实验室新手指南之PCR仪

实验室新手指南之PCR仪

操作步骤

1. 开机：打开开关，视窗上显示“SELF TEST”，显示 10 秒中后，显示 RUN-ENTER 菜单：准备执行程序。

2. 放入样本管，关紧盖子。

程序输入与选择

1. 如果要运行已经编好的程序，则直接按《Proceed》，用箭头键选择已储存的程序，按《Proceed》，则屏幕显示：按《Proceed》选择 ENABLE，则开始执行程序。

2. 输入新的程序：在 RUN-ENTER 菜单上用箭头键选择 ENTER PROGRAM，按《Proceed》选择 NEW，命名新的程序，zui多 8 个字母，输入后按《Proceed》确认(如何输入字母、数字)；输入程序步骤：名字输入后，显示，按《Proceed》则可以输入温度(0～100℃)，按《Proceed》确认后，则可以输入孵育时间，用《Select》键移动光标，输入数字，完成后按《Proceed》确认，跳到下一步，输入方式同上；选择 GOTO，输入循环步骤时链接到第几步(循环数zui多可达 9999次)(为实际循环数-1)。选择 option,显示：再选择 increment,按《Proceed》确认，输入初始的温度，确认后输入时间，按《Proceed》确认，然后输入每个循环增加或减少的温度，增加用正值，减少用负值(-0.1℃～6℃)，按《Proceed》确认。选择 extend，按《Proceed》确认,输入每个循环增加或减少的时间(-60～60 秒)，按《Proceed》确认；选择 slop(指温度上升或下降的速率),输入温度的改变值(-0.1～1.5℃)按《Proceed》确认，然后输入加热或致冷的速度，按《Proceed》确认；选择 End，输入结束步骤。

3. 输入完成的程序后，到 RUN-ENTER 菜单，选择新程序，开始运行。

4. 其它：用《pause》可以暂停一个运行的程序，再按一次继续程序；用《stop》或《Cancel》可停止运行的程序。

5. 编辑程序：可以用《Cancel》键删除输错的值，输入新的值后按《Proceed》确认。对于未输完的程序，要先输入 END，按《Proceed》将程序储存后才能删除。删除已经储存的程序：从RUN-ENTER 菜单中选择 RUN-PROGRAM，按《Proceed》，显示主菜单，选择 DELET,用《Select》选择删除。查看程序的步骤：在主菜单上选择 LIST，按《Proceed》，用《Select》将选择名称，再按《Proceed》，显示程序的*步，用《Select》键向前、向后翻页查看，此时不能改变程序的值。

6. 编辑已有的程序：从 RUN-ENTER 菜 单 中 选 择 RUN-PROGRAM， 按《Proceed》，显示主菜单，选择 EDIT，按《Proceed》确认，用《Select》键选择要编辑的程序，按《Proceed》显示程序的*步。用《Select》键将光标移到要改变的温度或循环的值上，键入新值，按《Proceed》确认，按《Cancel》删除键入的值，出现空格，键入新值后确认。注：一旦值被改变或删除，原来的值不能恢复，必须重新键入。编辑时间值：必须重新键入小时、分钟、秒，按《Proceed》。

PCR 体系设置

1. 预变性：可用 94～95℃，2～10min,一般用 5min。

2. 变性：一般用 94℃，30s~2min,一般 45s~1min。

3. 退火：温度自定，30s~2min。

4. 延伸：70～75℃，一般 72℃，对于<2kb,<1min;>2kb,每增加1kb 加1min。

5. 循环数：一般 25～35 个循环。

6. zui终延伸：72℃，5～15min。

7. 保存：10℃，时间设为 0。

8. END。

PCR 仪使用中的一些小技巧

1. 仔细阅读仪器使用说明书，这样可以充分发挥仪器的性能并避免发生错误。

2. 程序设计完成后，一定要仔细检查，以免出错造成损失。

3. 常用的程序zui好调用以前使用过的正确程序文件；样品量较小时，zui好在样品槽的两边各加上两排 8 联管，这样可使热盖平整，加热效果好，有利于效果的稳定性。

4. 在进行各种试剂加样时，相同的试剂要一起加后再分装，要用同一只吸液器及同一个枪头。

5. 加样完成后，zui好用酶联板离心转头将管离心一下，使反应液到管底，因为反应液在管壁或管盖上时，会严重影响实验结果。

PCR 仪的清洗

1. 样品池的清洗：先打开盖子，然后用 95%乙醇或 10%清洗液浸泡样品池 5min，然后清洗被污染的孔;用微量移液器吸取液体，用棉签吸干剩余液体；打开 PCR 仪，设定保持温度为 50℃ 的 PCR 程序并使之运行，让残余液体挥发去除。一般 5～10min 即可。

2. 热盖的清洗：对于荧光定量 PCR 仪，当有荧光污染出现，而且这一污染并非来自样品池时，或当有污染或残迹物影响到热盖的松紧时，需要用压缩空气或纯水清洗垫盖底面，确保样品池的孔干净，无污物阻挡光路。

3. 仪器外表面的清洗：清洗仪器的外表面可以除去灰尘和油脂，但达不到消毒的效果。选择没有腐蚀性的清洗剂对 PCR 仪的外表面进行清洗。

4. 更换保险丝：先将 PCR 仪关机，拔去插头，打开电源插口旁边的保险盒，换上备用的保险丝，观察是否恢复正常。

PCR 仪的维护

1. PCR 仪器需要定期检测，视制冷方式而定一般半年至少一次。

2. PCR 反应的要求温度与实际分布的反应温度是不一致的，当检测发现各孔平均温度差偏离设置温度大于 1～2℃时，可以运用温度修正法纠正 PCR 实际反应温度差。

3. PCR 反应过程的关键是升、降温过程的时间控制，要求越短越好，当 PCR 仪的降温过程超过 60s，就应该检查仪器的制冷系统，对风冷制冷的 PCR 仪要较彻底地清理反应底座的灰尘;对其他制冷系统应检查相关的制冷部件。

4. 一般情况如能采用温度修正法纠正仪器的温度时，不要轻易打开或调整仪器的电子控制部件，必要时要请专业人员修理或利用仪器电子线路详细图纸进行维修。