪头后，袋子及时封好。④橡胶手套须放入超净台照射紫外，
Q-PCR实验操作流程
Q-PCR实验流程 一、 ①实验前准备，每天早上到实验室后，先把超净工作台的紫外灯打开15-20分钟。②超净台前做实验，需佩戴干净的橡胶手套/一次性薄膜手套，RNA抽提需带口罩。③取EP管/枪头时需用镊子，不可以用使用过的手套直接取用。取完EP管/枪头后，袋子及时封好。④橡胶手套须放入超净
定量PCR实验技术 Q-PCR
Quantitative PCRJoseph SambrookPeter Maccallum Cancer Institute and The University of Melbourne, AustraliaDavid W. RussellUniversity of Texas Southwes
q-pcr拷贝数大于1.5
是正常的。查融合基因时候，拷贝数大于3w才能正式有效性。 pcr荧光定量检测下限25拷贝，意思是样本中原有目标DNA的最少数量。在另外的一组管子中，加入已知拷贝数的DNA同时扩增，每个管子中加入的数量是不同的，但是从最小数目到最大数目的这个范围涵盖了样本中DNA拷贝数。PCR反应完成后，把已知拷贝
Q-PCR常见问题及解决方法
Q-PCR常见问题及解决方法Q1．CT值出现过晚A2.1.扩增效率低，反应条件不够优化。设计更好的引物或探针；改用三步法进行反应；适当降低退火温度；增加镁离子浓度等。2.PCR各种反应成分的降解或加样
Chip Q-PCR定量分析方法分享
相关专题Q-PCR定量分析CHIP最近做了CHIP，用Q-PCR方法进行定量分析，现将我对一些文献资料的总结传上，希望对大家有帮助！i. Normalizeeach ChIP DNA fractions’ Ct value to the Input DNA fraction Ct valuefor
怎么验证q-pcr引物设计得好不好
引物是一小段核苷酸。PCR中，两个引物分别与目地DNA的2条子链的两端互补，也就是如果从图的平面来看：一个引物与上一条链的左端互补，另一个引物与下一条子链的右端互补。 所以两个引物的序列是不相同的，这样才不会乱。
怎么验证q-pcr引物设计得好不好
引物是一小段核苷酸。PCR中，两个引物分别与目地DNA的2条子链的两端互补，也就是如果从图的平面来看：一个引物与上一条链的左端互补，另一个引物与下一条子链的右端互补。 所以两个引物的序列是不相同的，这样才不会乱。
ELISA、WB、Q-PCR采样及取样注意事项
ELISA取样及运输注意事项一、血清提取方法：1.全血促凝管取血，轻轻颠倒两三次，放置片刻让全血凝固，凝固后3000转15-30min离心取上清。2.全血普通EP管取血，室温放置2h左右，让其凝固，凝固后3000转15-30min离心取上清。特别注意：取血清避免震荡，以防止溶血，溶血会对结果有影响。