采集和图像处理技术

每一个通道的 offset 和 gain 都应该单独调节（设置背景为 0，饱和为 4095），以便每一个荧光团都显示在完整的 12 位范围里。然后，对每个图像进行单独处理。尽管这是采集和显示多色图像的一个很方便的方法，但样品中两个信号的实际相对强度没法测定，因为每个信号的采集都是为了满足整个 12 位的图像深度。因此，某一个颜色通道相对信号强度的分析要求各个通道以同样的采集参数配置，比如光电倍增管电压、增益和补偿等。

如果图像采集和图像处理技术没有平衡好，在 merge 的彩色图中，就会由于采集过程光电倍增管不合适的 Gain、 offset 配置及图像处理过程中强度直方图的极端拉伸而对共定位做出不准确的解释。举个例子，如果 offset 值过高，就会发生很明显的颜色分离，在低 offset 值下，在同样的结构下，观察到的对比度就降低。对于一些关键应用， ratio 成像技术可用于区分两个信号是共定位还是只是部分叠加。