等电点差异法
| 实验方法原理 | 据不同的血红蛋白带有不同的电荷，等电点不同，在一定的pH缓冲液中，血红蛋白的等电点小于缓冲液的pH时带负电荷，电泳时在电场中向阳极泳动，反之，Hb带正电荷向阴极泳动。在一定电压下，经过一定时间的电泳，不同的血红蛋白所带电荷不同，分子量不同，其泳动方向和速度不同，可分离出各自的区带，同时对电泳出的各区带进行比色或电泳扫描，可进行各种血红蛋白的定量分析。一般最常用的是pH8.6醋酸纤维薄膜电泳。 |
|---|---|
| 实验材料 | 肝素 枸橼酸钠抗凝血 |
| 试剂、试剂盒 | TEB缓冲液 硼酸盐缓冲液 |
| 仪器、耗材 | 醋酸纤维薄膜 电泳仪 加样器 分光光度计 比色杯 离心机 |
| 实验步骤 |
1. 电泳时间不能太长,电泳时醋纤膜不能变干,故应观察到HbA和HbA2清晰分开就停止电泳,电泳时间太长区带反而扩散模糊； 2. 点样量不能太多,如血红蛋白液太多，色带易脱落或染色不透，可出现HbA相对增高的假阳性结果； 3. 避免醋酸纤维膜被蛋白质污染； 4．电流不应过大，否则血红蛋白分不开带； 5．应同时做正常人和必要的已知异常血红蛋白的标本对照。
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| 注意事项 |
1. 电泳时间不能太长,电泳时醋纤膜不能变干,故应观察到HbA和HbA2清晰分开就停止电泳,电泳时间太长区带反而扩散模糊； 2. 点样量不能太多,如血红蛋白液太多，色带易脱落或染色不透，可出现HbA相对增高的假阳性结果； 3. 避免醋酸纤维膜被蛋白质污染； 4．电流不应过大，否则血红蛋白分不开带； 5．应同时做正常人和必要的已知异常血红蛋白的标本对照。
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| 其他 |
等电点（pI,isoelectric point），在某一pH的溶液中，氨基酸解离成阳离子和阴离子的趋势及程度相等，所带净电荷为零，呈电中性，此时溶液的pH称为该氨基酸的等电点。
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