蛋白质的电转实验

蛋白质

转移缓冲液 甲醇 电极缓冲液

电转移槽 电泳仪

1.  剪6块3 MM 滤纸和一块NC膜。

2.  将剪好的3 MM 滤纸和NC膜在转移缓冲液中浸泡3-5分钟。

3.  按下列过程安装转移装置，将塑料支架平放在含转移缓冲液的托盘中，在塑料支架上放一块海绵。

4.  将3块3MM滤纸对齐放在海绵上，然后依次将NC膜、凝胶、及另3块虑纸和海绵放上。

5.  用塑料支架夹紧上述各层，放入电转移槽内，NC膜一侧向正极，凝胶一面向负极。

6.  接通电源电压120 mA，转移6小时以上或过夜。

7.  转移结束后，取出塑料支架，依次取掉各层，用铅笔在膜的上沿作好标记，切下其中一个孔所对应膜的一半，用氨基黑或考马士亮兰染色，检查转移效果。

8.  将其余的NC膜放在一张干净的3 MM 滤纸上，室温干燥30~60分钟（可不做）。

1.  虑纸及膜的大小不应大于待转移胶的大小，否则在转移过程中会发生短路，影响转移效果。

2.  操作中应戴手套，切不可用手直接触摸，因手上的汗和分泌物将直接影响到蛋白从胶向膜的转移。

3.  放置NC膜和滤纸时，每层之间不应有气泡，否则将影响转移效果。

4.  待转移蛋白分子量决定转移时间，分子量大，转移时间长，反之则小。

5.  干燥虽然可使蛋白质更牢固地结合到膜上，但也可能加剧蛋白的质变性，影响其免疫反应活性。