可以DNA结合的酶DNA连接酶
DNA连接酶:是能够使用来自ATP或NAD的化学能将先前切割或断裂的DNA链聚集在一起的酶。连接酶在DNA滞后链复制中特别重要,因为它们将冈崎碎片组合成DNA链。连接酶在DNA修复和基因重组中也发挥重要作用。......阅读全文
关于DNA连接酶的DNA接头连接法介绍
DNA接头,是一类人工合成的一头具某种限制酶粘性末端另一头为平末端的特殊的双链寡核苷酸短片段。当它的平末端与平末端的外源DNA片段连接之后,便会使后者成为具粘性末端的新的DNA分子,而易于连接重组。实际使用时对DNA接头末端的化学结构进行必要的修饰与改造,可避免处在同一反应体系中的各个DNA接头
DNA聚合酶及DNA连接酶的功能和区别
DNA聚合酶,以已有的核酸序列作为模板,将4种脱氧核苷酸(A、T、G、C)按照模板的碱基排列顺序,以“碱基互补原则”依次连接,聚合成为一条新的DNA链。 DNA连接酶,是将DNA片段上的缺刻连接起来的酶。 一、DNA聚合酶 (一)DNA聚合酶I DNA聚合酶I(DNA pol
DNA-连接酶参与哪些过程
DNA连接酶主要应用于基因工程中连接两个粘性末端时使用。DNA连接酶主要用于基因工程,将由限制性核酸内切酶“剪”出的粘性末端重新组合,故也称“基因针线”。
DNA-连接酶参与哪些过程
dna连接酶在人体中也有存在,不过并不是用来复制dna从而进行细胞分裂的,人体细胞分裂所需的酶是dna聚合酶。人体中的dna连接酶是用来将入侵人体的外援细菌或病毒的dna剪碎的,在没有外源细菌或病毒入侵时,dna连接酶不发挥作用基因工程中的dna连接酶大多取自于原核生物体内
DNA连接酶的基本信息
中文名称DNA连接酶外文名称DNA Ligase别名DNA黏合酶 作用连接DNA链3'-OH末端原理催化作用条件需要消耗ATP
DNA-连接酶的基本信息
DNA 连接酶是生物体内重要的酶,其所催化的反应在DNA的复制和修复过程中起着重要的作用。DNA连接酶分为两大类:一类是利用ATP 的能量催化两个核苷酸链之间形成磷酸二酯键的依赖ATP的DNA 连接酶,另一类是利用烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+) 的能量催化两个核苷酸链之间形成磷酸二酯键的依赖NAD
关于DNA连接酶的性质介绍
大肠杆菌的DNA连接酶是一条分子量为75Ku的多肽链。对胰蛋白酶敏感,可被其水解。水解后形成的小片段仍具有部份活性,可以催化酶与NAD(而不是ATP)反应形成酶-AMP中间物,但不能继续将AMP转移到DNA上促进磷酸二酯键的形成。DNA连接酶在大肠杆菌细胞中约有300个分子,和DNA聚合酶Ⅰ的分
DNA连接酶的基本性状
大肠杆菌的DNA连接酶是一条分子量为75Ku的多肽链。对胰蛋白酶敏感,可被其水解。水解后形成的小片段仍具有部份活性,可以催化酶与NAD(而不是ATP)反应形成酶-AMP中间物,但不能继续将AMP转移到DNA上促进磷酸二酯键的形成。DNA连接酶在大肠杆菌细胞中约有300个分子,和DNA聚合酶Ⅰ的分子数
DNA连接酶是怎样发现的?
DNA连接酶是1967年在三个实验室同时发现的,最初是在大肠杆菌细胞中发现的。它是一种封闭DNA链上缺口酶,借助ATP或NAD水解提供的能量催化DNA链的5'-PO4与另一DNA链的3'-OH生成磷酸二酯键。但这两条链必须是与同一条互补链配对结合的(T4DNA连接酶除外),而且必
热稳定DNA连接酶的简介
热稳定的DNA连接酶(thermostableDNAligase),是从嗜热高温放线菌(Thermoactinomycesthermophilus)菌株中分离纯化的,一种能够在高温下催化两条寡核苷酸探针发生连接作用的一种核酸酶。在85℃高温下都具有连接酶的活性,而且在重复多次升温到94℃之后也仍
关于DNA连接酶的发现介绍
DNA连接酶最早于1967年由三个实验室同时发现,经过科学家几十年的研究发现,目前在病毒、细菌和真核生物体内都发现了DNA连接酶,不同类型的DNA连接酶的作用机制不同。一般情况下,根据DNA连接酶催化反应所需的能量来源可以把DNA连接酶分为腺苷三磷酸(ATP)依赖型和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD
Taq-DNA连接酶的基本信息
中文名称Taq DNA连接酶英文名称Taq DNA ligase定 义编号:EC 6.5.1.1。存在于水生嗜热菌(Thermus aquaticus)中的DNA连接酶,催化可与目标DNA完全杂交的两条相邻寡核苷酸的5′-PO4和3′-OH的连接反应。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),酶(
Taq-DNA连接酶的基本信息
中文名称Taq DNA连接酶英文名称Taq DNA ligase定 义编号:EC 6.5.1.1。存在于水生嗜热菌(Thermus aquaticus)中的DNA连接酶,催化可与目标DNA完全杂交的两条相邻寡核苷酸的5′-PO4和3′-OH的连接反应。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),酶(
DNA连接酶的发现及研究历史
DNA连接酶是1967年在三个实验室同时发现的,最初是在大肠杆菌细胞中发现的。它是一种封闭DNA链上缺口酶,借助ATP或NAD水解提供的能量催化DNA链的5'-PO4与另一DNA链的3'-OH生成磷酸二酯键。但这两条链必须是与同一条互补链配对结合的(T4DNA连接酶除外),而且必须是
DNA连接酶的主要用途
DNA连接酶主要用于基因工程,将由限制性核酸内切酶"剪"出的粘性末端重新组合,故也称"基因针线"。人教版高中生物选修3中提到的E·coliDNA连接酶,来源于大肠杆菌,可用于连接粘性末端;T4DNA连接酶,来源于T4噬菌体,可用于连接粘性末端和平末端,但连接效率低。
什么是DNA连接酶?有哪些种类?
DNA 连接酶是生物体内重要的酶,其所催化的反应在DNA的复制和修复过程中起着重要的作用。DNA连接酶分为两大类:一类是利用ATP 的能量催化两个核苷酸链之间形成磷酸二酯键的依赖ATP的DNA 连接酶,另一类是利用烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+) 的能量催化两个核苷酸链之间形成磷酸二酯键的依赖NAD
T4DNA连接酶的基本特性
大肠杆菌的DNA连接酶是一条分子量为75KD的多肽链。对胰蛋白酶敏感,可被其水解。水解后形成的小片段仍具有部份活性,可以催化酶与NAD(而不是ATP)反应形成酶-AMP中间物,但不能继续将AMP转移到DNA上促进磷酸二酯键的形成。 DNA连接酶在大肠杆菌细胞中约有300个分子,和DNA聚合酶Ⅰ
T4DNA连接酶的主要种类
常用的DNA连接酶有两种:来自大肠杆菌的DNA连接酶和来自噬菌体的T4DNA连接酶。二者的作用机理类似。T4连接酶作用分三步: (1) T4DNA连接酶与辅助 因子ATP形成酶-AMP复合物。 (2) 酶-AMP复合物结合到具有5’-磷酸基和3’-羟基切口的DNA上,使DNA腺苷化。 (3
DNA连接酶黏端和平端的区别
黏端和平端的区别:用限制酶切割后得到的末端齐平就是平末端,一长一短就是粘性末端根据限制性内切酶切割DNA所产生的产物末端,发现限制性内切酶对DNA的切割有两种方式,即平切和交错切。所谓平切,就是限制性内切酶在DNA双链的相同位置切割DNA分子,这样产生的末端就是平末端。交错切就是限制性内切酶在DNA
DNA连接酶的常见种类和作用机制
1、T4DNA连接酶T4DNA连接酶是目前应用比较多的病毒基因组编码的DNA连接酶,在基因重组中广泛使用。噬菌体类型较多,目前研究发现T4噬菌体能够合成T4DNA连接酶,并且已经能够从被T4嗜菌体感染的大肠杆菌中提取该酶,此外科学家也已经定位该酶的合成基因,即噬菌体T4的30基因。T4DNA连接酶具
DNA连接酶的衔接物连接法介绍
所谓衔接物(linker),是指用化学方法合成的一段由10~12个核苷酸组成、具有一个或数个限制酶识别位点的平末端的双链寡核苷酸短片段。衔接物的5′-末端和待克隆的DNA片段的5′-末端,用多核苷酸激酶处理使之磷酸化,然后再通过T4DNA连接酶的作用使两者连接起来。接着用适当的限制酶消化具衔接物
关于DNA连接酶的连接手段的介绍
目前已知有三种方法可以用来在体外连接DNA片段: 第一种方法是,用DNA连接酶连接具有互补粘性末端的DNA片段; 第二种方法是,用T4DNA连接酶直接将平末端的DNA片段连接起来,或是用末端脱氧核苷酸转移酶给具平末端的DNA片段加上poly(dA)-poly(dT)尾巴之后,再用DNA连接酶
T4DNA连接酶的基本内容
T4DNA连接酶是ATP依赖的DNA连接酶,催化两条DNA双链上相邻的5′磷酸基和3′羟基之间形成磷酸二酯键。可接双链DNA的平末端、相容黏末端及其中的单链切口,在分子生物学中有广泛的应用。T4DNA连接酶是经原核表达,柱层析纯化获得的高纯T4DNA接酶,SDS-PAGE显示为一条62kD的蛋白
T4--DNA连接酶的基本信息
中文名称T4 DNA连接酶英文名称T4 DNA ligase定 义编号:EC 6.5.1.1。来自感染T4噬菌体的大肠杆菌,催化双链DNA平头末端或黏性末端相邻核酸的5′-PO4和3′-OH连接反应的酶,还可催化双链RNA和双链RNA或DNA连接,但不能催化单链核酸的连接。可修补在双链DNA、RN
T4DNA连接酶的结构与作用
T4DNA连接酶是ATP依赖的DNA连接酶,催化两条DNA双链上相邻的5′磷酸基和3′羟基之间形成磷酸二酯键。可接双链DNA的平末端、相容黏末端及其中的单链切口,在分子生物学中有广泛的应用。T4DNA连接酶是经原核表达,柱层析纯化获得的高纯T4DNA接酶,SDS-PAGE显示为一条62kD的蛋白条带
T4-DNA连接酶的基本信息
中文名称T4 DNA连接酶英文名称T4 DNA ligase定 义编号:EC 6.5.1.1。来自感染T4噬菌体的大肠杆菌,催化双链DNA平头末端或黏性末端相邻核酸的5′-PO4和3′-OH连接反应的酶,还可催化双链RNA和双链RNA或DNA连接,但不能催化单链核酸的连接。可修补在双链DNA、RN
T4DNA连接酶的特性及种类
特性 大肠杆菌的DNA连接酶是一条分子量为75KD的多肽链。对胰蛋白酶敏感,可被其水解。水解后形成的小片段仍具有部份活性,可以催化酶与NAD(而不是ATP)反应形成酶-AMP中间物,但不能继续将AMP转移到DNA上促进磷酸二酯键的形成。 DNA连接酶在大肠杆菌细胞中约有300个分子,和DNA
简述真核生物DNA连接酶的作用机制
真核生物存在3种ATP依赖型DNA连接酶——DNA连接酶Ⅰ、DNA连接酶Ⅲ和DNA连接酶Ⅳ。研究显示,DNA连接酶Ⅰ和DNA连接酶Ⅳ广泛分布于真核生物中,如植物界和动物界,DNA连接酶Ⅲ则主要分布于脊椎动物中。 目前科学家认为,在真核生物DNA复制过程中,起到连接作用的可能主要是DNA连接
DNA连接酶的连接方法有哪几种?
第一种方法是,用DNA连接酶连接具有互补粘性末端的DNA片段;第二种方法是,用T4DNA连接酶直接将平末端的DNA片段连接起来,或是用末端脱氧核苷酸转移酶给具平末端的DNA片段加上poly(dA)-poly(dT)尾巴之后,再用DNA连接酶将它们连接起来;第三种方法是,先在DNA片段末端加上化学合成
用-T4-DNA连接酶连接RNA分子
实验材料 T4DNA 连接酶 T4 多聚核酸激酶 RNA 供体 受体 寡核苷酸 cDNA 模板试剂、试剂盒 10X 连接缓冲液 [Y32P]ATP 无 RNase 水 l0 mmol LATP RNasin。 无 RNase 的 DNase。 5XTBE 2X 变性胶上样缓冲液 TE仪器、耗材 真空