中性粒细胞碱性磷酸酶快速染色法的研究(2)

　　三、讨论

　　碱性磷酸酶(ALP)催化β-甘油磷酸钠生成甘油和无机磷酸根，AMP作为磷酸基受体，能不断结合磷酸根，加快正向反应速度。磷酸基受体在酶上有结合位点，且遵循Michatelis-Menten动力学，在ALP的催化机理中，转磷酸反应比磷酸水解反应拥有更高的Vmax，因此ALP更易将磷酸根转移到受体上，当有合适的磷酸基受体存在时，ALP酶促反应有较高的Vmax/Km值，反应速度会显著增加。

　　磷酸基受体与水竟争结合共价吸附于酶活性部位丝氨酸上的磷酸根，必须依赖高浓度磷酸基受体才能显著增加酶促反应速度。但高浓度磷酸基受体也会引入抑制酶活性的杂质。此外，磷酸基受体亦用作缓冲体系，调节反应的pH，而且更重要的是pH对磷酸钙溶解度的影响，即pH太低会使磷酸钙溶解度增加，导致假定位或假阴性。反之pH太高会导致阳性颗粒散于细胞外，或造成细胞膜不同程度的破坏。因此，维持一定pH(9.6±0.2)十分重要。

　　该法基质缓冲液配制简便，AMP作为磷酸基受体加快了反应速度，因而，孵育时间仅需15 min；采用5 g/L沙黄溶液复染，便于对比观察；整个实验可在30 min内完成，具有简便、快速的特点。