高效液相色谱仪主要包括哪几个部分
高效液相色谱仪般由溶剂输送系统、进样系统、分离系统(色谱柱)、检测系统和数据处理与记录系统组成,具体包括储液器、输液泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪或数据工作站等几部分。其整体组成类似于气相色谱,但是针对其流动相为液体的特点作出很多调整。HPLC的输液泵要求输液量恒定平稳;进样系统要求进样便利切换严密;由于液体流动相粘度远远高于气体,为了减低柱压高效液相色谱的色谱柱一般比较粗,长度也远小于气相色谱柱。HPLC应用非常广泛,几乎遍及定量定性分析的各个领域。使用高效液相色谱时,液体待检测物被注入色谱柱,通过压力在固定相中移动,由于被测物种不同物质与固定相的相互作用不同,不同的物质顺序离开色谱柱,通过检测器得到不同的峰信号,最后通过分析比对这些信号来判断待测物所含有的物质。......阅读全文
高效液相色谱仪的使用步骤
高效液相色谱仪也叫高压液相色谱、高速液相色谱、高分离度液相色谱等,它是在经典液相色谱法的基础上,于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀,小颗粒具有高柱效,但会引起高阻力,需用高压输送流动相,故又称高压液相色谱。又因分析速度快而称为高速液相色谱。1
高效液相色谱仪应用举例(三)
例9.糖类分析(食品分析)样 品:含果糖等6种糖类物质的混合物色谱仪:“南京科捷LC600”液相色谱仪,四元梯度泵,色谱工作站检测器:Mark ⅡA型ELSD Alltech 蒸发光散射检测器漂移管温度为100℃,氮气流速为2.2L/min。色谱柱:Absorbosphere, NH2 ,柱长25c
高效液相色谱仪过滤操纵要点
当任何颗粒物进入高效液相色谱仪时,都会被高效液相色谱仪色谱柱入口处的筛板堵塞。结果表明,高效液相色谱仪色谱柱堵塞的主要原因是系统压力增大,高效液相色谱仪色谱峰畸变。因此,有必要采取各种预防措施,包括商品仪表本身的操作步骤和各种过滤器设计,防止或减少颗粒物进入HPLC系统,从而延长仪器和色谱柱的使用寿
高效液相色谱仪仪器工作原理
高效液相色谱仪仪器工作原理高效液相色谱仪是实现液相色谱分析的仪器设备,半个世纪以来,随着科学技术的发展,HPLC仪器也经历了几次重大改进,至今已成为性能齐全,提供数据可靠,在分离科学领域中占据重要地位的分析仪器。高效液相色谱仪的基本单元组成,高效液相色谱系统至少应包括高压输液系统、进样器、色谱柱、检
高效液相色谱仪脱气常用方法
脱气的必要性 流动相脱气是HPLC 系统能得到可靠数据的一个很有效的措施。HPLC 泵在输送液体时要产生很大的力量,由于气体的压缩比与液体相比大的多,因而当气泡存在时,我们发现瞬间的流速降低和系统压力下降。如果这个气泡足够大,液相泵将不能输送任何溶剂,而且如果压力低于预先设定的压力低限,泵将停
高效液相色谱仪的操作步骤
高效液相色谱仪操作步骤: 1). 过滤流动相,根据需要选择不同的滤膜. 2). 对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。 3). 打开hplc工作站(包括计算机软件和色谱仪),连接好流动相管道,连接检测系统。 4). 进入hplc控制界面主菜单,点击manual,
高效液相色谱仪的应用实例
气相色谱法与高效液相色谱法的比较:气相色谱法虽具有分离能力好,灵敏度高,分析速度快,操作方便等优点,但是受技术条件的限制,沸点太高的物质或热稳定性差的物质都难于应用气相色谱法进行分析。而高效液相色谱法,只要求试样能制成溶液,而不需要气化,因此不受试样挥发性的限制。对于高沸点、热稳定性差、相对分子量大
高效液相色谱仪的工作原理
高效液相色谱仪的工作原理:储液器中的流动相被高压泵打入检测系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相)内,由于样本溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数,在两相中作相对运动时,经过反复多次的“吸附-解吸”的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别,被分离成单个组分依次从柱内流出
高效液相色谱仪进样系统
高效液相色谱仪进样系统(1)六通阀进样阀 进样阀种类繁多常用的六通阀进样阀。进样体积可通过选择不同体积定量管来改变,常规高效液相色谱仪中通常使用的是10μL和20μL体积的定量管。其手柄有两个位置:一个位置为采样位置(Load),可用平头微量注射器(体积应约为定量管体积的4~5倍)注入样品溶液,样
高效液相色谱仪的维护经验
一.混合溶剂必须过滤并混合,如果要混合然后过滤,则仅有可能使用有机,并且绝对不可能使用水系统由于水系统的物质是纤维素有机相或多或少会溶解少量纤维素,造成污染。二.标准样品或样品最好用流动相溶解这样就可以避免很多麻烦。三.hplc柱加热升温的目的一方面是为了增加溶质的溶解度另一方面是为了降低溶剂的粘度
高效液相色谱仪的分离原理
使用将特定的液态物质涂于担体表面,或化学键合于担体表面而形成的固定相,分离原理是根据被分离的组分在流动相和固定相中溶解度不同而分离。分离过程是一个分配平衡过程。涂布式固定相应具有良好的惰性;流动相必须预先用固定相饱和,以减少固定相从担体表面流失;温度的变化和不同批号流动相的区别常引起柱子的变化;另外
高效液相色谱仪的工作原理
高效液相色谱仪的工作原理:储液器中的流动相被高压泵打入检测系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相)内,由于样本溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数,在两相中作相对运动时,经过反复多次的“吸附-解吸”的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别,被分离成单个组分依次从柱内流出
高效液相色谱仪脱气常用方法
在食品分析中,无论是残留分析还是成分分析,HPLC 也已成为不可或缺的分析仪器。流动相脱气是HPLC 系统能得到可靠数据的一个很有效的措施。下面分析一下,高效液相色谱脱气的必要性,并总结归纳了脱气常用的方法。一、脱气的必要性 流动相脱气是HPLC 系统能得到可靠数据的一个很有效的措施。HPLC
高效液相色谱仪流动相概述
根据流动相所起的作用,高效液相色谱仪流动相可分为底剂和洗脱剂。底剂决定基本的色谱分离情况,洗脱剂是为了调节样品组分的滞留并对某几个组分具有选择性的分离作用。流动相又称洗脱剂、淋洗液、展层剂或溶剂。一、流动相选择的一般要求:1、流动相的纯度。2、流动相与固定相不互溶,不发生化学反应。3、对样品要有适宜
高效液相色谱仪应用举例(五)
例16.多肽分析(生物)样 品:含G-Y等3种多肽物质的混合物色谱仪:“南京科捷LC600”液相色谱仪,配有色谱工作站检测器:ELSD美国Alltech MKⅢ蒸发激光散射检测器漂移管温度为110℃,氮气流速为2.19L/min色谱柱:AlltimaTM C18 ,5μm,柱长25cm,柱径4.6m
高效液相色谱仪的使用问题
1. 色谱柱中的流动相会排干吗? 不少做色谱分离试验的人遇到过这样的情形:不慎未及时补充流动相,泵将溶剂瓶中的流动相吸干了,HPLC系统由此而停止工作了。如此情况是否会损坏色谱柱?泵是否已将色谱柱中所有流动相都排干了?色谱柱还能使用吗?事实上,如果泵将溶剂瓶中的流动相吸干,并不会造成色谱柱的损坏
高效液相色谱仪滤芯如何清洗
用20%HNO3, 超声30 min, 后用双蒸水, 超30min,重复这一步骤到pH=7. 然后再用50% MeOH (HPLC gradient grade 的水和MeOH)再超30min, 可能会有改进,不过一般俺是直接换个新的.不知你说的滤芯,是指哪个?如果是石英的溶剂过滤头,只能用HNO3
高效液相色谱仪的应用特点
高效液相色谱更适宜于分离、分析高沸点、热稳定性差、有生理活性及相对分子量比较大的物质,因而广泛应用于核酸、肽类、内酯、稠环芳烃、高聚物、药物、人体代谢产物、表面活性剂,抗氧化剂、杀虫剂、除锈剂的分析等物质的分析。
高效液相色谱仪的基本操作
一、实验准备阶段需要配置好实用所需的流动相,要注意所使用的流动相不能对实验或设备造成影响或损害(比如堵塞或腐蚀)。准备好流动相之后,需要对仪器及色谱柱进行冲洗和平衡,确保仪器压力正常,基线稳定。样品填写需要经过必要的净化处理,过0.45um以下微孔滤膜确保样品是澄清溶液,并装入合适的液相色谱样品瓶待
高效液相色谱仪的色谱介绍
(high performance liquid chromatography,HPLC)也叫高压液相色谱(high pressure liquid chromatography)、高速液相色谱(high speed liquid chromatography)、高分离度液相色谱(high re
高效液相色谱仪应用举例(一)
例1.稠环芳烃分析(环境气体分析)样 品:含六苯并苯等8种稠环芳烃的混合物色谱仪:“南京科捷LC600”液相色谱仪,配有色谱工作站检测器:UV紫外检测器,340nm色谱柱:C18键合相(ODS-224),5μm,柱长25cm,柱径4.6mm流动相:甲醇-二氯甲烷(8:2)混合溶剂流 速:1mL/mi
高效液相色谱仪的分离原理
储液器中的流动相被高压泵打入检测系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相)内,由于样本溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数,在两相中作相对运动时,经过反复多次的“吸附-解吸”的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别,被分离成单个组分依次从柱内流出,通过检测器时,样本浓度被
高效液相色谱仪维护保养技巧
高效液相色谱仪维护保养技巧流动相的要求液相色谱是指样品组分在柱填料和流动相之间进行的物质交换以达到分离的目的因此流动相要求具有以下特点:纯度流动相在使用前必须使用高效液相色谱仪试剂和过滤器去除颗粒杂质和其他物质(用0.45um或更细的膜过滤)杂质在色谱柱上的积累将影响色谱柱的使用寿命。溶解度样品的溶
高效液相色谱仪的输液系统
该系统包括高压泵、流动相贮存器和梯度仪三部分。高压泵的一般压强为l.47~4.4X107Pa,流速可调且稳定,当高压流动相通过层析柱时,可降低样品在柱中的扩散效应,可加快其在柱中的移动速度,这对提高分辨率、回收样品、保持样品的生物活性等都是有利的。流动相贮存错和梯度仪,可使流动相随固定相和样品的
高效液相色谱仪日常维护保养
1、流动相的要求:高效液相级色谱醇,二次蒸馏水,缓冲盐一定要过滤;流动相脱气至关重要(可采用抽滤,超声波脱气等方法)2、吸滤头:特殊情况下可拆下滤头抽取以判断其中是否堵塞;亦可用注射器吸取流动相通过吸滤头打出以判断其是否堵塞。若有堵塞情况可用异丙醇超声波清洗;清洗不成功则需要更换。3、单向阀:如
高效液相色谱仪应用举例(四)
例12.甾族化合物分析样 品:含孕酮等4种物质的混合物色谱仪:“南京科捷LC600”液相色谱仪,四元梯度泵,色谱工作站检测器:Mark ⅡA型ELSD Alltech 蒸发光散射检测器漂移管温度为135℃,氮气流速为1.2L/min。色谱柱:Hyperil C18 ,5μm,柱长25cm,柱径4.6
高效液相色谱仪的分离系统
高效液相色谱仪的分离系统由色谱柱、色谱柱的连接部件、柱恒温装置和固定相等组成。一、色谱柱:高效液相色谱仪的色谱柱一般用内部抛光的不锈钢制成,柱内径为 1~4 mm,柱长为 10~50 cm,柱形多为直形,内部充满微粒固定相。近年来,由于高性能填充剂的细粒化,3~5um 微粒填料的使用,趋向柱内径为
高效液相色谱仪日常维护经验
一.混合溶剂在混合前必须过滤。在混合和过滤的情况下,只能使用有机溶剂,不能使用水系统。由于水系统的物质是纤维素,有机相或多或少地溶解了少量的纤维素,造成污染。二.标准样品或样品应在流动相中溶解,避免了许多麻烦。三.升温提高色谱柱的温度部分是为了增加溶质的溶解度,更重要的是降低溶剂的粘度,从而提高色谱
高效液相色谱仪常见压力问题
一、色谱反压介绍 流动相流经管路及色谱柱时会有阻力,即所谓的反压,又称系统压力。 影响色谱系统反压的因素: 流动相的粘度是产生反压的主要原因,粘度越大,反压越高; 流速对反压的影响是线性关系,流速越大,反压越高; 温度对反压的影响是反比关系,温度升高,反压降低; 反压与色谱柱
高效液相色谱仪操作规程
操作过程:启动前,应按待用样品的方法要求配制流动相,标准样品和所用样品流动相0.22μm膜过滤后超声脱气30min在A、B两阶段,A管路与蓝色盖瓶的水相连接,B管路与蓝色盖瓶的有机相连接。确保每天使用超声波和超滤水及有机相。使用后,所有样品均为过膜(0.22或0.45μm膜)。开机步骤:依次打开电脑