1. 在培养基中将细胞培养至对数生长中期。如需要，可使用抗生素和/或杀真菌剂。
2. 在 pH 7.4 的 10 mmol/L Tris 中低速离心轻洗细胞 1 次，弃上清，低速离心重悬细胞，弃上清。
3. 用 10 mmol/L Tris 重悬细胞至初始体积。
4. 30℃ 孵育细胞 3 天，不振摇，使细胞饥饿。
5. 低速离心浓缩细胞，弃上清，获得细胞浓度约 4X106 细胞/ml。
6. 在 3 ml 高质量的 13.3% DMSO 中重悬 2 ml 细胞。
7. 少量体积分装入 2 ml 的冷冻管中。
8. -70℃ 或 -80℃ 贮存 24 小时。 展 | 