等电聚焦电泳与普通电泳区别
两者的原理上的区别：等电聚焦是根据被分离的蛋白质组分间的等电点的差异被分离，具有不同等电点的蛋白质会停留在相应的pH区带，而普通的SDS-PAGE凝胶电泳是根据蛋白质组分间的分子量大小差异进行分离的，分子量不同的蛋白质会停留在相应孔径的凝胶层。......阅读全文
蛋白等电聚焦凝胶电泳技术（二）
5.电泳操作步骤：1）将蛋白样品于等体积的2×上样缓冲液混合，10000×g离心5min以除去蛋白质沉淀；2）用微量注射器将蛋白质样品加入到上样空底部，注意不要溢出来。注意：对于考马斯亮蓝染色液来说，每个泳道10-30ug的蛋白混合粗提物（我们俗称粗抗原）或者5-10ug单一蛋白组分是较合理的上样浓
蛋白等电聚焦凝胶电泳技术（一）
1.原理等电聚焦凝胶电泳是依据蛋白质分子的静电荷或等电点进行分离的技术，等电聚焦中，蛋白质分子在含有载体两性电解质形成的一个连续而稳定的线性pH梯度中电泳。载体两性电解质是脂肪族多氨基多羧酸，在电场中形成正极为酸性，负极为碱性的连续的pH梯度。蛋白质分子在偏离其等电点的pH条件下带有电荷，因此可以在
蛋白等电聚焦凝胶电泳技术（三）
8.常见问题及解释1） 若产生模糊条带则证明聚焦不完全，这可能是由于电泳中的问题或大分子蛋白质限制了其在凝胶中的迁移能力。若聚焦时间过长或过短，条带的分辨率会下降。增加电压梯度可以使带形更加锐利。高分子量蛋白质在琼脂糖凝胶中可以聚焦的更好。2） 产生歪斜的条带通常由于不正确的pH梯度，检查电极是否洁
毛细管等电聚焦电泳仪简介
毛细管等电聚焦电泳仪（CIEF）是根据等电点差别分离生物大分子的高分辨率电泳技术。一、分离机理：毛细管内充有两性电解质载体（合成的具有不同等电点范围的脂肪族多胺基多羧酸混合物），阳极端装稀H3PO4溶液，阴极端装稀NaOH溶液。当施加直流电压（6～8V）时，管内将建立一个由阳极到阴极逐步升高的pH梯
等电聚焦电泳（IEF）分离蛋白及测定蛋白质等电点
一、原理等电点聚焦（IEF）是在电场中分离蛋白质技术的一个重要发展，等电聚焦是在稳定的pH梯度中按等电点的不同分离两性大分子的平衡电泳方法。在电场中充有两性载体和抗对流介质，当加上电场后，由于两性载体移动的结果，在两极间逐步建立稳定的pH梯度，当蛋白质分子或其他两性分子存在于这样的pH梯度中时，这种
等电聚焦和二维凝胶电泳实验
对于复杂混合物，如全细胞裂解物或富集的亚细胞组分，通过两步正交的分离 (orthogonalseperation)，二维凝胶 (2D 胶）电泳可以很好地分离成几百个至上千个单个蛋白质。第一次分离基于电荷，即使用变性等电聚焦电泳; 第二次分离基于表观分子质量，即使用变性十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电
等电聚焦电泳色谱仪pH梯度的类型
等电聚焦电泳色谱仪是利用蛋白质分子或其它两性分子的等电点不同，在一个稳定的、连续的和线性的pH梯度中进行分离，具有灵敏度高、分辨率高和重复性好等特点，特别适合大批量纯度检测和真实性鉴定以及遗传多样性等群体生物学领域的研究。pH梯度按形成方式可分为载体两性电解质pH梯度和固相pH梯度等。一、载体两性电
等电聚焦和二维凝胶电泳实验
等电聚焦和二维凝胶电泳实验 试剂、试剂盒 样品缓冲液 羟乙基二硫化物 细胞裂解缓冲液
AES毛细管等电聚焦电泳耗材试剂上线
毛细管等电聚焦电泳（以下简称：CIEF ）是一种简便、快速、高效的分离分析方法, 特别适用于氨基酸、多肽、蛋白质、酶类和抗体等的 分离分析, 能够满足组分定量、杂质检出、质量控制、 临床诊断等方面的要求。 CIEF 是目前处理蛋白质分辨率最高的 CE 技 术之一。随着研究工作的不断深入, CI
等电聚焦电泳色谱仪分离技术介绍（二）
8、载体两性电解质pH值梯度不稳定的原因：阴极漂移是指在等电聚焦电泳中pH梯度的碱性端逐渐消失的过程。反之，如果其酸性端逐渐消失则称为阳极漂移。为了阐明等电聚焦电泳中pH值梯度不稳定的机制，提出了各种假说：（1）载体两性电解质向阴、阳极的等速电泳迁移。（2）在阴极因CO2的吸附而引起阴极液组分和浓度
等电聚焦电泳色谱仪分离技术介绍（一）
等电聚焦电泳色谱仪是利用蛋白质分子或其它两性分子的等电点不同，在一个稳定、连续和线性的pH梯度中进行分离。按pH梯度的形成原理不同可分为载体两性电解质pH梯度等电聚焦电泳和固相pH梯度等电聚焦电泳。一、载体两性电解质pH梯度等电聚焦电泳：1、理想的载体两性电解质应具备的条件：载体两性电解质是两性分子
全柱成像毛细管等电聚焦电泳仪
全柱成像毛细管等电聚焦电泳仪是一种用于农学领域的分析仪器，于2016年4月12日启用。 技术指标 检测分离技术: 不同于传统的单点检测等电聚焦技术，无需蛋白的移动，保持蛋白高分离度和高重复性，采用CMOS成像技术，全柱成像检测，可以动态监测聚焦过程和变化，快速得到等电聚焦实验结果（10分钟之
等电聚焦和二维凝胶电泳实验（二）
SDS-PAGELaemmli(1970) 描述的 SDS-PAGE 在很长一段时间内作为各种生化分析中分辨完整蛋白质的备选方法。这主要是因为对于疏水性很强的蛋白质,SDS 是最好的增溶去污剂，所有的蛋白质，包括碱性很强的蛋白质，都向同一方向移动, 分离取决于各自的表观分子质量 (通常称为分
等电聚焦和二维凝胶电泳实验（三）
二、方法蛋白质样品制备稳定的样品制备对于任何成功的生物分析性测定都是至关重要的。为了增加实验的重复性, 并将预期外的变异降至最小，使用的缓冲液和材料都应该是质量最好的，并且在采购时需特别小心。应该使用小分子蛋白酶和磷酸酶抑制剂，如抑肽酶 (aprotinin)、亮抑肽酶 (Ieupeptin
固相pH梯度等电聚焦电泳色谱仪概述
固相pH梯度等电聚焦电泳色谱仪比载体两性电解质pH梯度等电聚焦电泳色谱仪具有更高的分辨率，更大的上样量，其分辨率可达0.001pH，是目前分辨率zui高的电泳仪之一。一、工作原理：蛋白质分子按照自己的pI位置在固相pH梯度中迁移，达到自己的等电点时停止迁移。二、固相pH梯度的介质：固相pH梯度（IP
影响等电聚焦电泳色谱仪分离容量的因素
等电聚焦电泳色谱仪是利用蛋白质分子或其它两性分子的等电点不同，在一个稳定、连续和线性的pH梯度中进行分离。等电聚焦是在电泳介质中放入载体两性电解质，当通以直流电时，载体两性电解质形成一个由阳极到阴极逐步增加的pH梯度，不同的蛋白质移动到其相当的等电点位置上，聚焦于一个狭窄区带中的过程。一、影响等电
蛋白质的双向电泳实验_等电聚焦法
蛋白质的双向电泳的第一向为等电聚焦( Isoelect rofocusing, IEF) , 根据蛋白质的等电点不同进行分离; 第二向为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳( SDS-PAGE ) , 按亚基分子量大小进行分离。经过电荷和分子量两次分离后, 可以得到蛋白质分子的等电点和分子量信息。本实验目的是
等电聚焦和二维凝胶电泳实验（一）
试剂、试剂盒 样品缓冲液羟乙基二硫化物细胞裂解缓冲液SDS-PAGE 现成溶液二硫苏糖醇碘乙酰胺仪器、耗材 等电聚焦电泳系统二维SDS-PAGE 多凝胶系统恒温循环器IPG 干胶条溶胀盘上样杯旋转摇动混合器实验步骤 一、等电聚焦的基本原理等电聚焦 (IEF) 是一种能根据分子内的质子接受点的 p
等电聚焦电泳色谱仪pH梯度的形成过程
等电聚焦电泳色谱仪是在电泳介质中放入载体两性电解质，当通以直流电时，载体两性电解质形成一个由阳极到阴极逐步增加的pH梯度，不同的蛋白质移动到其相当的等电点位置上，聚焦于一个狭窄区带中而达到分离。载体两性电解质是一系列脂肪族多氨基多羧酸同系物和异构体组成的混合物，具有很多既不相同又十分接近的相互连接的
等电聚焦和二维凝胶电泳实验（四）
再水化上样是二维凝胶电泳样品导入的最简便方法，这一方法使得样品缓冲液中的蛋白质样品在 IPG 胶条吸收样品溶液时被动导入，且蛋白质可以在整个 pH 梯度中均匀分布。在一些商品化的等电聚焦仪器中，IPG 胶条的再水化和聚焦可以用相同设备仪器完成，无需人工操作。这种仪器也可以进行所谓的主动再水化
全柱成像毛细管等电聚焦电泳仪
全柱成像毛细管等电聚焦电泳仪是一种用于农学领域的分析仪器，于2016年4月12日启用。 技术指标 检测分离技术: 不同于传统的单点检测等电聚焦技术，无需蛋白的移动，保持蛋白高分离度和高重复性，采用CMOS成像技术，全柱成像检测，可以动态监测聚焦过程和变化，快速得到等电聚焦实验结果（10分钟之
毛细管等电聚焦电泳色谱仪分析技术
毛细管等电聚焦电泳色谱仪（CIEF）是以载体两性电解质为介质，根据等电点差别分离生物大分子的高分辨率电泳技术。一、载体两性电解质应具备的条件：载体两性电解质是两性分子，使其在电泳柱中能达到一个平衡位置。载体两性电解质可作为载体，但两性电解质不能用于等电聚焦。只有载体两性电解质，即具有好的电导和缓冲
聚丙烯酰胺等电聚焦电泳测蛋白质的等电点2
四、固定、，染色和脱色将凝胶板放在培养皿中，加入固定液，浸泡数小时后，用脱色液清洗两次，每次10min, 然后加入染色液，室温下放置15－30min，再用脱色液洗脱数次，直至谱带清晰，放入保存液中浸泡10min,可制干板。五、制作干胶板1. 取完全浸湿的平整玻璃纸一张，于玻璃板上铺平，纸与板之间不可
聚丙烯酰胺等电聚焦电泳测蛋白质的等电点1
实验原理所有的氨基酸均为两性物质，即它们至少含有一個羧基（carboxyl）及一個氨基（α-amino）。這些可游离的基团随着pH变化可以三种形式存在，即正电荷（cation）、两性离子（zwitterion）及负电荷（anion）等三种，在酸性溶液中带正电荷，在碱性溶液中带负电荷。若氨基酸在某一p
高效毛细管等电聚焦电泳色谱仪分析技术
高效毛细管等电聚焦电泳色谱仪（CIEF）是以载体两性电解质为介质，根据等电点差别分离生物大分子的高分辨率电泳技术。一、载体两性电解质应具备的条件： 载体两性电解质是两性分子，使其在电泳柱中能达到一个平衡位置。载体两性电解质可作为载体，但两性电解质不能用于等电聚焦。只有载体两性电解质，即
载体两性电解质等电聚焦电泳的优点
载体两性电解质等电聚焦电泳具有很多优点，如分辨率高、能抵消扩散作用而使区带越走越窄、聚焦浓缩稀样品、重复性好、精确度高等。但其也存在不足之处，如对样品的纯度要求较高；要求样品成分在等电点时稳定，不适宜用于在等电点时不溶解或变性的蛋白质。
等电聚焦电泳色谱仪固相pH梯度的形成
等电聚焦电泳色谱仪固相pH梯度的介质是Immobilines试剂，不是两性分子，在凝胶聚合时便形成pH梯度，不随环境电场条件的改变而改变。Immobilines试剂的分子式为CH2 = CH－CO－NH－R，其中R代表羧基或第三氨基，每个分子都有一个单一的酸性或碱性缓冲基团与丙烯酰胺单连。分子一端的
等电聚焦电泳色谱仪pH梯度的建立方式
等电聚焦电泳色谱仪是利用蛋白质分子或其它两性分子的等电点不同，在一个稳定的、连续的和线性的pH梯度中进行分离，等电聚焦电泳的关键是pH梯度的建立。一、人工建立pH梯度：在电场下利用不同pH值缓冲液相互扩散，在混合区间形成pH梯度。此pH梯度易受缓冲液离子的迁移和扩散而变动，重复性差，已不被采用。二、
等电聚焦电泳色谱仪pH梯度的建立方式
等电聚焦电泳色谱仪是利用蛋白质分子或其它两性分子的等电点不同，在一个稳定的、连续的和线性的pH梯度中进行分离，等电聚焦电泳的关键是pH梯度的建立。 一、人工建立pH梯度： 在电场下利用不同pH值缓冲液相互扩散，在混合区间形成pH梯度。此pH梯度易受缓冲液离子的迁移和扩散而变动，重复性差，已不
等电聚焦水平板电泳法的操作方法的介绍
（1）制胶 取A液2.5ml，pH3~10的两性电解质（或其它pH范围的两性电解质）0.35ml，水1.25ml，50%甘油0.5ml，抽气5~10分钟，加B液25μl，N,N,N’,N’-四甲基乙二胺6μl，混匀后缓慢的注入水平模具内，室温下聚合。 （2）预电泳 将已聚合的聚丙烯酰胺凝胶放到