快速了解还原糖的测定

　　实验原理

　　斐林试剂法

　　还原糖与斐林试剂发生作用，可以生成砖红色沉淀。

　　所需试剂

　　斐林试剂（主要由质量浓度为0.1g/mL的NaOH溶液和质量浓度为0.05g/mL的CuSO4溶液配制而成）

　　注意：现配现用

　　实验材料准备

　　植物组织是常用的实验材料,但必须加以选择。本实验最理想的实验材料是含糖量较高的生物组织(或器官),而且组织的颜色较浅,或近于白色的,如苹果和梨的果实。经试验比较,颜色反应的明显程度依次为苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜。

　　操作方法

　　①向试管内注入2mL待测组织药液

　　②向试管内注入1mL斐林试剂（甲液和乙液等量混合均匀后再注入）

　　③将试管放入盛有50～65℃温水的大烧杯中加热约2min

　　④观察试管中出现的颜色变化

　　其他说明

　　斐林试剂和班氏试剂等都是检验还原性糖的试剂，二者的使用方法及原理、成分有区别。下面就从这几种试剂的使用原理、成分及使用方法等方面做一简单总结。

　　1. 斐林试剂和双缩脲试剂

　　斐林试剂和双缩脲试剂都由NaOH溶液和CuSO4溶液组成，但二者有如下三点不同：

　　（1）溶液浓度不同

　　斐林试剂中溶液为斐林试剂甲(NaOH溶液)其浓度为0.1g/ml,斐林试剂乙(CuSO4溶液)其浓度为0.05g/ml；双缩脲试剂:双缩脲试剂A(NaOH溶液)的浓度为0.1g/ml，双缩脲试剂B(CuSO4溶液)的浓度为0.01g/ml。

　　（2）使用原理不同

　　斐林试剂是新配制的溶液，它在加热条件下与醛基反应，被还原成砖红色的沉淀，可用于鉴定可溶性还原糖的存在。用斐林试剂鉴定可溶性还原糖时，溶液的颜色变化过程为：浅蓝色→棕色→砖红色（沉淀）。

　　鉴定生物组织中是否含有蛋白质时，常用双缩脲法，使用的是双缩脲试剂，发生的是双缩脲反应。双缩脲反应实质是在碱性环境下的与双缩脲试剂发生的紫色反应。而蛋白质分子中含有很多与双缩脲（）结构相似的肽键，所以蛋白质都能与双缩脲试剂发生颜色反应，可以用双缩脲试剂鉴定蛋白质的存在 [3] 。

　　（3）两种试剂的保存方式不同。斐林试剂甲和斐林试剂乙可强烈产生，很容易沉淀析出，因此斐林试剂一般为现用现配；而班氏试剂的配方中，柠檬酸钠为一对缓冲物质，产生的数量有限，与溶液混合后产生的浓度相对较低，不易析出，因此该试剂可长期保存 [3] 。

　　当然，无论用班氏试剂还是斐林试剂，归根结底都是与醛基在沸水浴加热条件下反应而生成砖红色的沉淀，两者反应现象一样，这就是二者的相同之处。

　　（4）备注：

　　如果溶液中还原糖含量较低，产生的氧化亚铜便会较少，试验后只会有绿色、混浊的黄色或橙色等。

　　在酸性环境中，Cu2 会变得较为稳定，不容易发生反应，所以不能进行试验。

　　醇和醛在这测试亦会产生砖红色沉淀物，因为两者都具有在这试验中产生作用的官能团。