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双荧光素酶报道系统详解

一、概述报告基因 (reporter gene):是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因,也就是说,是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因。 一般的,把报告基因的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因,或与其它目的基因相融合,从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控。在基因表达调控的研究中,报告基因被广泛应用。如绿色荧光蛋白(GFP)和荧光素酶。荧光素酶(Luciferase):是能够催化不同底物氧化发光的一类酶的统称,哺乳细胞无内源性荧光素酶。荧光素酶报告基因的优点蛋白不需要翻译后加工,所以一旦翻译立即产生报告活性。在所有的化学发光反应中,它的光产物具有最高的量子效率,因而非常灵敏。另外,在宿主细胞及检测试剂中均检测不到背景发光。检测快速,每个样品只需几秒钟二、实验原理利用荧光素酶与底物结合发生化学发光反应的特性,把感兴趣的基因转录的调控元件克隆在萤火虫荧光素酶基因(firefly luciferase)的上......阅读全文

如何使用多功能酶标仪检测双荧光素酶

报告基因检测被广泛应用于研究基因表达及外部刺激下原核和真核细胞的反应。Luciferase报告基因系统是以荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶(fireflyluciferase)活性的一种报告系统。可以极其灵敏、高效地检测基因的表达。但是报告基因实验中往往会受到各种实验条件的影响

如何使用多功能酶标仪检测双荧光素酶

报告基因检测被广泛应用于研究基因表达及外部刺激下原核和真核细胞的反应。Luciferase报告基因系统是以荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶(fireflyluciferase)活性的一种报告系统。可以极其灵敏、高效地检测基因的表达。但是报告基因实验中往往会受到各种实验条件的影响

如何使用多功能酶标仪检测双荧光素酶

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如何使用多功能酶标仪检测双荧光素酶

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如何使用多功能酶标仪检测双荧光素酶

报告基因检测被广泛应用于研究基因表达及外部刺激下原核和真核细胞的反应。Luciferase报告基因系统是以荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶(fireflyluciferase)活性的一种报告系统。可以极其灵敏、高效地检测基因的表达。但是报告基因实验中往往会受到各种实验条件的影响

如何使用多功能酶标仪检测双荧光素酶

报告基因检测被广泛应用于研究基因表达及外部刺激下原核和真核细胞的反应。Luciferase报告基因系统是以荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶(fireflyluciferase)活性的一种报告系统。可以极其灵敏、高效地检测基因的表达。但是报告基因实验中往往会受到各种实验条件的影响

如何使用多功能酶标仪检测双荧光素酶

报告基因检测被广泛应用于研究基因表达及外部刺激下原核和真核细胞的反应。Luciferase报告基因系统是以荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶(fireflyluciferase)活性的一种报告系统。可以极其灵敏、高效地检测基因的表达。但是报告基因实验中往往会受到各种实验条件的影响

质粒的荧光会干扰双荧光素酶的测定么

不会。在进行质粒的荧光的时候,是不会干扰双荧光素酶的测定的。双荧光素酶通常是指萤火虫荧光素酶和海肾荧光素。其中荧火虫荧光素是从甲虫中分离得到。

荧光素和荧光素酶是什么

荧光素也就是FDAFDA可透过细胞膜并作为荧光素积蓄在活细胞内。由于荧光素较BCECF或Calcein的亲水性低,因此荧光素从细胞中渗漏的量也高。FDA也可用于流式细胞仪。荧光素的激发和发射波长分别为488nm和530nm。荧光素酶(英文名称:Luciferase)是自然界中能够产生生物荧光的酶的统

双荧光素酶报告基因检测实验技术服务

1、  实验简介Luciferase报告基因系统是以 荧光素(luciferin) 为底物来检测 萤火虫荧光素酶 (fireflyluciferase)活性的实验。荧光素底物会在荧光素酶作用下会发光(波长540-600nm),且光强能反应荧光素酶的表达量。荧光素酶的蛋白表达量与启动子活性、mRNA的

双荧光素酶报告基因检测实验技术服务

1、  实验简介Luciferase报告基因系统是以 荧光素(luciferin) 为底物来检测 萤火虫荧光素酶 (fireflyluciferase)活性的实验。荧光素底物会在荧光素酶作用下会发光(波长540-600nm),且光强能反应荧光素酶的表达量。荧光素酶的蛋白表达量与启动子活性、mRNA的

双荧光素酶试验是化学发光还是生物发光

荧光素酶(luciferase)是催化莹光素氧合而发光的蛋白酶即[让萤火虫尾部荧光素发出荧光的蛋白质]莹光素+atp+o2-->氧合莹光素+amp+ppi+荧光

双荧光素酶实验一般多长时间

1个半小时。双荧光素酶实验是一种化学实验,该实验需要将荧光素酶与底物结合发生化学发光反应的特性,来制作感兴趣的基因转录克隆体,其需要1个半小时的时间来完成该实验。因需要让荧光素酶与底物结合充分反应,该实验过程需要非常多的时间。

双荧光素luc不表达

双荧光素luc不表达有多种原因,实验过程中的每一个步骤都可能导致双荧光素luc不表达。如果目的基因载体没有成功转移到受体细胞,或者受体细胞没有成活,以及实验过程中出现其他物质抑制了双荧光素luc的表达等等,都有可能导致双荧光素luc不表达。基于荧光素酶(Luciferase)的发光原理,形成了双荧光

双荧光素luc不表达

双荧光素luc不表达有多种原因,实验过程中的每一个步骤都可能导致双荧光素luc不表达。如果目的基因载体没有成功转移到受体细胞,或者受体细胞没有成活,以及实验过程中出现其他物质抑制了双荧光素luc的表达等等,都有可能导致双荧光素luc不表达。基于荧光素酶(Luciferase)的发光原理,形成了双荧光

双荧光素luc不表达

双荧光素luc不表达有多种原因,实验过程中的每一个步骤都可能导致双荧光素luc不表达。如果目的基因载体没有成功转移到受体细胞,或者受体细胞没有成活,以及实验过程中出现其他物质抑制了双荧光素luc的表达等等,都有可能导致双荧光素luc不表达。基于荧光素酶(Luciferase)的发光原理,形成了双荧光

双荧光素酶报告基因实验中的质粒怎么找

(1) 用生物信息学方法分析并预测启动子区可能的转录因子结合位点。(2)设计引物用PCR法从基因组DNA中克隆所需的靶启动子片段,将此片段插入到荧光素酶报告基因质粒(pGL3-basic)中。(3)筛选阳性克隆,测序。扩增克隆并提纯质粒备用。是检测启动子的荧光报告载体,当然是将miR的启动子序列构建

怎么使用多功能酶标仪检测双荧光素酶报告基因

以Promega公司双荧光素酶检测试剂盒为例:1. 试剂准备按照说明书配制PLB细胞裂解液、LAR II检测液、Stop&Glo检测液。2.仪器准备准备单管或微孔板发光检测仪3. 样品准备按照说明书使用PLB细胞裂解液裂解细胞,取20ul细胞裂解液4. 检测过程a) 在1.5ml离心管中加入20ul

荧光素酶的分析

萤光素或萤光素酶不是特定的分子,而是对于所有能够产生萤光的底物和其对应的酶的统称,虽然它们各不相同。不同的能够控制发光的生物体用不同的萤光素酶来催化不同的发光反应。最为人所知的发光生物是萤火虫,而其所采用不同的萤光素酶与其他发光生物如萤光菇(发光类脐菇,Omphalotus oleariu'

荧光素酶的测定

实验方法原理 荧光素 4-单氧酶(ATP-水解)提取于萤火虫,Photinus Pyralis。荧光素+ATP+O2→氧和虫荧光素+PPi+H2O+光光密度 I 是和 Michaelis-Menten 等式相关的式中,H 是 Planck 常量;v 是发射光的频率。当 ATP 浓度非常低([ATP]

怎样检测双荧光素酶报告基因检测试剂盒

(1) 用生物信息学方法分析并预测启动子区可能的转录因子结合位点。(2)设计引物用PCR法从基因组DNA中克隆所需的靶启动子片段,将此片段插入到荧光素酶报告基因质粒(pGL3-basic)中。(3)筛选阳性克隆,测序。扩增克隆并提纯质粒备用。

怎样检测双荧光素酶报告基因检测试剂盒

(1) 用生物信息学方法分析并预测启动子区可能的转录因子结合位点。(2)设计引物用PCR法从基因组DNA中克隆所需的靶启动子片段,将此片段插入到荧光素酶报告基因质粒(pGL3-basic)中。(3)筛选阳性克隆,测序。扩增克隆并提纯质粒备用

荧光素酶检测(Luciferase assay)

Introduction Luciferase can be used as a reporter gene to measure the activity of promoters, and/or the transfection efficiency. Aims You will be prov

荧光素酶的测定实验

实验方法原理荧光素 4-单氧酶(ATP-水解)提取于萤火虫,Photinus Pyralis。荧光素+ATP+O2→氧和虫荧光素+PPi+H2O+光光密度 I 是和 Michaelis-Menten 等式相关的式中,H 是 Planck 常量;v 是发射光的频率。当 ATP 浓度非常低([ATP]<

荧光素酶互补(Luc)实验

【导入】基于荧光素酶(Luciferase)的发光原理,形成了双荧光素酶报告基因检测系统。该系统包括萤火虫荧光素酶(Firefly luciferase)和海参荧光素酶(Renilla luciferase)。两者可与各自的底物发生氧化作用产生生物荧光,产生的荧光值即表示两种酶的表达量多少。图片来源

荧光素酶的测定实验

基本方案             实验方法原理 荧光素 4-单氧酶(ATP-水解)提取于萤火虫,Photinus Pyralis。荧光素+ATP+O2→氧和虫荧光素+PPi+H2O+

“荧光素,荧光素酶,能态,基态”是什么意思

免疫荧光法免疫荧光法的基本原理是将已知的抗体或抗原分子标记上荧光素,当与其相对应的抗原或抗体起反应时,在形成的复合物上就带有一定量的荧光素,在荧光显微镜下就可以看见发出荧光的抗原抗体结合部位,检测出抗原或抗体。常用的荧光素有①异硫氰酸荧光素(fluorecein isothiocyante,FITC

双萤光素酶报告基因检测

  萤光素酶报告基因系统广泛应用于真核生物基因表达和细胞生理学研究,包括受体活性、转录因子、细胞信号转导、mRNA加工和蛋白质折叠等。萤光素酶是理想的报告基因,因为哺乳动物细胞中不含内源性萤光素酶,一旦转录完成立刻就生成功能性的萤光素酶。单萤光素酶报告基因实验往往会受到各种实验条件的影响,而双萤光素

关于荧光素酶的基本介绍

  萤光素酶(英文名称:Luciferase)是自然界中能够产生生物荧光的酶的统称,其中最有代表性的是一种学名为Photinus pyrali'的萤火虫体内的萤光素酶,萤火虫发光的腹部或海洋的蓝色发光波浪将大自然中生物发光奇迹呈现于世。在生物化学和分子生物学的早期,这一现象被认为是发展生物分

荧光素酶的种类以及应用

在细胞和基因的微观世界中研究探索,遗传报告基因是非常有用的"可视化和量化"工具,具有广泛的应用。荧光素酶(萤光素酶)以出色的灵敏度、使用方便、可以定量检测而成为理想的报告基因。荧光素酶不是特定的分子,是一类中能催化产生生物发光的酶的统称,不同来源的荧光素酶各有特点,可催化底物发出不同颜色的光,有的还