做液相色谱的同学基本都会碰到分叉峰
很多时候
这都意味着硬件或者方法某些地方可能出现问题
今天我们就一起看看导致峰分叉的原因
以及如何解决这个问题
首先，我们需要判断
这到底是一个峰，还是两个峰?
A图主峰前面有一个肩峰
这到底是峰形不好
还是另外一个化合物没分开呢?
降低该成分在样品中的浓度
B图是降低该成分浓度后
进样后得到的色谱图
如果这是一个峰
那肩峰也应该响应变小
但是这个例子里
肩峰没有变小
这应该是另外一个化合物
这时候，我们就要考虑如何改变方法
将这两个东西分开
如果所有峰的峰形都不好
一般来说
一个样品都会出多个峰
峰形不好，绝大多数时候
在每个峰上面都会出现
比如像下面这样:
A图是所有峰都拖尾.
B图是所有峰都有肩峰，
也可以说峰分叉
这种情况一般都是色谱柱头塌陷
或者柱头的筛板被堵导致的
请看下面的图
A图是正常的柱头
B图是筛板被堵的柱头
正常情况下
所有样品分子都是均匀通过色谱柱
形成一个对称的峰形
堵塞的情况下
有一部分样品分子进入色谱柱就会受到阻扰
导致时间拖后，形成拖尾
对于色谱柱塌陷的情况
用同样的方法大家也不难理解
只不过这时候
是一些样品分子可能跑的比正常的快了一些
01 反冲
柱出口放空，
冲20-30ml流动相。
虽然柱子上都有表明使用方向，
但是对于硅胶基质的色谱柱
基本都可以反冲。
将柱头污染物
如泵密封圈的碎屑，
样品中的污染等冲走，
就能解决问题。
当然，还是要提倡大家注意
样品上机之前的前处理
和及时更换磨损的泵密封圈。
有条件的还是用保护柱，
大不了就换保护柱，
也比换色谱柱强。
02 更换或清洗筛板
现在估计做这个事情的人不多，
但是谁有废柱子，
想练练也未尝不可。
根据之前说的，
可能是柱头堵了，
或者塌陷了。
但是进一步检查，
发现另有原因。
方法用的150 mm 4.6 mm, 5 um C18 柱子，
78% 乙腈，1.5ml/min，等度方法，
进样10ul，100%乙腈溶解的样品。
一般来说，
虽然10ul的纯乙腈不会引起峰形不好，
但是有时候样品溶剂的极性跟流动相差异较大时，
的确会引起峰形的问题。
我们怎么办呢？
01 从最容易的办法做起，
降低溶剂乙腈的比例，
降到50%看看。
从下图B，4min的峰可以看出，
没啥改观。
02 接下来反冲柱子，
结果如图C，
基本没变化。
算了，明天再说吧。
03 第二天来到实验室，
还能干嘛呢?
更换筛板?
算了，直接换柱子吧！
结果如D，
噢，好很多噢。
之前柱子肯定有问题，扔了。
但是峰还是有点宽，
估计还是哪儿有问题。
手上忙，没时间管这个。
04 几天过后，
重新配了流动相，
一跑，好了，如图E。
虽然到底什么原因导致之前峰形的问题，
已经无从查找
（柱子扔了，旧流动相也没了），
但是也给我们提供了一个解决问题的步骤：
确定峰形问题 是所有峰都有问题， 还是就是某一个峰有问题。 如果所有峰都有问题， 基本都是色谱柱， 或者仪器管路连接的问题。 如果是某一个峰有问题， 那就要从方法上来考虑， 是否需要改变流动相比例， pH值，色谱柱温度等等。
1、色谱图中出现无关的峰，原因有可能是样品过滤器带来污染，解决方法如下：（1）将过滤器浸泡在样品溶剂中并进样试验；（2）改变过滤器类型；（3）采用交替清洗技术；2、一些或全部化合物的峰比预期的小，尤其......
萃取的目的是从共溶的样品介质中分离出被分析的组分，或者，减少损坏柱的物质(如，蛋白质等)和干扰物。一般采用有机溶剂萃取，要求萃取用的溶剂毒性低、挥发性好、杂质少、对待测样品有良好的溶解度且又与水不相混......
一般检测的环境、容器、试剂都是影响测定结果的因素。1、环境污染仪器室的有害气体、气溶液、灰尘等等都能造成污染，影响检测结果，这种污染很难校正。因此，仪器室与其他实验室应隔离，保持清洁，仪器室内应安装空......
样品预处理应包括进样前的一切操作，除了称重、溶解、稀释等步骤外，样品需要：①过滤；②萃取；③衍生化(柱前衍生)；④液相色谱(低压柱层析)等。这些操作可以是手工进行或实行自动化操作，样品预处理的目的是除......
色谱双峰指的是明明是同一种物质，但在色谱图中却呈现双峰，让实验人员误认为含有两种物质。那么，出现双峰的原因主要有哪些呢？今天小编就和大家聊一聊，液相色谱出现“双峰”的原因。在HPLC分析中，在色谱柱正......
色谱法是一种常见的分离技术，其原理是利用欲分离组分在两相间具备不同的分配系数，以流动相对固定相中的混合物进行洗脱，混合物中的不同物质以不同速度沿固定相移动，最终达到分离的效果。按两相的物理状态，可以分......
小伙伴们用液相做实验的时候是不是总会遇到各种压力问题和基线问题，比如高了，低了，堵了，漏了，飘了等等。今天一起来看看导致这些问题的原因吧，从根源上突破~液相色谱压力异常液相系统压力产生的原因在于流动相......
一、项目基本情况项目编号：JSZC-321200-RHGS-C2024-0012项目名称：泰州市药品检验院高效液相色谱仪设备采购采购方式：竞争性磋商预算金额：125.000000万元最高限价（如有）：......
2024年5月15日，珀金埃尔默（PerkinElmer）在上海举办主题为“创新不止，探索无界”的新品发布会，正式发布NexION®1100/2200系列电感耦合等离子体质谱仪、Pyris™STA9/......
中国上海，2024年5月8日 -沃特世公司（纽约证券交易所代码：WAT）今日在上海隆重举行了“中华质谱新章”高端国产质谱系列首发仪式，宣布多款中国生产的液相色谱和质谱产品将于本月上市。这些产......