非限制性体干细胞（unrestricted somatic stem cells，USSCs)的分离
脐血来源胚胎样干细胞（cord blood-derived embryonic-like stem cells，CBEs)的分离
脐血来源多能前体细胞（cord blood-derived multipotent progenitor cells ,CB-MPCs)的分离
| 实验方法原理 | |
|---|---|
| 实验材料 | 脐带血来源的MNCs(CB-MNCs) |
| 试剂、试剂盒 | 灭菌起始培养基 扩增培养基 0.05%的胰蛋白酶 含EDTA PBSA |
| 仪器、耗材 | T25培养瓶 |
| 实验步骤 |
(a)制备和分离脐带血来源的MNCs(CB-MNCs)。 (b)如果使用冻存的CB-MNCs,复苏的细胞可以用于培养，不需要其他分离步骤。 (c)用起始培养基按5×106〜7×106个细胞/mL浓度接种到T25的培养瓶中。 (d)将细胞在37℃，5% CO2的条件下培养，2〜4周内每周一次更换培养基和细胞因子。 (e)形成USSC集落后，在扩增培养基中扩增细胞。 (f)将细胞在37℃,5% CO2的条件下培养。 (g)到达80%汇合后，用0.05%胰蛋白酶/EDTA消化细胞，并按1:3比例传代，在相同培养条件下继续培养。
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