仅采用NgAgo蛋白质，研究人员称跟韩春雨实验没有关联

　　这是自韩春雨之后，中国研究人员发表的有关NgAgo基因技术的第二篇学术论文。刘东在接受科技日报记者独家专访时表示，从学术角度确实无法评价，“我们用不同的系统，也没有重复他（韩春雨）的实验，仅仅是都用了NgAgo这样一个蛋白质而已，无法做任何关联和讨论。”

　　▲刘东，2011年获德国马克斯-德尔布吕克分子医学中心/柏林自由大学自然科学博士学位。2012年8月起任南通大学神经再生重点实验室副教授，2013年起担任硕士研究生导师。中国解剖学会再生医学专业委员会委员，江苏省发育与细胞学会理事。

　　“我们采用NgAgo技术，并不是要进行重复或验证，仅仅是把它当作一种工具，建立基因敲除斑马鱼模型。”11月13日，记者联系到南通大学神经再生重点实验室副教授刘东，他电话另一端强调着这句话。

　　在11日出版的新一期《自然》杂志子刊《细胞研究》上，刘东以通讯作者身份发表论文，报告了将NgAgo基因技术用于斑马鱼的研究结果。当天晚上，消息就传遍国内各大学术圈，“第二天早上起来一看，我的手机都快被各种消息挤爆了。”

　　一篇论文为何引起这么大的反响？圈内人士告诉记者，虽然是发表在《自然》杂志子刊上，但这样的轰动效应还是从来没有过的，原因只有一个，刘东采用了广受学术界质疑的NgAgo基因技术。这是自韩春雨之后，中国研究人员发表的有关NgAgo基因技术的第二篇学术论文。

　　▲今年5月，河北科技大学韩春雨团队在《自然》杂志子刊《自然•生物技术》上首次发表关于NgAgo基因技术的论文，全球为之轰动。但随后，多名国内外学者公开表示无法重复论文中描述的实验，从而引发争议。

　　“各路媒体，甚至还有许多国外杂志找到我，让我发表对韩春雨和NgAgo技术的评价，这真是让我们很苦恼的问题。”刘东说，客观地来看，从学术角度确实无法评价，“我们用不同的系统，也没有重复他的实验，仅仅是都用了NgAgo这样一个蛋白质而已，无法做任何关联和讨论。”

　　刘东告诉科技日报记者，他主要从事的是血管新生方面的研究，“利用多种遗传操作技术建立转基因和基因敲除斑马鱼模型”在实验室主页关于他本人的研究领域介绍中排第三，也就是说，这只是他的一项“副业”——利用这些模型来研究血管新生。

　　在此次发表的论文中，刘东敲低的基因是fabp11a，并因此导致斑马鱼眼部发育缺陷，“这与血管新生没有直接的联系”，他直截了当地告诉记者。

　　但是在实验之初，刘东确实是想利用NgAgo技术进行基因敲除，而不是敲低。敲除和敲低尽管只有一字之差，但却是完全不同的两个学术概念。

　　基因敲除是去除不想要的基因，使目标基因永久性的表达沉默。而基因敲低则保留目标基因，只是阻断目标基因的表达，但在下一代生物体内依然能够进行基因表达。敲除是基因编辑的功能之一，而敲低不是。

　　在5月份开始的实验中，刘东想要完成的基因敲除没有实现，但是却意外收获基因敲低这一结果。为了确保实验结果的准确性，整个实验持续了5个多月，直到投稿时实验仍然在持续。

　　他们发现，NgAgo 的存在，使 30% 的斑马鱼胚胎在发育后出现了眼部畸形，但这不是基因编辑的结果。测序发现，fabp11a的基因没有发生任何变化，反倒是 fabp11a mRNA 的相对表达量下降了约50%。fabp11a 没有被编辑，但被敲低了。

　　NgAgo 对 fabp11amRNA 表达的下调只是一个意外吗？为了验证这一点，研究人员又对斑马鱼中的其它四个基因进行的测试。结果发现，NgAgo都能实现敲低作用。因此，他们得出结论：NgAgo 的敲低作用是具有普遍性的。

　　“从实验中看，NgAgo的基因敲低效率（比传统方法）更高。”刘东说，不过他也补充说，这一观点并不是很严谨，毕竟测试的基因数量很少，方法也不是很系统。

　　尽管如此，刘东还是很肯定地表示，没有在NgAgo中重复出基因编辑功能。“我们认为 gDNA/NgAgo 为斑马鱼中的基因敲低提供了一种替代方案。”在论文中，刘东和他的伙伴们这样写到。

　　对于未来会不会继续在实验中研究观察NgAgo技术，刘东说：“这不是我的主要研究方向和兴趣，是否进一步研究还不确定。”

　　科普小贴士

　　为科研献身的斑马鱼是什么？

　　斑马鱼原产于南亚，是一种常见的热带观赏鱼，因其体侧具有斑马一样暗蓝与银色相间的纹条而得名。斑马鱼个体小，易于饲养，成年体长 4-5cm。可在有限空间里大量养殖，满足样本需求量大的研究。

　　之所以选择斑马鱼作为人类疾病动物模型，是因为斑马鱼在基因水平上 87％与人类同源，早期发育与人类极为相似，已成为研究相关疾病基因的最佳模式生物。目前，斑马鱼模式生物的使用正逐渐拓展和深入生命体的多种系统的发育、功能和疾病的研究中，例如神经退行性疾病、心血管疾病、免疫系统疾病等，并已用于小分子化合物的规模新药筛选。因此，斑马鱼作为最有前途且最廉价的模式生物而被广泛的应用。