体细胞杂交的实验方法介绍
所有操作均在超净工作台上进行。1.原生质体的分离和收集。2.将收集的两种不同材料的原生质体分别悬浮在0.16mol/L的CaCl2·2H2O(pH5.8~6.2)原生质体密度调整为2×105/ml左右(用血细胞计数板统计原生质体密度)。3.将两种原生质体悬液等量混合。4.用刻度吸管将混合的原生质体悬液滴在直径为60mm的平皿中,每皿滴7~8滴,每滴约0.1ml。然后静置10in,使原生质体巾在皿底上,形成一薄层。(应有3~5个平皿的重复)。5.用吸管将等量的PEG溶液缓慢地加在原生质体液滴上,再静置10~15min。此时可取一个平皿在倒置显微镜上观察原生质体间的粘连。6.用刻度吸管向原生质体液滴慢慢地加入高pH、商钙稀液。第一次加0.5ml,第2次1ml,第3、4次各2ml,每次之间间隔5min。7.将平皿稍微倾斜,吸去上清液,再缓缓加入4ml稀释液。5min后,再倾斜平皿,吸去上清液注意吸去上清液时勿使原生质体漂浮起来。8.用......阅读全文
植物体细胞杂交的概念
植物体细胞杂交(plant somatic hybridization),又称原生质体融合(Protoplast fusion )是指将植物不同种、属,甚至科间的原生质体通过人工方法诱导融合,然后进行离体培养,使其再生杂种植株的技术。植物细胞具有细胞壁,未脱壁的两个细胞是很难融合的,植物细胞只有在脱
植物体细胞杂交的过程
将植物细胞A与植物细胞B用纤维素酶和果胶酶处理,得到不含细胞壁的原生质体A和原生质体B,运用物理方法或是化学方法诱导融合,形成杂种细胞,再利用植物细胞培养技术将杂种细胞培养成杂种植物体。①杂交时间:植物细胞杂交是从细胞融合开始,到培育成的新植物体结束。a.原生质体制备:用酶解法去除细胞壁(纤维素酶和
克尔效应实验的实验方法介绍
1.放入克尔盒,并转动至消光位置;2.接通克尔盒的偏转电源,即可观察到屏幕上有光亮。改变两极板之间的电压,可以观察到屏幕上的光强会随之变化;3.保持两极板之间的电压不变,旋转克尔盒,同样可以观察到屏幕上光强变化。
植物体细胞杂交技术的步骤
①原生质体的分离。植物细胞之间有果胶质粘连,每个细胞之外还有一层纤维素组成的壁,因此,在分离原生质体时,首先要在一定浓度的酶液(果胶酶与纤维素酶)中保温,消去果胶质与纤维素后才能使原生质体分离出来。②原生质体的融合。不同种之间原生质体的融合,须选用一种融合诱导剂(聚乙二醇,或高钙CaCl2.2啹O,
植物体细胞杂交的技术分类
根据融合时细胞的完整程度,原生质体融合可分为两大类:对称融合(symmetric fusion)-即两个完整的细胞原生质体融合。非对称融合(asymmetric fusion)-利用物理或化学方法使某亲本的核或细胞质失活后再进行融合,它可以分为几种:用于细胞核或细胞质失活的方法分为物理和化学两大
关于垂体实验的方法介绍
脑垂体:53号切片,小牛垂体,甲基蓝伊红染色 被膜:结缔组织构成,染成天蓝色。 实质部:漏斗,漏斗腔(垂体腔),结节部,神经部(染成淡蓝色),中间部(染成粉红色),垂体裂和远侧部(染成紫色和红色)的位置关系。 与丘脑下部相连的部分称为漏斗柄,向下为正中隆起,正中隆起两侧为结节部。垂体的前部
相对定量实验的方法介绍
相对定量实验有两种方法:标准曲线法和CT值比较法。如果使用标准曲线法,可以使用绝对标准品,也可以使用相对标准品,而且相对标准品在实验操作上更为简便易行。相对标准品是只知道样品中DNA或RNA的稀释比例而不需要知道其分子数目的标准品,典型的做法是将一个已知pg数的样品做一系列梯度稀释。CT值比较法是
地乐施实验检查的实验方法介绍
家兔随机分成4组,除阳性对照组6只外,其余各组为每组8只,雌雄各半。25%氨基甲酸乙酯1g/kg,静注麻醉,测定Ⅱ导联心电图;开胸,经右心房进行冠状窦插管,插管经FF-030电磁血流量探头,探头接电磁血流量计读出冠状窦血流量,即冠状循环血流量。回血进颈外静脉回输体内[2]。十二指肠插管,供给药用
辐射性杂交产生体细胞杂交的过程
G3嵌板的产生→确定STSs→PCR体系及反应条件→构建RH图谱.
辐射性杂交产生体细胞杂交的原理
利用高剂量的X射线将候选染色体打断成若干片段,含有这种片段的细胞可与仓鼠细胞形成杂交克隆。在这种杂交中,人类染色体片段被插入到仓鼠染色体的中间部分,因此大部分克隆片段在进行有丝分裂时处于稳定的状态。利用类似于遗传重组原理和最大似然性的统计学方法来计算存在于DNA片段上的多态性或非多态性标记之间的断点
辐射性杂交产生体细胞杂交的优点
荧光原位杂交(FISH)法和辐射杂种细胞系(RH)技术是国际上最常用的基因定位的两种方法,各有优缺点。FISH可以定位基因组中多个同源位点,结果直观、可靠,而RH法则很困难。但是FISH法检测步骤繁杂,尤其受探针大小的影响较大,2kb以下的cDNA序列很难定位,而且结果需要有经验的细胞遗传学家进行分
辐射性杂交产生体细胞杂交的应用
辐射性杂交技术是继荧光原位杂交后新近建立的染色体定位方法,RH作图法提供了一种联系物理图和遗传图的方法,已成为当今构建人类基因组大尺度、高密度、连续的染色体图的常用方法之一。其用途主要有:EST定位、基因克隆、基因组作图、测定距离、寻找新基因等。
植物体细胞杂交的研究与发展
1960年,Cocking用酶法制备高等植物原生质体首次获得成功;1970年,Power首次用硝酸钠进行为诱导剂进行了较大规模的原生质体诱导融合;1971年,Nagata和Takebe首次从离体烟草原生质体培养中获得再生完整植株;1972年,Carlson首次获得粉蓝烟草和郎氏烟草的细胞杂种,这也是
植物体细胞杂交技术现在的应用
植物体细胞杂交又称原生质体融合,就是将不同种的植物体细胞,在一定条件下融合成杂种细胞,并把杂种细胞培育成新的植物体的技术。体细胞杂交在转移优良性状、改良作物、创造新型物种上显现了重要的应用前景。在农业上,科学家们利用这项技术,培育出了胡萝卜——羊角芹、白菜——甘蓝等种间或属间杂种,在生产具有较高的
水迷宫实验的方法步骤介绍
做水迷宫实验的正确姿势Richard G. Morris于1981年和1984年连续发表的两篇文献使水迷宫实验名动天下,三十多年来已然成为学习记忆研究中不可或缺的评价实验。前文中小白鼠BB-8依次经历了实验的四个阶段,本文我们就认真介绍一下水迷宫实验的攻略。既然是攻略,那实验目的啊实验原理啊什么
示踪扩散实验的方法介绍
示踪剂的选择示踪剂分为气溶胶示踪剂和气体示踪剂两种。气溶胶示踪剂包括硫化锌、碘化银颗粒。这种示踪剂有着明显的缺点:颗粒容易沉淀、被淋洗而遭受损失,在大气中也容易变性,取样难度大,而且大多有毒。所以气溶胶示踪剂已经基本上被抛弃了。现在多选用气体示踪剂。选择气体示踪剂的最主要原则是:(1)无色无味,无毒
关于糖耐量实验的判定方法介绍
1. 当静脉空腹血糖
动物实验跑台实验方法介绍
ZH-PT型动物实验跑台(平板跑步机)主要用于白鼠类小动物作跑步运动训练,可取代传统的游泳训练,使训练强度指标更加准确。是体能、耐力、运动损伤、营养、药物、生理和病理等实验的必要的手段之一。二、技术指标1、跑道数: 8通道9、跑台倾角±35°均可调2、大鼠跑道单道规格:1000× 96× 120 m
实验室常用实验方法介绍浓缩法介绍
一、沉淀法在抽提液中加入适量的中性盐或有机溶剂,使有效成分变为沉淀。经离心除去不溶物,获得的上清液通过透析或凝胶过滤脱盐,即可供纯化使用。二、吸附法将干葡聚糖凝胶G25(或吸水棒)加入抽提液中,两者比例为1:5。由于凝胶吸水之故,抽提液的体积可缩小三倍左右,回收蛋白质量约80%.若凝胶(或吸水棒)对
植物体细胞杂交的技术原理和特点
植物体细胞杂交(plant somatic hybridization),又称原生质体融合(Protoplast fusion )是指将植物不同种、属,甚至科间的原生质体通过人工方法诱导融合,然后进行离体培养,使其再生杂种植株的技术。植物细胞具有细胞壁,未脱壁的两个细胞是很难融合的,植物细胞只有在脱
影响植物体细胞杂交的因素有哪些?
首先,原生质体质量对细胞的融合起着至关重要的作用,高质量的原生质体是细胞融合的首要条件。其次,融合方法其三是融合参数,包括各种融合液都应选择适当。c.方法:物理方法(离心、振动、电激)、化学方法(聚乙二醇)d.杂种细胞的筛选和培养:机械法、生理法、遗传法e.杂种细胞的再生和鉴定:由愈伤组织再培养出杂
临床化学检查方法介绍动物实验介绍
动物实验介绍: 动物实验是在实验室内,为了获得有关生物学、医学等方面的新知识或解决具体问题而使用动物 进行的科学研究。动物实验必须由经过培训的、具备研究学位或专 业技术能力的人员进行或在其指导下进行。动物实验正常值: 无动物实验临床意义: 实验动物科学发展的最终目的,就是要通过对动物本身生命现
临床化学检查方法介绍凝集实验介绍
凝集实验介绍: 凝集实验是血清学试验方法中的一种,血清学试验是抗原抗体在体外出现可见反应的总称,故又称抗原抗体反应。它可以用已知抗体(细菌抗血清)检测未知抗原(待检细菌);也可用已知抗原(已知病原菌)检测患者血清中的相应抗体及其效价,是临床诊断、实验室研究和细菌学鉴定的重要手段之一。凝集实验正常值
免疫沉淀的实验方法介绍
免疫沉淀的实验过程比较简单,一般分为3个阶段;①抗原溶液的制备;②裂解物非特异性本底的预处理;③免疫复合物的形成与纯化。 免疫沉淀的第一步是制备抗原溶液。任何抗原溶液均可作为免疫沉淀的材料来源,但免疫沉淀一般采用细胞或组织制备的裂解物。裂解物的制备可采用多种方法,其中首选用温和的去污剂如非离子去污剂
关于磁共振的实验方法介绍
通常,当外加恒定磁场Be在0.1~1.0T(材料的内磁场BBe)时,各种与电子有关的磁共振频率都在微波频段,而核磁共振频率则在射频频段。这是因为原子核质量与电子质量之比至少1836倍的缘故。虽然观测这两类磁共振分别应用微波技术和无线电射频技术,但其实验装置的组成与测量原理却是类似的。磁共振实验装
实验室常用实验方法介绍实验室常见的三种浓缩方法
浓缩浓缩是实验室中最常用的样品处理手段之一,药物有效成分提取,农残分析,药物筛选,液相、气相、质谱分析前处理等等都会涉及浓缩,浓缩的方法也有很多,各有所长,各有侧重,可选择的仪器也有很多。常见有氮吹仪、旋转蒸发仪、真空浓缩仪、冷冻干燥机等等。仪器氮吹仪旋转蒸发仪离心浓缩仪器原理将氮气快速、连续、可控
实验室常用实验方法介绍浓缩法的分类
浓缩方法从原理上讲分为平衡浓缩和非平衡浓缩2种。平衡浓缩是利用两相在分配上的某种差异而获得溶质和溶剂分离的方法。蒸发浓缩和冷冻浓缩属于这种方法,其中,蒸发浓缩利用溶剂和溶质挥发度的差异,获得一个有利的气液平衡条件,达到分离目的;冷冻浓缩利用稀溶液与固态冰在凝固点下的平衡关系,即利用有利的液固平衡条件
Taq酶PCR实验方法介绍
General AdvicePCR allows the production of more than 10 million copies of a target DNA sequence from only a few molecules. The sensitivity of this tec
实验室常用分析方法介绍
直接电位法直接电位法是选择合适的指示电极和参比电极,浸入待测溶液中组成原电池,测量原电池的电动势,根据能斯特方程直接测定样品溶液中被测组分活(浓)度的电位法。直接电位法测定溶液PH常用饱和甘汞电极作为参比电极,氢电极和PH玻璃电极作为指示电极,其中PH玻璃电极使用最为广泛。常分为溶液pH值的测定和其
立克次氏体实验室检测方法介绍
病原学诊断立克次体的培养和染色是其诊断和分类的重要方法,最为经典的是鸡胚接种,也可采用细胞培养。染色方法场采取吉姆萨(giemsa)染色法,直接免疫荧光法(direct immunofluorescence assay,DFA)等,但在非培养条件下很难观察到阳性结果。立克次体病原学检查成本较高且对检