关于基因转染技术的过程靶细胞的准备介绍
被用于作靶基因转染的细胞，其生长状态如何，将直接决定了基因转染效率。如为贴壁生长的细胞，一般要求在转染前一日，必需应用胰酶处理成单细胞悬液，重新接种于培养皿或瓶，细胞密度以铺满培养器皿的60%为宜，转染当日，在转染前4小时换一将近新鲜培养液。对于悬浮细胞，也需在转染前4小时换一次新鲜培养液。......阅读全文
关于瞬时转染的基本信息介绍
瞬时转染（transient transfection）是将DNA导入真核细胞的方式之一。在瞬时转染中，重组DNA导入感染性强的细胞系以获得目的基因暂时但高水平的表达。转染的DNA不必整合到宿主染色体，可在比稳定转染较短时间内收获转染的细胞，并对溶解产物中目的基因的表达进行检测。
转基因技术的转化过程
(1）提取目的基因 从生物有机体复杂的基因组中,分离出带有目的基因的DNA片段，或者人工合成目的基因，或从基因文库中提取相应的基因片段和PCR技术进行目的基因的增殖。 (2)将目的基因与运载体结合 在细胞外, 将带有目的基因的DNA片段通过剪切、粘合连接到能够自我复制并具有多个选择性标记的运输
常规转染技术的类型
常规转染技术可分为两大类，一类是瞬时转染，一类是稳定转染（永久转染）。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中，因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数，产生高水平的表达，但通常只持续几天，多用于启动子和其它调控元件的分析。一般来说，超螺旋质粒DNA转染效率较高，在转染后24-72小时内（依赖于各种不同
关于肺及纵隔MRI检查技术的准备工作介绍
1.认真核对磁共振成像（MRI）检查申请单，了解病情，明确检查目的和要求。对检查目的要求不清的申请单，应与临床申请医生核准确认。 2.确认病人没有禁忌证。并嘱病人认真阅读检查注意事项，按要求准备。 3.进入检查室之前，应除去病人身上携带的一切金属物品、磁性物质及电子器件。 4.告诉病人所需
关于基因扩增技术的程序介绍
基因扩增技术的程序 ：PCR的扩增倍数Y=（1+E）n,这里Y是扩增量，n为PCR的循环次数。E为PCR循环扩增效率。设PCR扩增效率E为100%、循环次数n=25次，靶DNA将扩增到33554432个拷贝，即扩增3355万倍：若E为80%、n=20、则扩增数量将下降到1408865拷贝，即扩增
关于肝活检的术前准备介绍
(1) 穿刺前应测血压、脉搏并进行胸部x线检查，观察有无肺气肿、胸膜肥厚，验血型，以备必要时输血。术前l小时可服地西泮10mg。 (2) 术前应检查血小板数、出血时间、凝血时间、凝血酶原时间，如有异常，应肌注维生素Kllom9，每日1次，3天后复查，如仍不正常，不应强行穿刺(对于凝血酶原时间不
关于血液滤过的准备事项介绍
1、血液滤过—了解患者病情，既往有无高血压、低血压，有无出血倾向及其他常规透析中易出现的问题，做好预防准备措施。 2、血液滤过—行血液滤过前要向家属及患者解释血液滤过治疗的目的、方法、优点和注意事项，取得理解和配合。 3、血液滤过—物品准备：血液滤过器、血液滤过管路、安全导管（补液管路）、碘
关于腹部B超前的准备介绍
1、腹部B超前的准备—禁食禁水：检查的前一天的晚餐，应以清淡少渣的食物为主，食后禁食一夜。检查当日早晨，应禁早餐和水，以保证上午在空腹情况下检查。 2、腹部B超前的准备—做“B超”前两天，应避免进行胃肠道钡餐造影和胆道造影。 3、腹部B超前的准备—做泌尿系统B超检查，特别是输尿管和膀胱B超检
关于whipple手术的术前准备介绍
（1）心、肺、肝、肾等重要器官功能检查。 （2）胸部X线摄片。 （3）提高凝血酶原活动度。 （4）纠正常有的低钾和低钠等电解质紊乱。 （5）静脉内补充营养，输全血及血浆以纠正贫血及低蛋白血症。 （6）对有梗阻性黄疸患者，术前1周口服胆盐制剂。 （7）术前晚服雷尼替丁以降低胃酸。 （
关于药敏试验的实验准备的介绍
1、药敏片的准备：购买或自制 （1）制备方法：取新华1号定性滤纸，用打孔机打成6毫米直径的圆形小纸片。取圆纸片50片放入清洁干燥的青霉素空瓶中，瓶口以单层牛皮纸包扎。经15磅15-20分钟高压消毒后，放在37℃温箱或烘箱中数天，使完全干燥。 （2）抗菌药纸片制作：在上述含有50片纸片的青霉素
基因治疗法选择靶细胞的原则
选择靶细胞的原则是：①必须较坚固，足以耐受处理，并易于由人体分离又便于输回体内；②具有增殖优势，生命周期长，能存活几月至几年，最后可延续至病人的整个生命期；③易于受外源遗传物质的转化；④在选用反转录病毒载体时，目的基因表达最好具有组织特异性的细胞。使用得较多的是骨髓干细胞、皮肤成纤维细胞、肝细胞、血
关于细胞转染实验的材料器材介绍
（1）材料 293T细胞、MyoD表达质粒和EGFP表达质粒、DMEM培养基、链霉素/青霉素（双抗）、FCS（小牛血清）、PBS（磷酸盐缓冲溶液）、胰酶/EDTA消化液、转染试剂（TransFast） （2）器材 20ul/200ul/1ml微量移液器和Tip头酒精灯、废液缸、血球计数板、
关于新型基因检测技术—基因测序的原理介绍
基因测序是一种新型基因检测技术，能够从血液或唾液中分析测定基因全序列，预测罹患多种疾病的可能性，个体的行为特征及行为合理。基因测序技术能锁定个人病变基因，提前预防和治疗。 基因测序相关产品和技术已由实验室研究演变到临床使用，可以说基因测序技术是下一个改变世界的技术。 基因测序技术能锁定个人病
关于转染试剂的简介
哺乳动物的转染技术在60年代末70年代初即已引入。 将外源DNA 导入哺乳动物细胞的方法大致可分为两大类，即生物方法和物理化学方法。物理化学方法中常用的有磷酸钙法、显微注射、电穿孔、脂质体介导的转染，以及最近出现的以高分子聚合物为载体的基因传递技术。生物方法则主要是以病毒作为载体,通过病毒感染
关于转染效率的研究
线型PEI（LinePEI,LPEI）与其衍生物用作基因转染载体的研究比分枝状PEI（BranchedPEI,BPEI）要早一些，过去的研究认为在不考虑具体条件，LPEI/DNA转染复合物的细胞毒性较低，有利于细胞定位，因此与BPEI相比应该转染效率高一些。但最近研究表明BPEI的分枝度高有利于形成
磷酸钙细胞转染技术
[实验目的] 1 了解细胞转染技术原理和基本方法 2 磷酸钙沉淀法的基本技术要点 [实验原理] 磷酸钙沉淀法是基于磷酸钙-DNA复合物的一种将DNA导入真核细胞的转染方法，磷酸钙被认为有利于促进外源DNA与靶细胞表面的结合。磷酸钙-DNA复合物粘附到细胞膜并通过胞饮作用进入靶细胞，被
转基因技术的发展过程
1953年，沃森（Watson JD）和克里克（Crick FHC）首次提出了DNA的双螺旋结构模型和半保留复制假说。1966年，美国科学家尼伦伯格（Nirenberg MW）等破译了全部遗传密码，宣告了分子生物学的诞生。随着DNA限制性内切酶和DNA连接酶等工具酶的相继发现，为体外遗传操作提供了便
转基因技术的发展过程
1953年，沃森（Watson JD）和克里克（Crick FHC）首次提出了DNA的双螺旋结构模型和半保留复制假说。1966年，美国科学家尼伦伯格（Nirenberg MW）等破译了全部遗传密码，宣告了分子生物学的诞生。随着DNA限制性内切酶和DNA连接酶等工具酶的相继发现，为体外遗传操作提供了便
转染的技术特点和分类
转染(transfection)是细胞在一定条件下主动或被动导入外源DNA片段而获得新的表型的过程。 从本质上讲，和转化没有根本的区别。无论是转染还是转化，其关键因素都是用氯化钙处理大肠杆菌细胞，以提高细胞膜的通透性，从而使外源DNA分子能够容易进入细胞内部。所以在习惯上，人们往往也通称转染为广
转染技术的研究进展
国际上推出了一些阳离子聚合物基因转染技术，以其适用宿主范围广，操作简便，对细胞毒性小，转染效率高受到研究者们的青睐。其中树枝状聚合物（Dendrimers）和聚乙烯亚胺（Polyethylenimine，PEI）的转染性能最佳，但树枝状聚合物的结构不易于进一步改性，且其合成工艺复杂。聚乙烯亚胺是一种
转染的技术特点和分类
转染(transfection)是细胞在一定条件下主动或被动导入外源DNA片段而获得新的表型的过程。 从本质上讲，和转化没有根本的区别。无论是转染还是转化，其关键因素都是用氯化钙处理细菌或培养细胞，以提高细胞膜的通透性，从而使外源DNA或RNA能够容易进入细胞内部。所以在习惯上，人们往往也通称转染为
【细胞生物学原创系列三】基因的导入
在完成了基本的细胞培养、使细胞达到较好的状态后，下一步就是将外源的核酸分子导入到细胞中，以观察、检测其对细胞状态产生的影响。 转染是细胞实验最常见的基因导入技术，是将外源核酸分子（DNA或RNA等）导入到哺乳动物细胞内的技术。随着分子生物学和细胞生物学研究的不断发展，转染已经成为研究和控制真核
关于转基因技术的应用相关介绍
自1996年首例转基因农作物产业化应用以来，全球转基因技术研究与产业应用快速发展。发达国家纷纷把发展转基因技术作为抢占未来科技制高点和增强农业国际竞争力的战略重点，发展中国家也积极跟进，并呈现以下发展态势： 一是品种培育速度加快。随着生命科学、基因组学、信息学等学科的发展，转基因技术研究日新月
关于基因治疗的反义技术介绍
又称反义寡核苷酸（antisenseoligodeoxynucleotides）技术，是指利用人工合成的反义RNA和反义DNA来阻断基因的转录或复制，控制细胞生长在中间阶段,使编码蛋白质的基因能转录为mRNA，因而不能翻译成相应的蛋白质，以达治疗某一疾病的目的、用反义DNA已对某些癌症进行临床试
磷酸钙沉淀法将DNA导入细胞
实验概要本实验利用磷酸钙沉淀法将DNA导入细胞。有助于了解细胞转染技术原理和基本方法及磷酸钙沉淀法的基本技术要点。实验原理磷酸钙沉淀法是基于磷酸钙-DNA复合物的一种将DNA导入真核细胞的转染方法，磷酸钙被认为有利于促进外源DNA 与靶细胞表面的结合。磷酸钙-DNA复合物粘附到细胞膜并通过胞饮作
MHC对免疫应答中免疫细胞相互作用的约束作用（二）
由于自身MHC约束Tc细胞杀伤靶细胞的特异性，使体内受病毒感染或癌肿恶变的靶细胞得以迅速有效地清除，从这个意义上来讲，MHC参与机体抗感染及免疫监视功能。 Tc对同种异体靶细胞的杀伤作用不受自身MHC的约束，Longo(1982)认为体内存在着两类不同的T应答细胞：一类针对外来抗原+自身MH
关于细胞克隆的准备工作介绍
准备工作对开展细胞培养异常重要，工作量也较大，应给予足够的重视，准备工作中某一环节的疏忽可导致实验失败或无法进行。准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒，培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌，无菌室或超净台的清洁与消毒，培养箱及其他仪器的检查与调试。
关于肝动脉造影的检查准备介绍
1.向患者及家属交待造影目的及可能出现的并发症和意外，签订造影协议书； 2.向患者解释造影的过程及注意事项，以消除顾虑，争取术中配合； 3.检查心、肝、肾功能，以及血常规和出凝血时间； 4.必要的影像学检查，如B超、CT等； 5.碘剂及麻醉剂按药典规定进行必要的处理； 6.术前4小时禁
关于胃镜检查的检查前准备介绍
1.为避免交叉感染，制定合理的消毒措施，患者检查前需做HbsAg、抗HCV、抗HIV等检查。 2.检查前禁食6～8小时，在空腹时进行检查，如胃内存有食物则影响观察。已做钡餐检查者须待钡剂排空后再做胃镜检查；幽门梗阻患者应禁食2～3天，必要时术前洗胃，将胃内积存的食物清除。 3.口服去泡剂，如
关于碘油造影的术前准备介绍
1．病人月经干净3～7天，禁性生活。 2．可于术前半小时肌内注射阿托品0．5mg，以减少输卵管痉挛。 3．病人排空膀胱。 4. 询问是否有碘过敏史。造影前半小时作碘过敏试验， 方法：皮肤划痕试验：将2．5%碘酊涂布于前臂屈面，直径约2～3cm，在其上作划痕，20分钟后观察有无红肿反应。也