琼脂糖凝胶电泳对核酸的分离方法介绍

1.核酸分子大小与琼脂糖浓度的关系(1)DNA分子的大小 在凝胶中,DNA片段迁移距离(迁移率)与碱基对的对数成反比,因此通过已知大小的标准物移动的距离与未知片段的移动距离时行比较,便可测出未知片段的大小。但是当DNA分子大小超过20kb时,普通琼脂糖凝胶就很难将它们分开。此时电泳的迁移率不再依赖于分子大小,因此,就用琼脂糖凝胶电泳分离DNA时,分子大小不宜超过此值。(2)琼脂脂糖的浓度 如下表所示,不同大小的DNA需要用不同浓度的琼脂糖凝胶进行电泳分离。表 琼脂糖浓度与DNA分离范围琼脂糖浓度 /% 0.3 0.6 0.7 0.9 1.2 1.5 2.0线状DNA大小/kb60-520-110-0.87-0.56-0.44-0.23-0.12.核酸构型与琼脂糖凝胶电泳分离的关系不同构型DNA的移动速度次序为:供价闭环 DNA(covalently closed circular,cccDNA)>直线DNA>开环的双......阅读全文

琼脂糖凝胶电泳分离待测DNA样品原理简介

  Southern印迹杂交是先将DNA样品(含不同大小的DNA片段)先按片段长短进行分离,然后进行杂交。这样可确定杂交靶分子的大小。因此,制备DNA样品后需要进行电泳分离。在恒定电压下,将DNA样品放在0.8~1.0%琼脂糖凝胶中进行电泳,标准的琼脂糖凝胶电泳可分辨70-80000bp的DNA片段

琼脂糖凝胶电泳

琼脂糖凝胶电泳1.      用封边带封住塑料托盘开放的两边或清洁干燥的玻璃板的边缘形成一个模具,置一个水平支架上。2.      配制足量的电泳缓冲液(1×TAE或0.5×TBE)用以灌满电泳槽和配制凝胶。 配胶和灌满电泳槽使用同一批缓冲液。3.      根据欲分离DNA片段大小用电泳缓冲液配制

琼脂糖凝胶电泳

            实验方法原理 琼脂糖是 D- 和 L- 半乳糖残基通过 α (1→3)和 β (1→4) 糖苷键交替构成的线状聚合物。L- 半乳糖残基在 3 和 6 位之间形成脱水连接。琼脂糖链形成螺旋纤维,后者再聚合成半径 20~30 nm 的超螺旋结构。

琼脂糖凝胶电泳

实验方法原理 琼脂糖是 D- 和 L- 半乳糖残基通过 α (1→3)和 β (1→4) 糖苷键交替构成的线状聚合物。L- 半乳糖残基在 3 和 6 位之间形成脱水连接。琼脂糖链形成螺旋纤维,后者再聚合成半径 20~30 nm 的超螺旋结构。实验材料 DNA 样品DNA 大小标准品试剂、试剂盒 琼脂

琼脂糖凝胶电泳

   学习琼脂糖凝胶电泳的基本原理;  (2) 掌握使用水平式电泳仪的方法;  (3)掌握核酸琼脂糖凝胶电泳的基本操作  2实验原理  琼脂糖凝胶具有网络结构,物质分子通过时会受到阻力,大分子物质在涌动时受到的阻力大,因此在凝胶电泳中,带电颗粒的分离不仅取决于净电荷的性质和数量,而且还取决于分子大小

琼脂糖凝胶电泳

在凝胶电泳中,首先应用的是琼脂电泳,它具有下列优点:(1)琼脂含液体量 大,可达98-99%,近似自由电泳,但是样品的扩散度比自由电泳小,对蛋白质的吸附 极微。(2)琼脂作为支持体有均匀,区带整齐,分辨率高,重复性好等优点。(3) 电泳速度快。(4)透明而不吸收紫外线,可以直接用紫外检测仪作定量测定

琼脂糖凝胶电泳

琼脂糖凝胶电泳可以用于:(1)检测PCR结果;(2)分离不同大小的DNA条带。实验方法原理琼脂糖是 D- 和 L- 半乳糖残基通过 α (1→3)和 β (1→4) 糖苷键交替构成的线状聚合物。L- 半乳糖残基在 3 和 6 位之间形成脱水连接。琼脂糖链形成螺旋纤维,后者再聚合成半径 20~30 n

琼脂糖凝胶电泳

琼脂糖是从琼脂中提取出来的,是由D-半乳糖和3、6-脱水-L-半乳糖结合的链状多糖,含硫酸根比琼脂少,因而分离效果明显提高。琼脂糖电泳具有以下优点:①琼脂糖含液体量大,可达98%~99%,近似自由电泳,但样品的扩散度比自由电泳小,对蛋白质的吸附极微;⑦琼脂糖作为支持体有分辨率高、重复性好等优点;③电

关于琼脂糖凝胶电泳的操作流程介绍

  1、准备干净的配胶板和电泳槽  注意DNA酶污染的仪器可能会降解DNA,造成条带信号弱、模糊甚至缺失的现象。  2、电泳方法  一般的核酸检测只需要琼脂糖凝胶电泳就可以;如果需要分辨率高的电泳,特别是只有几个bp的差别应该选择聚丙烯酰胺凝胶电泳;用普通电泳不合适的巨大DNA链应该使用脉冲凝胶电泳

电泳技术(electrophoretic-techniques)简介2

⒈材料与试剂 醋酸纤维素膜一般使用市售商品,常用的电泳缓冲液为pH8.6的巴比妥缓冲液,浓度在0.05-0.09mol/L。⒉操作要点⑴膜的预处理:必须于电泳前将膜片浸泡于缓冲液,浸透后,取出膜片并用滤纸吸去多余的缓冲液,不可吸得过干。⑵加样:样品用量依样品浓度、本身性质、染色方法及检测方法等因素决

琼脂糖凝胶电泳(agarose-gel-electrophoresis)介绍

主要试剂:核酸电泳缓冲液有三种,即Tris-硼酸(TBE)、Tris-乙酸(TAE)和Tris-磷酸(TPE).TBE与TPE缓冲容量高,DNA分离效果好,但TPE在DNA段回收时含磷酸盐浓度高,容易使DNA沉淀.TAE缓冲容量低,但价格较便宜,因而推荐选用TBE.缓冲液中的EDTA可螯合二价阳离子

根据大小分离RNA:乙二醛化RNA的琼脂糖凝胶电泳

            实验方法原理 这个方法将乙二醛变性和琼脂糖凝胶电泳结合了起来(从 McMaster 和 Carmichael (1977), Thomas(1983) 的方法修改而来)。RNA 的自动乙二醛化、溴化乙锭染色及电泳缓冲液的修改由 Burne

根据大小分离RNA:乙二醛化RNA的琼脂糖凝胶电泳

这个方法将乙二醛变性和琼脂糖凝胶电泳结合了起来(从 McMaster 和 Carmichael (1977), Thomas(1983) 的方法修改而来)。RNA 的自动乙二醛化、溴化乙锭染色及电泳缓冲液的修改由 Burnett (1977)提供。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验

乳酸脱氢酶同工酶的分离(琼脂糖凝胶电泳法)

一 原理:来源于同一个体或组织,能催化同一反应,而蛋白结构不同的酶称为同工酶。  同工酶的蛋白结构有差别,它们的理化性质也就有所差异。因此可用电泳或其它方法将它们分离开来。例如乳酸脱氢酶(LDH)同工酶,它们都能催化乳酸脱氢产生丙酮酸,但经电泳法分离后,就有5个同工酶区带。  由于同工酶在不同组织,

根据大小分离RNA:乙二醛化RNA的琼脂糖凝胶电泳

实验方法原理 这个方法将乙二醛变性和琼脂糖凝胶电泳结合了起来(从 McMaster 和 Carmichael (1977), Thomas(1983) 的方法修改而来)。RNA 的自动乙二醛化、溴化乙锭染色及电泳缓冲液的修改由 Burnett (1977)提供。实验材料 RNA 样品RNA 大小标准

细胞调亡的研究方法:琼脂糖凝胶电泳

琼脂糖凝胶电泳检测调亡细胞1.用不同方法诱导细胞调亡后,取106调亡细胞,置1.5ml离心管中,用PBS洗涤一次。在微量离心机上全速离心5秒钟,去上清液。加入100μl含5mol/L异硫氰酸胍,100mmol/L 2-巯基乙醇的25mmol/L枸橼酸钠缓冲液pH7.0,在旋涡混悬器上混悬20秒钟,破

关于琼脂糖凝胶电泳的操作流程的介绍

  准备干净的配胶板和电泳槽  注意DNA酶污染的仪器可能会降解DNA,造成条带信号弱、模糊甚至缺失的现象。  电泳方法  一般的核酸检测只需要琼脂糖凝胶电泳就可以;如果需要分辨率高的电泳,特别是只有几个bp的差别应该选择聚丙烯酰胺凝胶电泳;用普通电泳不合适的巨大DNA链应该使用脉冲凝胶电泳。注意巨

琼脂糖电泳有何优缺点

琼脂糖凝胶电泳是用琼脂或琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。对于分子量较大的样品,如大分子核酸、病毒等,一般可采用孔径较大的琼脂糖凝胶进行电泳分离。  琼脂糖凝胶约可区分相差100bp的DNA片段,其分辨率虽比聚丙烯酰胺凝胶低,但它制备容易,分离范围广,尤其适于分离大片段DNA。普通琼脂糖凝胶分离DNA

什么是琼脂糖,由什么构成

什么是琼脂糖,由什么构成琼脂糖凝胶电泳是常用的分离和检测方法,琼脂是最常用的载体支持物,核酸分子具有电荷效应和分子筛效应,利用此特性可达到分离检测的目的。一、琼脂糖凝胶的特点天然琼脂(agar)是一种多聚糖,主要由琼脂糖(agarose,约占80%)及琼脂胶(agaropectin)组成。琼脂糖是由

琼脂糖凝胶电泳操作应注意哪些环节

琼脂糖凝胶电泳是常用的分离和检测方法,琼脂是最常用的载体支持物,核酸分子具有电荷效应和分子筛效应,利用此特性可达到分离检测的目的。一、琼脂糖凝胶的特点天然琼脂(agar)是一种多聚糖,主要由琼脂糖(agarose,约占80%)及琼脂胶(agaropectin)组成。琼脂糖是由半乳糖及其衍生物构成的中

核酸电泳—琼脂糖凝胶电泳的凝胶摄影和EB溶液的净化处理

  1、琼脂糖凝胶电泳—凝胶摄影  需配置135照相机,全色135胶卷,照相机固定架,近摄镜和红色滤光镜以及有机玻璃防护面罩。  操作需在暗室进行,将相机固定好,把凝胶放在紫外检测仪上适当位置,调焦,装上红色滤光片,按常规拍照。  亦可使用凝胶自动处理系统,但仪器费用较高。  2、琼脂糖凝胶电泳—E

RNA的琼脂糖凝胶电泳

一、实验目的掌握植物总RNA非变性胶电泳的原理和方法。二、实验原理RNA电泳可以在变性及非变性两种条件下进行。非变性电泳使用1.0%--1.4%的凝胶,不同的RNA条带也能分开,但无法判断其分子量。只有在完全变性的条件下,RNA的泳动率才与分子量的对数呈线性关系。因此要测定RNA分子量时,一定要用变

琼脂糖凝胶电泳的原理

琼脂糖凝胶电泳的原理:琼脂糖凝胶电泳是常用的用于分离、鉴定DNA、RNA分子混合物的方法,这种电泳方法以琼脂凝胶作为支持物,利用DNA分子在泳动时的电荷效应和分子筛效应,达到分离混合物的目的。DNA分子在高于其等电点的溶液中带负电,在电场中向阳极移动。在一定的电场强度下,DNA分子的迁移速度取决于分

琼脂糖凝胶电泳的原理

琼脂糖凝胶电泳的原理:琼脂糖凝胶具有网络结构,物质分子通过时会受到阻力,大分子物质在涌动时受到的阻力大,因此在凝胶电泳中,带电颗粒的分离不仅取决于净电荷的性质和数量,而且还取决于分子大小,这就大大提高了分辨能力。DNA分子在高于其等电点的溶液中带负电,在电场中向阳极移动。在一定的电场强度下,DNA分

琼脂糖凝胶电泳的原理

琼脂糖凝胶电泳的原理:琼脂糖凝胶电泳是常用的用于分离、鉴定DNA、RNA分子混合物的方法,这种电泳方法以琼脂凝胶作为支持物,利用DNA分子在泳动时的电荷效应和分子筛效应,达到分离混合物的目的。DNA分子在高于其等电点的溶液中带负电,在电场中向阳极移动。在一定的电场强度下,DNA分子的迁移速度取决于分

琼脂糖凝胶电泳的原理

琼脂糖凝胶电泳的原理:琼脂糖凝胶电泳是常用的用于分离、鉴定DNA、RNA分子混合物的方法,这种电泳方法以琼脂凝胶作为支持物,利用DNA分子在泳动时的电荷效应和分子筛效应,达到分离混合物的目的。DNA分子在高于其等电点的溶液中带负电,在电场中向阳极移动。在一定的电场强度下,DNA分子的迁移速度取决于分

琼脂糖凝胶电泳的原理

通过荧光染料染色来确定 DNA 的位置, 通过在紫外线下检查凝胶,荧光染料可以检测多达 20 pg 的双链 DNA。琼脂糖凝胶的分辨率比聚丙烯酰胺凝胶低,但分离范围更大。 在这个过程中,50 bp 到几兆碱基的 DNA 可以在琼脂糖凝胶中分离(最适合 50-20,000 bp)。琼脂糖是一种线性聚合

琼脂糖凝胶电泳的原理

原理如下:琼脂糖凝胶电泳是用琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。其分析原理与其他支持物电泳最主要区别是:它兼有“分子筛”和“电泳”的双重作用。琼脂糖凝胶具有网络结构,物质分子通过时会受到阻力,大分子物质在涌动时受到的阻力大,因此在凝胶电泳中,带电颗粒的分离不仅取决于净电荷的性质和数量,而且还取决于分子大

DNA的琼脂糖凝胶电泳

带电荷的物质在电场中的趋向运动称为电泳。电泳的种类多,应用非常广泛,它已成为分子生物学技术中分离生物大分子的重要手段。琼脂糖凝胶电泳由于其操作简单、快速、灵敏等优点,已成为分离和鉴定核酸的常用方法。实验目的:掌握琼脂糖凝胶电泳的原理,学习琼脂糖凝胶电泳的操作。实验材料:质粒DNA、BAC、植物总DN

琼脂糖凝胶电泳的原理

琼脂糖凝胶电泳是以琼脂糖为介质,对不同大小的DNA 或 RNA 实现分离的一种电泳方法。琼脂糖是一种多糖,具有亲水性,但是不带电荷。使得 DNA 在碱性条件下使其带负电荷(pH8.0 的缓冲液),在电流作用下,以琼脂糖凝胶为介质,由负极向正极移动,根据不同的 DNA 分子片段的大小和形状不同,在电场