关于辐射性杂交的原理介绍
利用高剂量的X射线将候选染色体打断成若干片段,含有这种片段的细胞可与仓鼠细胞形成杂交克隆。在这种杂交中,人类染色体片段被插入到仓鼠染色体的中间部分,因此大部分克隆片段在进行有丝分裂时处于稳定的状态。利用类似于遗传重组原理和最大似然性的统计学方法来计算存在于DNA片段上的多态性或非多态性标记之间的断点频率,以此估计标记之间的距离,并建立人类基因组拷贝库---体细胞杂交系统。可根据不同要求构建出断裂程度不同的多套拷贝,从而得到不同分辨率的放射杂交图。总之,辐射性杂交是建立在受到X射线照射的供体细胞与非放射线处理的受体细胞融合基础上的一种体细胞遗传学方法,是利用两个标记之间被X射线打断的概率来计算标记之间距离,通过类似于减数分裂连锁制图的方法来确定标记之间的顺序。......阅读全文
关于核酸杂交的步骤介绍
(1)制备样品:首先需要从待检测组织样品提取DNA或RNA。DNA应先用限制性内切酶消化以产生特定长度的片段,然后通过凝胶电泳将消化产物按分子大小进行分离。一般来说DNA分子有其独特的限制性内切酶图谱,所以经酶切消化和电泳分离后可在凝胶上形成特定的区带。再将含有DNA片段的凝胶进行变性处理后,直
关于Southern杂交的步骤介绍
1.将标记的DNA探针置沸水浴10min,迅速置冰上冷却1-2min,使DNA变性。 2.从水浴中取出含有滤膜和预杂交液的塑料袋,剪开一角,将变性的DNA探针加到预杂交液中。 3.尽可能除取袋中的空气,封住袋口,滞留在袋中的气泡要尽可能地少,为避免同位素污染水浴,将封好的杂交袋再封入另一个未
体细胞杂交的实验原理介绍
不同种植物的原生质体可在人工诱导条件下融合,所产生的杂种细胞,即异核体经过培养可再生新壁,分裂形成愈伤组织,进而分化产生杂种植株。由于进行融合的原生质体来自体细胞,故该项技术也叫体细胞杂交。原生质体融合能使有性杂交不亲合的植物种间进行广泛的遗传重组,因而在农业育种上具有巨大的潜力。在植物遗传操作研究
体细胞杂交实验的原理介绍
不同种植物的原生质体可在人工诱导条件下融合,所产生的杂种细胞,即异核体经过培养可再生新壁,分裂形成愈伤组织,进而分化产生杂种植株。由于进行融合的原生质体来自体细胞,故该项技术也叫体细胞杂交。原生质体融合能使有性杂交不亲合的植物种间进行广泛的遗传重组,因而在农业育种上具有巨大的潜力。在植物遗传操作
Southern杂交的基本原理介绍
转印后的滤膜在预杂交液中温育4-6h,即可加入标记的探针DNA(探针DNA预先经加热变性成为单链DNA分子),即可进行杂交反应。杂交是在相对高离子强度的缓冲盐溶液中进行。杂交过夜,然后在较高温度下用盐溶液洗膜。离子强度越低,温度越高,杂交的严格程度越高,也就是说,只有探针和待测顺序之间有非常高的
体细胞杂交的实验原理介绍
不同种植物的原生质体可在人工诱导条件下融合,所产生的杂种细胞,即异核体经过培养可再生新壁,分裂形成愈伤组织,进而分化产生杂种植株。由于进行融合的原生质体来自体细胞,故该项技术也叫体细胞杂交。原生质体融合能使有性杂交不亲合的植物种间进行广泛的遗传重组,因而在农业育种上具有巨大的潜力。在植物遗传操作
生物杂交的原理
杂交是通过不同稻种相互杂交产生的,而水稻是自花授粉作物,对配制杂交种子不利。要进行两个不同稻种杂交,先要把一个品种的雄蕊进行人工去雄或杀死,然后将另一品种的雄蕊花粉授给去雄的品种,这样才不会出现去雄品种自花授粉的假杂交。可是,如果用人工方法在数以万计的水稻花朵上进行去雄授粉的话,工作量极大,实际并不
核酸杂交的原理
其原理是核酸变性和复性理论。即双链的核酸分子在某些理化因素作用下双链解开,而在条件恢复后又可依碱基配对规律形成双链结构。杂交通常在一支持膜上进行,因此又称为核酸印迹杂交。根据检测样品的不同又被分为DNA印迹杂交(Southern blot hybridization )和RNA印迹杂交(Northe
关于斑点杂交的方法介绍
斑点杂交(Dot blot)是将被检标本点到膜上,烘烤固定。这种方法耗时短,可做半定量分析。一张膜上可同时检测多个样品,为使点样准确方便,市售有多种多管吸印仪(Manifold),如MinifoldⅠ和Ⅱ、Smart Blotter(Wealtec)、Bio-Dot(Bio-Rad)和Hybri
关于酵母单杂交的技术介绍
酵母单杂交技术最早是1993年由Li等从酵母双杂交技术发展而来,通过对报告基因的表型检测,分析DNA与蛋白之间的相互作用,以研究真核细胞内的基因表达调控。由于酵母单杂交方法检测特定转录因子与顺式作用元件专一性相互作用的敏感性和可靠性,现已被广泛用于克隆细胞中含量微弱的、用生化手段难以纯化的特定转
关于核酸分子杂交的基本介绍
杂交的双方是所使用探针和要检测的核酸。该检测对象可以是克隆化的基因组DNA,也可以是细胞总DNA或总RNA。根据使用的方法被检测的核酸可以是提纯的,也可以在细胞内杂交,即细胞原位杂交。探针必须经过标记,以便示踪和检测。使用最普遍的探针标记物是同位素,但由于同位素的安全性,近年来发展了许多非同位素
关于酵母单杂交的缺点介绍
酵母单杂交技术是一种研究蛋白质和特定DNA序列相互作用的技术方法,主要包括四个流程即:一、筛选含有报告基因的酵母单细胞株;二、构建表达文库;三、重组质粒转化至酵母细胞;四、阳性克隆菌株的筛选。 由于插入的靶元件与酵母内源转录激活因子可能发生相互作用,或插入的靶元件不需要转录激活因子就可以激活报
诊断辐射性白内障的基本介绍
1.患者有受辐射的历史。 2.受辐射后,患者出现视力障碍,但较晚。 3.慢性X线等辐射损伤晶状体,混浊多从后极部开始,初可有后囊下皮质小泡,后囊下呈雾状混浊及后囊下皮质点片状混浊3种表现,可单独发生,但多为混合型。 4.后囊下皮质出现在空泡。空泡小而圆或长期不变,或经干酪状变为小白点,不能
关于Southern杂交的转膜的介绍
即将凝胶中的单链DNA片段转移到固相支持物上。而此过程最重要的是保持各DNA片段的相对位置不变。DNA是沿与凝胶平面垂直的方向移出并转移到膜上,因此,凝胶中的DNA片段虽然在碱变性过程已经变性成单链并已断裂,转移后各个DNA片段在膜上的相对位置与在凝胶中的相对位置仍然一样,故而称为印迹(blot
关于Southern杂交的洗膜的介绍
取出NC膜,在2×SSC溶液中漂洗5min,然后按照下列条件洗膜: 2×SSC/0.1% SDS,42℃,10min; 1×SSC/0.1% SDS,42℃,10min; 0.5×SSC/0.1% SDS,42℃,10min; 0.2×SSC/0.1% SDS,56℃,10min; 0
分子杂交的实验原理
分子杂交是通过配对碱基对之间的非共价键(主要是氢键)结合,从而形成稳定的双链区。杂交分子的形成并不要求两条单链的碱基顺序完全互补,所以不同来源的核酸单链只要彼此之间有一定程度的互补顺序(即某种程度的同源性)就可以形成杂交双链。分子杂交可在DNA与DNA、RNA与RNA或RNA与DNA的二条单链之间进
核酸杂交的技术原理
其原理是核酸变性和复性理论。即双链的核酸分子在某些理化因素作用下双链解开,而在条件恢复后又可依碱基配对规律形成双链结构。杂交通常在一支持膜上进行,因此又称为核酸印迹杂交。根据检测样品的不同又被分为DNA印迹杂交(Southern blot hybridization )和RNA印迹杂交(Northe
分子杂交仪的原理
分子杂交仪其基本原理就是应用核酸分子的变性和复性的性质,使来源不同的DNA(或RNA)片段,按碱基互补关系形成杂交双链分子(heteroduplex)。杂交双链可以在DNA与DNA链之间,也可在RNA与DNA链之间形成。 核酸分子杂交是基因诊断的最基本的方法之一。它的基本原理是:互补的DNA单
分子杂交仪的原理
分子杂交仪(又名:分子杂交箱、分子杂交炉)广泛地使用于克隆基因的筛选、酶切图谱的制作、基因组中特定基因序列的定性、定量检测和疾病的诊断等方面。因而它不仅在分子生物学领域中具有广泛地应用,而且在临床诊断上的应用也日趋增多。原理分子杂交仪其基本原理就是应用核酸分子的变性和复性的性质,使来源不同的DNA(
分子杂交仪的原理
分子杂交仪(又名:分子杂交箱、分子杂交炉)广泛地使用于克隆基因的筛选、酶切图谱的制作、基因组中定基因序列的定性、定量检测和疾病的诊断等方面。因而它不仅在分子生物学域中具有广泛地应用,而且在临床诊断上的应用也日趋增多。原理分子杂交仪其基本原理就是应用核酸分子的变性和复性的性质,使来源不同的DNA(或R
分子杂交仪的原理
分子杂交仪其基本原理就是应用核酸分子的变性和复性的性质,使来源不同的DNA(或RNA)片段,按碱基互补关系形成杂交双链分子(heteroduplex)。杂交双链可以在DNA与DNA链之间,也可在RNA与DNA链之间形成。 核酸分子杂交是基因诊断的最基本的方法之一。它的基本原理是:互补的DNA单
分子杂交仪的原理
分子杂交仪(又名:分子杂交箱、分子杂交炉)广泛地使用于克隆基因的筛选、酶切图谱的制作、基因组中特定基因序列的定性、定量检测和疾病的诊断等方面。因而它不仅在分子生物学领域中具有广泛地应用,而且在临床诊断上的应用也日趋增多。原理分子杂交仪其基本原理就是应用核酸分子的变性和复性的性质,使来源不同的DNA
分子杂交的实验原理
分子杂交是通过配对碱基对之间的非共价键(主要是氢键)结合,从而形成稳定的双链区。杂交分子的形成并不要求两条单链的碱基顺序完全互补,所以不同来源的核酸单链只要彼此之间有一定程度的互补顺序(即某种程度的同源性)就可以形成杂交双链。分子杂交可在DNA与DNA、RNA与RNA或RNA与DNA的二条单链之间进
杂交实验的实验原理
不同种植物的原生质体可在人工诱导条件下融合,所产生的杂种细胞,即异核体经过培养可再生新壁,分裂形成愈伤组织,进而分化产生杂种植株。由于进行融合的原生质体来自体细胞,故该项技术也叫体细胞杂交。原生质体融合能使有性杂交不亲合的植物种间进行广泛的遗传重组,因而在农业育种上具有巨大的潜力。在植物遗传操作研究
分子杂交的原理分析
BILON品牌的FYY系列分子杂交仪号:200520070121X。该仪器采用微电脑智能控制,液晶显示三种功能:温度显示、瓶架旋转速度、托盘摆动速度。具有存储记忆功能,可以直观显示系统的运行状况。温度控制采用数字PID技术,输出采用PWM方式,控温精度高,稳定性好,并设有超温保护装置。该仪器可以同时
关于杂交分子的基本信息介绍
互补的核苷酸序列通过Watson-Crick碱基配对形成稳定的杂合双链DNA分子的过程称为杂交。杂交过程是高度特异性的,可以根据所使用的探针已知序列进行特异性的靶序列检测。 杂交的双方是所使用探针和要检测的核酸。该检测对象可以是克隆化的基因组DNA,也可以是细胞总DNA或总RNA。根据使用的方
关于杂交瘤技术的基本介绍
杂交瘤技术(hybridoma technique) 即淋巴细胞杂交瘤技术,又称单克隆抗体技术。它是在体细胞融合技术基础上发展起来的。克勒(Kohler)和米尔斯坦(Milstein)(1975)证明,骨髓瘤细胞与免疫的动物脾细胞融合,形成能分泌针对该抗原的均质的高特异性的抗体——单克隆抗体,
关于细胞杂交的方式方法介绍
1、原代培养 (primary culture):从动物机体取出的进行培养的细胞群。原代培养的细胞生长比较缓慢,而且繁殖一定的代数后(一般10代以内)停止生长,需要从更换培养基。将细胞从一个培养瓶转移到另外一个培养瓶即称为传代或传代培养(Passage)。 2、细胞株(cell strain)
关于核酸分子杂交技术的基本介绍
由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性,它已成为分子生物学中最常用的基本技术,被广泛应用于基因克隆的筛选,酶切图谱的制作,基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。
关于RNA斑点杂交方法的介绍
与上法类似,每个样品至多加10μg总RNA(经酚/氯仿或异硫氰酸胍提取纯化),方法是将RNA溶于5μl 焦碳酸二乙酯(DEPC)水,加5μl 甲醛/SSC缓冲液(10×SSC中含6.15mol/L甲醛),使RNA变性,然后取5-8μl点样于处理好的滤膜上,烘干。