1. 包被抗体
在每个小试管中加入聚苯乙烯珠各一枚,再加入300 μl用0.05 M,PH9.6 碳酸盐缓冲液稀释的抗HBsAg抗体,同时设空白对照,置4 ℃过夜。 2. 洗涤
用抽滤针头吸干管内液体,加入Tris-HCl-Tween20洗涤3 次,每次加2 ml,放置3~5 min,用抽滤针头吸干管内液体。 3. 加待检血清和阳性标准品
用PBS-Tween20缓冲液不同倍数稀释HBsAg阳性标准品或待检血清,每管加入300 μl。同时设阴性对照,空白对照管只加抗体稀释液。置37 ℃孵育2 h。 4. 洗涤
同2。 5. 加酶标抗体
用含小牛血清的PBS-Tween20缓冲液稀释HRP标记的抗HBsAg抗体,每管加入300 μl,空白对照管只加用于稀释酶标抗体的稀释液。置37 ℃孵育2 h。 6. 洗涤
同2。 7. 化学发光测定
给每管加入300 μl底物溶液,置37 ℃保温20 min。然后将小试放入LKB-1250 lumimeter中,并置于测量位置,加入300 μl 5.0×10-4 M luminol。记录仪记录化学发光强度。 8. 同时用ELISA方法进行对照,结果测量采用DG3022型酶联免疫检测仪。 展开 |