实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题十
C18 柱,后面黑色的是我以前跑的图,前面是我现在跑的图形,完全一样的东西,只是流动相不是一批配的(流动相的成分没变),中间柱子别人用过了,峰型怎么发生了这么大的变化啊?可能的原因是什么啊?是不是柱子出了问题啊?答:从两个图对比很明显可以看出是柱效严重下降,且伴有肩峰。不同时间配的流动相,如果成分和 pH 没变的话,肯定不会造成这个结果。估计是别人用柱子过程中,造成了柱头塌陷、柱头污染以及固定相流失等严重问题,如样品太脏,流动相或样品 pH 太高或太低,都会造成这个结果。你可以试着用色谱柱清洗和再生的方法反冲维护一下,但不能保证一定能回到原来的效果。再生如果不行,考虑挖补柱头填料,实在不行,柱子也只能报废。建议柱子最好还是专门用于一种方法比较好,像你这种情况,都搞不清别人怎么用柱子的,分析解决问题就相当难。......阅读全文
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题三十七
测定多肽样品时,十几肽或者二十几肽时,有时峰前延的比较厉害,有时峰拖尾比较厉害,这是什么原因呢?是样品的问题还是柱子的问题?答:峰有时候前延,有时候拖尾,一般不是色谱柱的问题,应该是样品和色谱柱填料的作用问题,可以说如果色谱柱类型选择没问题,关键就是色谱条件的选择。包括进样量、样品溶剂、流动相组成(
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题七十一
如果不使用不锈钢接头,而改用PEEK头,是否可以完全解决接头匹配问题? 答:色谱柱接头其实大都不是色谱柱厂商自己生产的,供货商有多个,VICI,Upchurch,Parker 等,他们的标准相互之间不统一,那色谱柱接头的标准就统一不起来。不过一般这个问题也不难解决的,换个接头就可以了,而且现在有了万
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题七十五
预柱或保护柱用还是不用的问题!原来分析中药品种时,我一直都是用保护柱。但来到新公司后,发现大家都没有使用,几个实验室连保护柱都没找到一个,也就是说大家从来都没有用过。后来问一个老员工,说是有可能影响药品分析。我就想问:安装保护柱后会影响样品分析吗?我们做的大多是头孢类的抗生素。答:应该这样说,加上保
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题七十六
国产色谱柱在市场上占有比例如何啊?国内色谱柱市场还没有人进行过科学统计,连一年色谱柱销售总量也众说纷云,更别说国内生产色谱柱所占份额了。我估计是占 30% 左右吧。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题七十七
色谱柱为什么要国外生产填料并填装完成成品卖到国内？答:国内填装会出现质量小问题,和国内目前普遍做事没有国外严谨有关吧。如果工艺技术上没有问题,又能制订并切实执行一整套严格的生产质量管理措施,国内填装和国外填装并无区别。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题七十九
如果柱子取下来放置一段时间,需要做什么保护吗?答:对一般的反相柱,也就是洗干净后放到纯甲醇(乙腈)或者是 80% 左右的甲醇(乙腈)水中,然后用堵头塞紧柱两头,以免保存溶剂挥发,应该不需要做特殊的保护。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题三十一
一般正常使用一个 C18 柱能用多长时间?答:柱寿命一般不按时间计算,按持续进样针数比较科学。一般正常使用维护,不超过 pH 和温度等范围,C18 柱能达到 500-2000 针进样的寿命,视样品干净程度的不同而不同。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题三十四
三乙胺磷酸盐缓冲液作流动相,柱压一天比一天高,该怎么样解决?答:把柱子再生下,再生的方法搜一下有很多反冲对绝大部分色谱柱都是可行的, 效果不错。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题三十二
柱塞板可不可拆下用超声波清洗,会有什么不良后果?答:不建议将柱筛板拆下清洗,因为拆下承压的柱筛板会导致柱床发生变化,影响色谱性能。应该对污染的色谱柱先进行清洗维护,维护没有效果,再把拆洗柱筛板作为最后的手段。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题三十六
柱子的平衡时间跟填料关系大吗?哪种最快,哪种最慢?答:根据色谱速率理论,粒径越小,柱效越高,而且当粒径小到亚 2 微米左右时,线速度的提高,其分离度就不再降低,从而改变了许久以来人们不得不在 “速度和分离度之间取舍” 的局面。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题五十七
“磷酸盐缓冲盐渗透力强,有加快硅胶溶解的副作用,它的存在会降低 pH 使用范围。”,既然这样,经常使用,柱子寿命是否也下降的快呀?答:经常用磷酸盐,在其它条件差不多一样的情况下,柱子寿命肯定比不用磷酸缓冲盐相对短一些。但用磷酸盐也有不可取代的优点吧,否则不可能现在大部分人还在用。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题七十四
用的是四元梯度泵 A50% 甲醇 B50% 水 经常出现停或进气泡这是什么原因?答:水 / 甲醇比例在 55:45 时,黏度和柱压有个极大值。50:50 接近了这个极值,柱压是比较高的,但影响柱压最大的还是填料粒径和色谱柱内径,你这个实例中不知用的什么规格的色谱柱?系统压力高,可能会因溶剂泵中
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题五十五
测试样品时,经常会关心柱压是否太高,但是在购买色谱柱时,并没有说每一根色谱柱的最大使用压力是多少?针对这样的情况,用户怎么判断柱压是否超过该柱的极限?答:装柱时的压力比使用时高很多,所以柱压对色谱柱本身在使用时没有极限问题存在,倒是一般仪器有个 40Mpa 的上限。如果色谱分离度还能满足分析方法要求
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题五十九
色谱柱的柱头类型与不锈钢毛细管接头有 6 种连接方式(在讲义里面提到),那么我们用户一般是液相色谱仪是固定某一个厂家,而是根据样品检测需要更换不同类型的色谱柱,那么怎么判断我所购买的色谱柱是否与不锈钢毛细管是否匹配呢,我之前只是知道安捷伦和 waters 都有规定他们自己家的柱子与自己家的仪器配套是
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题七十八
流动相中加入适量的四氢呋喃可以改善峰形的机理是什么?答:《高效液相色谱方法及应用》于世林编著的上面说:甲醇为质子给予体、乙腈为质子接受体、四氢呋喃是偶极溶剂,应该除了极性影响,还有另外的影响因素,至于分离机理,还是比较复杂的,不能看成是个万能方法。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题五十一
UPLC 色谱柱可以反冲吗?hplc 的色谱柱可以简单反冲,但是,uplc 的色谱柱. 也是一样的吗?如果压力偏高,该怎么办?答:如果两端筛板孔径对称,UPLC 柱应该也是可以反冲的。发现压力偏高,当然也可以用反冲清洗的方法维护,uplc 柱和普通色谱柱比,只是压力高一点,不应该有什么特殊吧。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题七十二
反冲色谱柱的方法,是不连检测器吗?答:反冲就是将柱子反向连到系统中。因为有污染物反冲出来,当然不连检测器,出液端直接接到废液瓶就可以。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题七十一
waters AtlantisC18 柱可以用较高比例的流动相,那麽用完后应该怎麽清洗?在什麽体系中保存比教合适?答:反相柱都可以用下面通用的方法清洗维护:流动相中不含缓冲盐 。分析完成后,用甲醇(或乙腈):水=90:10 反向冲洗色谱柱 45min。流动相中含有缓冲盐。分析完成后,先用甲醇(或乙
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题三十八
色谱柱的安装有什么技巧吗?只要保证不漏就行了吗?还有所谓的死体积怎么测定呢?答:色谱柱安装技巧不多,只要接头和柱头匹配,确实拧紧不漏就可以了,但也要注意不要拧得太紧以至于损伤螺纹。所谓死体积就是完全不保留的物质出峰时从进样到流过色谱柱的总体积,一般用极性非常强的尿嘧啶的出峰来测定。死体积包括柱体积(
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题五十八
相对于气相色谱,液相的优势在哪里?做防腐剂分析时,流动相加入乙酸铵才可以出峰,原理是什么?答:液相和气相相比的优势有很多, 我认为主要在于应用范围更广。气相只限于容易气化的低分子量物质的分析测定,对象大部分是基础化工原材料;而任何能溶解于某溶剂的物质都能用液相分析,适用对象是分子量从几十到几万的广大
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题七十三
填料方法的前三种都是湿法吗,能不能对四种填充方法做一个简短的说明?资料显示:在正常条件下,填料粒度>20µm 时,干法填充制备柱较为合适;颗粒
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题五十六
CN 柱的保存需要在低温条件,但是又不能太低,使固定相冻结,怎么控制这个温度?怎么判断固定相是否被冻结?固定相冻结后会是什么样的现象?答:所谓低温储存,就是放到阴凉处或者放到冰箱的冷藏室。储存液只要不是纯水,冰点都比较低,纯甲醇的冰点是零下 90 度以下了。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题三十九
C18 柱如果之前曾有些天一直保存在酸性环境中,会对柱子有什么损坏吗?ph 在 2 左右。答:pH2 左右容易使键合在硅胶基质上的固定相水解流失,包括 C18 和封尾试剂的水解,封尾试剂相对更容易水解。不知道你保存的酸性环境是不是含有缓冲盐,如果不含缓冲盐,只是短期几天保存在酸性流动相中,也不必过份
实验室分析仪器液相色谱仪常见问题分析色谱柱维护
①建议检测前样品和流动相进行过滤。②建议每天做完样品后及时进行清洗。③常规检测测试完后直接把色谱柱反向连接采用90%有机相冲洗45min,最后保存在纯甲醇或纯乙腈中。④使用缓冲盐条件:a等度条件:使用缓冲盐之前和之后都用过渡流动相以1ml/min流速冲洗45min。b梯度条件:使用缓冲盐之前与初始流
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题三十三
新出厂液相色谱柱,保护溶剂一般是什么?怎样进行平衡清洗比较好,一般要平衡多长时间比较好?答:柱子类型不同,保存溶剂也会不一样吧,具体要看说明书的说明。对于反相柱,一般用甲醇(乙腈)保存,也有用 80% 左右甲醇浓度的甲醇 / 水保存的。一般用流动相平衡冲洗 10-20 个柱体积即可(注意:柱体积不等
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题三十三
据说液相色谱柱柱压达到一定高度就不能使用了,请问一般达到多高,用甲醇和乙腈是不是不一样?答:柱压不是色谱柱不能使用的唯一因素,分离度才是最重要的。柱压只要没高到仪器不能承受的地步,例如超过 300bar,就可以一直使用。甲醇的粘度比乙腈高,同样状况的柱子,如果用甲醇做流动相,柱压可能超了,换用乙腈会
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题七十一
做多肽药物时遇到下列问题:1)基线不稳定波动大,流动相 A :1%TFA 水溶液 B:1%TFA 乙腈溶液检测波长 210nm 流速 1.0ml/ml 什么原因?怎么解决?TFA 有什么作用?流动相中不加 TFA 见不到主峰,基线良好。2)做完肽类样品时怎么冲洗 C18 比较好;3)药典上
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题六十三
同样类型柱子还有长度,粒径等差异,这些该怎么去选择?答:长度和粒径都是用来改变柱效的,选择原则是够用就好。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题四十八
在梯度洗脱的时候,如果整个时间程序越长,保留时间的重现性越差,尤其是后出的峰重现性差更明显,我猜估计是流量本身的误差引起的,但是怎么尽量避免这种情况的出现,使保留时间重现性更好?答:这个要控制好环境温度和柱温,易挥发的流动相要适当密封,同时保留时间的漂移与仪器的精度也有关系。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题八十二
色谱柱的技术都有哪些?比如封尾等,这些技术在应用时都体现在哪里?答:色谱柱技术包括填料技术和装柱技术,填料技术自不待言,填料的好坏对色谱柱分离性能和选择性有决定性影响。装柱技术也没有想象中的这么简单,不同固定相、不同粒径、不同柱管内径和长度,装柱工艺都有所不同,要装出紧密、稳定、均一的柱床,更多是一