固相化pH梯度双向凝胶电泳实验15

含有蛋白质样品的凝胶

转移缓冲液

印迹纸支持性纤维素膜或 PVDF 膜电源半干转移设备

1.测量 SDS-PAGE 凝胶的尺寸，将转移膜与 6 层印迹纸剪切成与凝胶同样大小。

2.用水湿润膜或用甲醇湿润 PVDF 膜，缓慢操作，以避免膜不平整或在膜下产生气泡。

3.将湿润的膜转移到盛有转移缓冲液的平皿中，让其在缓冲液中平衡 5 min。

4.将印迹纸、膜与凝胶排列成「三明治」状，要避免产生气泡，因为气泡会阻止蛋白质的转移。最好按照以下方法操作：

（1）印迹纸和 B 吴要用转移缓冲液湿润，滚动玻璃棒来赶走气泡。

（2）将转移膜放在印迹纸表面。

（3）将凝胶放在膜上，注意一开始应将凝胶放在准确的位置，在膜上移动凝胶通常可能引起污迹；滚动玻璃棒除去膜与凝胶之间的气泡。

（4）再用缓冲液湿润三层印迹纸，将其放在凝胶上，滚动玻璃棒以赶走气泡。

（5）将电极连接好。

在电泳期间，蛋白质将从负极（黑色）迁移到正极（红色）。

5.按照操作说明所建议的时间与电流进行转膜。

6.转膜完成后，关掉电源，去掉盖子。

7.取出转移膜，去掉印迹纸，用软铅笔标记膜对着凝胶的一面。

不能用钢笔或记号笔，因为墨水会溶解在膜的转移缓冲液中。

8.对印迹膜进行染色处理（参见方案 17~20)，或将膜干燥保存在两层印迹纸之间，置于暗处。

保存的膜在染色前，应用水重新湿润硝酸纤维素薄膜或用甲醇湿润 PVDF 膜。