荧光定量PCR检测试剂盒简述荧光探针法的应用

荧光定量PCR检测试剂盒简述荧光探针法的应用

荧光定量PCR检测试剂盒的原理在于PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；刚开始时, 探针结合在DNA任意一条单链上;PCR扩增时，Taq酶的5’端－3’端外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。或者使用荧光染料SYBR。SYBR可以结合到双链DNA上面，当体系中的模板被扩增时，SYBR可以有效结合到新合成的双链上面，随着PCR的进行，结合的SYBR染料越来越多，被仪器检测到的荧光信号越来越强，从而达到定量的目的。接下来小编简单为大家介绍一下荧光探针法的相关信息。

zui常用于荧光免疫法中标记抗原或抗体，亦可用于微环境，如表面活性剂胶束、双分子膜、蛋白质活性位点等处微观特性的探测。通常要求探针的摩尔吸光系数大，荧光量子产率高；荧光发射波长处于长波且有较大的斯托克斯位移；用于免疫分析时，与抗原或抗体的结合不应影响它们的活性。

目前常用的荧光探针有荧光素类探针、无机离子荧光探针、荧光量子点、分子信标等。荧光探针除应用于核酸和蛋白质的定量分析外，在核酸染色、DNA电泳、核酸分子杂交、定量PCR技术以及DNA测序上都有着广泛的应用。

目前，检测荧光探针的方法主要有单点测定和电荷耦合装置（CCD）荧光成像（包括用于微区分析的激光共聚焦荧光显微镜成像）。由于光电倍增管点扫描时间较长，激光照射强度高，很难抓住荧光早期变化。而CCD荧光成像的面阵大，成像视野广，成像时间可以调节，因而检测效果比较好。

化学发光检测的zui大特点是设备简单、操作简便、分析速度快及灵敏度高。化学发光成像分析(CLI)是将化学发光与成像技术相结合，从而具有分辨率高、多样品同时检测、光谱响应范围宽以及灵敏度高等特点[10,11]，已广泛应用于凝胶、蛋白印记及微阵列芯片中的化学发光信号检测。本实验建立了TCPO?咪唑?H2O2?荧光探针化学发光成像体系。由于化学发光不需要任何光源，因而在对荧光探针进行化学发光成像检测时，不存在荧光检测或者荧光成像时不可避免的光学背景的干扰，从而可以获得更低的检出限。用此体系对5种荧光探针进行定量分析，并研究了用四甲基异硫氰酸罗丹明（TRITC）标记的单克隆羊抗人IgG的化学发光成像，检出限达10－11mol/L，比相同条件下荧光成像的检出限低一个数量级。