实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题二十
柱子才用了四个月,是什么原因呢?是不是塌陷了呢?有什么补救的办法吗?答:用了四个月峰形拖尾是很正常的,需要维护清洗一下色谱柱以清除引起拖尾的柱头污染。如果柱头塌陷,则不好办,从其它废柱子里取点填料填补塌陷,可以一试,但效果不一定好。色谱柱是耗材,测定进样针数如果达到 500 以上了,也算是物有所值,物尽其用了,报废了也不可惜。......阅读全文
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题四
不同的基质杂质含海量是不同的,我用 C18 分析时有可能一次就污染了,我用高流速,和反向冲洗都解决不了,是不是这根柱子就废了,有没有其他的办法?答:高流速反向冲洗是对的,关键你用了什么溶剂冲洗呢?用原来的流动相冲洗肯定不管用,要不然就不会累积在柱子上了。你应该用流动相中的强溶剂 B 冲洗,如果不行,
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题八
流动相中加入四氢呋喃对柱子有损害吗? 我现在分析一样品流动相中用到 20% 的四氢呋喃才能把峰分到基线. 但柱子只能用一个星期分离效果就不好了. 请问是四氢呋喃损坏了柱子吗?答:四氢呋喃(THF)是反相色谱中洗脱能力极强的溶剂,比甲醇和乙腈都强很多。在流动相中加入 THF 能改善某些难分离的物质对的
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题十六
同样都是 C18 柱子,液相色谱柱和 SPE ，有什么区别?答:HPLC 柱子和 SPE 小柱的对比:对比项目 HPLC SPE柱管 不锈钢管 塑料管粒径(um) 3,5,10
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题五十
常规 LC 的柱子粒度小,柱效高,现在有 3.5um 的常规柱,不知道用 3.5um*250 的压力与 4.6um 的压力相差多少?答:一般柱子 4.6mmx250mm 指的是其内径和长度。粒径才用 um 的单位,但一般标的是 5um,也有 3.5um 的。其它条件一样,光粒径是 3.5um 和 5
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题十九
流动相里之前有酸的,做完后单纯用乙腈冲洗,能把酸冲洗干净吗?之前他们是这样冲的,现在怀疑柱子塌陷了,会不会是长时间在酸性环境中造成的呢?答:流动相里有酸,应该先用纯水或 80:20 的水 / 乙腈溶剂冲洗吧。如果一直在酸性环境,固定相容易流失,造成保留时间前移和其它色谱性能下降。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题五十二
色谱条件是成熟没问题,但是该条件下保留的物质变的不被保留,比如本来保留时间 15 分钟却怎么调比例都是 2-3 分钟就出峰了,维护后,下次再使用又正常了,什么样原因啊?答:最大可能是发生相塌陷了。C18 柱和高密键合封尾的 C8 柱,在高含水流动相下会发生相塌陷,后果就是保留能力大幅下降。用有机相比
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题五十三
滤膜的材质分了这么几种:再生纤维素、聚四氟乙烯、硝酸纤维和醋酸纤维等,之前只知道有有机系和水系之分?各种不同材质的滤膜适合于什么样的样品?答:再生纤维素膜:具有蛋白质吸收低,适用于水溶性样品和有机溶剂;聚四氟乙烯:适用于所有有机溶剂,酸和盐;尼龙 66:适用于绝大多数有机溶剂和水溶液,可用于强酸,7
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题五十四
使用缓冲液不当,使硅胶溶解并重新形成粉末后,会出现什么样的异常情况?怎么处理?答:出现异常就是柱压升高。小粉末在流动相不断冲洗带动下,最后会聚集在柱子出口端,沉积在后筛板。处理方法只有拆下后筛板进行清洗或更换,但这样做会影响到柱床,处理后柱效会下降。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题三十五
关于配置流动相,有机相我们可以甲醇乙腈同时用,这个是基于什么考虑的?是不是根据甲醇乙腈选择性不同、样品在这个两者的溶解度的差异以及调节洗流动相脱能力来考虑的?答:甲醇和乙腈同时用,可以获得单纯的甲醇或者乙腈不一样的选择性,而且洗脱能力也会改变,根据多元流动相的强度因素 Sab.....=Saψa+S
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题三十七
测定多肽样品时,十几肽或者二十几肽时,有时峰前延的比较厉害,有时峰拖尾比较厉害,这是什么原因呢?是样品的问题还是柱子的问题?答:峰有时候前延,有时候拖尾,一般不是色谱柱的问题,应该是样品和色谱柱填料的作用问题,可以说如果色谱柱类型选择没问题,关键就是色谱条件的选择。包括进样量、样品溶剂、流动相组成(
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题七十一
如果不使用不锈钢接头,而改用PEEK头,是否可以完全解决接头匹配问题? 答:色谱柱接头其实大都不是色谱柱厂商自己生产的,供货商有多个,VICI,Upchurch,Parker 等,他们的标准相互之间不统一,那色谱柱接头的标准就统一不起来。不过一般这个问题也不难解决的,换个接头就可以了,而且现在有了万
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题七十五
预柱或保护柱用还是不用的问题!原来分析中药品种时,我一直都是用保护柱。但来到新公司后,发现大家都没有使用,几个实验室连保护柱都没找到一个,也就是说大家从来都没有用过。后来问一个老员工,说是有可能影响药品分析。我就想问:安装保护柱后会影响样品分析吗?我们做的大多是头孢类的抗生素。答:应该这样说,加上保
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题七十六
国产色谱柱在市场上占有比例如何啊?国内色谱柱市场还没有人进行过科学统计,连一年色谱柱销售总量也众说纷云,更别说国内生产色谱柱所占份额了。我估计是占 30% 左右吧。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题七十七
色谱柱为什么要国外生产填料并填装完成成品卖到国内？答:国内填装会出现质量小问题,和国内目前普遍做事没有国外严谨有关吧。如果工艺技术上没有问题,又能制订并切实执行一整套严格的生产质量管理措施,国内填装和国外填装并无区别。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题七十九
如果柱子取下来放置一段时间,需要做什么保护吗?答:对一般的反相柱,也就是洗干净后放到纯甲醇(乙腈)或者是 80% 左右的甲醇(乙腈)水中,然后用堵头塞紧柱两头,以免保存溶剂挥发,应该不需要做特殊的保护。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题三十一
一般正常使用一个 C18 柱能用多长时间?答:柱寿命一般不按时间计算,按持续进样针数比较科学。一般正常使用维护,不超过 pH 和温度等范围,C18 柱能达到 500-2000 针进样的寿命,视样品干净程度的不同而不同。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题三十四
三乙胺磷酸盐缓冲液作流动相,柱压一天比一天高,该怎么样解决?答:把柱子再生下,再生的方法搜一下有很多反冲对绝大部分色谱柱都是可行的, 效果不错。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题三十二
柱塞板可不可拆下用超声波清洗,会有什么不良后果?答:不建议将柱筛板拆下清洗,因为拆下承压的柱筛板会导致柱床发生变化,影响色谱性能。应该对污染的色谱柱先进行清洗维护,维护没有效果,再把拆洗柱筛板作为最后的手段。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题三十六
柱子的平衡时间跟填料关系大吗?哪种最快,哪种最慢?答:根据色谱速率理论,粒径越小,柱效越高,而且当粒径小到亚 2 微米左右时,线速度的提高,其分离度就不再降低,从而改变了许久以来人们不得不在 “速度和分离度之间取舍” 的局面。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题五十七
“磷酸盐缓冲盐渗透力强,有加快硅胶溶解的副作用,它的存在会降低 pH 使用范围。”,既然这样,经常使用,柱子寿命是否也下降的快呀?答:经常用磷酸盐,在其它条件差不多一样的情况下,柱子寿命肯定比不用磷酸缓冲盐相对短一些。但用磷酸盐也有不可取代的优点吧,否则不可能现在大部分人还在用。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题七十四
用的是四元梯度泵 A50% 甲醇 B50% 水 经常出现停或进气泡这是什么原因?答:水 / 甲醇比例在 55:45 时,黏度和柱压有个极大值。50:50 接近了这个极值,柱压是比较高的,但影响柱压最大的还是填料粒径和色谱柱内径,你这个实例中不知用的什么规格的色谱柱?系统压力高,可能会因溶剂泵中
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题五十五
测试样品时,经常会关心柱压是否太高,但是在购买色谱柱时,并没有说每一根色谱柱的最大使用压力是多少?针对这样的情况,用户怎么判断柱压是否超过该柱的极限?答:装柱时的压力比使用时高很多,所以柱压对色谱柱本身在使用时没有极限问题存在,倒是一般仪器有个 40Mpa 的上限。如果色谱分离度还能满足分析方法要求
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题七十八
流动相中加入适量的四氢呋喃可以改善峰形的机理是什么?答:《高效液相色谱方法及应用》于世林编著的上面说:甲醇为质子给予体、乙腈为质子接受体、四氢呋喃是偶极溶剂,应该除了极性影响,还有另外的影响因素,至于分离机理,还是比较复杂的,不能看成是个万能方法。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题五十一
UPLC 色谱柱可以反冲吗?hplc 的色谱柱可以简单反冲,但是,uplc 的色谱柱. 也是一样的吗?如果压力偏高,该怎么办?答:如果两端筛板孔径对称,UPLC 柱应该也是可以反冲的。发现压力偏高,当然也可以用反冲清洗的方法维护,uplc 柱和普通色谱柱比,只是压力高一点,不应该有什么特殊吧。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题七十二
反冲色谱柱的方法,是不连检测器吗?答:反冲就是将柱子反向连到系统中。因为有污染物反冲出来,当然不连检测器,出液端直接接到废液瓶就可以。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题五十八
相对于气相色谱,液相的优势在哪里?做防腐剂分析时,流动相加入乙酸铵才可以出峰,原理是什么?答:液相和气相相比的优势有很多, 我认为主要在于应用范围更广。气相只限于容易气化的低分子量物质的分析测定,对象大部分是基础化工原材料;而任何能溶解于某溶剂的物质都能用液相分析,适用对象是分子量从几十到几万的广大
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题七十三
填料方法的前三种都是湿法吗,能不能对四种填充方法做一个简短的说明?资料显示:在正常条件下,填料粒度>20µm 时,干法填充制备柱较为合适;颗粒
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题三十九
C18 柱如果之前曾有些天一直保存在酸性环境中,会对柱子有什么损坏吗?ph 在 2 左右。答:pH2 左右容易使键合在硅胶基质上的固定相水解流失,包括 C18 和封尾试剂的水解,封尾试剂相对更容易水解。不知道你保存的酸性环境是不是含有缓冲盐,如果不含缓冲盐,只是短期几天保存在酸性流动相中,也不必过份
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题五十六
CN 柱的保存需要在低温条件,但是又不能太低,使固定相冻结,怎么控制这个温度?怎么判断固定相是否被冻结?固定相冻结后会是什么样的现象?答:所谓低温储存,就是放到阴凉处或者放到冰箱的冷藏室。储存液只要不是纯水,冰点都比较低,纯甲醇的冰点是零下 90 度以下了。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题三十八
色谱柱的安装有什么技巧吗?只要保证不漏就行了吗?还有所谓的死体积怎么测定呢?答:色谱柱安装技巧不多,只要接头和柱头匹配,确实拧紧不漏就可以了,但也要注意不要拧得太紧以至于损伤螺纹。所谓死体积就是完全不保留的物质出峰时从进样到流过色谱柱的总体积,一般用极性非常强的尿嘧啶的出峰来测定。死体积包括柱体积(