LAMP方法通过微波照射检测疟原虫

图片：Blockthermostat BT 200

微波照射是有前景的平台，一套程序通过微波照射从人血和疟原虫体内快速可靠地提取核酸。

虽然血液涂片的显微镜检仍被视为诊断疟疾感染的金标准，但是显微镜检常检测不到低密度感染，且要求高度技巧。

德国蒂宾根大学的科学家与刚果共和国的同行合作收集了严重恶性疟原虫感染患者刚入住加蓬兰巴雷内市阿尔伯特•施韦泽医院时的静脉血样，或者装进5毫升的肝素化试管，或者把指尖采的血保存在无菌沃特曼滤纸上。

基于凯杰公司(Hilden, Germany)的传统QIAamp DNA迷你血液试剂盒从全血样本以及寄生虫培养物的系列稀释液中提取DNA。使用定制的环介导恒温扩增(LAMP)方法，它利用羟基萘酚蓝(HNB)和嗜热脂肪芽孢杆菌(Bst 2.0) DNA聚合酶在分子水平上检测疟原虫。用两个热单元(Block Thermostat BT 200, Kleinfeld Labortechnik, Gehrden, Germany)执行LAMP测定反应，预热到60 °C，进行45分钟的DNA扩增，并在80 °C进行两分钟的酶灭活。

用微波照射进行DNA分离后，传统的聚合酶链反应(PCR)测定最多能够检测五个疟原虫/微升。用微波照射进行DNA分离后，LAMP方法的检测下限是一个恶性疟原虫。从核酸提取到最后的读数显示共经历45分钟。通过清楚的变色显像扩增子，然后通过凝胶电泳确认。从紫色变成亮蓝被认为阳性结果。如果反应一直是紫色，则判定样本为阴性。

该研究的论文发表于2014年11月24日的《疟疾杂志》(Malaria Journal)。作者总结说，LAMP过程为在分子水平上检测疟原虫提供了一种便宜、简单而快速的方法。基本实验室很容易执行这项检验。该方法已经过确证，它专为资源贫乏场合使用而开发。这样的快速分子诊断检验也许能帮助医疗工作者在疟疾疫区及时实施干预治疗。