实验方法原理 |
体外培养的原代细胞或细胞株要在体外持续地培养就必须传代,以便获得稳定的细胞株或得到大量的同种细胞,并维持细胞种的延续。培养的细胞形成单层汇合以后,由于密度过大生存空间不足而引起营养枯竭,将培养的细胞分散,从容器中取出,以1:2
或l:3 以上的比率转移到另外的容器中进行培养,即为传代培养。 细胞“一代”指从细胞接种到分离再培养的一段期间,与细胞世代或倍增不同。在一代中,细胞培增3~6
次。细胞传代后,一般经过三个阶段:游离期、指数增生期和停止期。常用细胞分裂指数表示细胞增殖的旺盛程度,即细胞群的分裂相数/100
个细胞。一般细胞分裂指数介于0.2%~0.5%,肿瘤细胞可达3~5%。 细胞接种2~3 天分裂增殖旺盛,是活力最好时期,称指数增生期(对数生长期),适宜进行各种试验。
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实验材料 | HeLa细胞 |
试剂、试剂盒 | 1640培养液 PBS 胰蛋白酶 EDTA混合消化液 |
仪器、耗材 | 培养瓶 吸管 离心管 煤气灯 超净工作台 二氧化碳培养箱 倒置显微镜 |
实验步骤 |
1. 将长成单层的原代培养细胞或HeLa 细胞从二氧化碳培养箱中取出,在超净工作台中倒掉瓶内的培养液,加入少许消化液。(以液面盖住细胞为宜),静置5~10 分钟。
2. 在倒置镜下观察被消化的细胞,如果细胞变圆,相互之间不再连接成片,这时应立即在超净台中将消化液倒掉,加入3~5 ml 新鲜培养液,吹打,制成细胞悬液。
3. 将细胞悬液吸出2 ml 左右,加到另一个培养瓶中并向每个瓶中分别加3 ml左右培养液,盖好瓶塞,送回二氧化碳培养箱中,继续进行培养。
4. 结果 一般情况,传代后的细胞在2 小时左右就能附着在培养瓶壁上,2~4 天就可在瓶内形成单层,需要再次进行传代。
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注意事项 |
1.传代培养时要注意无菌操作并防止细胞之间的交叉污染。所有操作要尽量靠近酒精灯火焰。每次最好只进行一种细胞的操作。每一种细胞使用一套器材。培养用液应严格分开。 2.每天观察细胞形态,掌握好细胞是否健康的标准:健康细胞的形态饱满,折光性好,生长致密时即可传代。 3.如发现细胞有污染迹象,应立即采取措施,一般应弃置污染的细胞,如果必须挽救,可加含有抗生素的BSS或培养基反复清洗,随后培养基中加入较大量的抗菌素,并经常更换培养基等。
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其他 |
传代培养可获得大量细胞供实验所需。传代要在严格的无菌条件下进行,每一步都需要认真仔细的无菌操作。
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