西土有一名寺，昂迪·赛司腾姆寺，有大师。
一日，来了一位东土小鲜肉。
鲜肉问大师：“学业有惑，可解？”
大师反问：“你术业可是生物？”
鲜肉惊奇：“是，大师神奇，何以得知？”
大师指鲜肉鞋履：“鞋上两块蓝斑，乃考马斯亮蓝，其渍尚新，你近来必在捣弄蛋白，对否？”
鲜肉羞赧：“正是近日检测蛋白，跑胶无数，不慎滴上。现已斩获Western阳性结果一组，然不知课题如何进一步深入。”
大师欣然：“体外数据方为首步，须继之以体内定位，方法比如免疫组织化学/免疫细胞化学，西土称为IHC/ICC。”
鲜肉：“在下尚无相关历练，听人言IHC/ICC并非易事，不知决窍何在？”
大师眉间一抹豪气：“确有决窍，我已将其制成一帖，习之可使鲜肉秒变大师！”
言毕，大师取出一帖，交于鲜肉：“你我有缘，今赠帖于你，助你早日修成正果，技高一筹，Paper无忧。”
鲜肉喜出望外，接过这帖，叩谢大师，旋即翻开读了起来：
【方法学】
IHC/ICC利用抗原抗体相互作用来定位检测抗原表达，始于1970s，因方法成熟、结果直观而长盛不衰。根据样本类型和显色方式，组合成下图的四个流派。
各流派只在样品准备等步骤略有不同，后续介绍就以最流行的IHC（石蜡切片显色法）为例。
【操作流】
IHC流程包括二甲苯脱蜡，梯度乙醇复水，抗原修复，内源性过氧化物酶失活，非特异性物质封闭，抗体孵育，DAB显色这几步，中间的三步是关键。
【优化点】
流程中的三个关键步骤各有优化诀窍：
抗原修复
IHC特有步骤，因甲醛固定组织会造成目标表位内部或表位与附近无关氨基酸的交联、表位构象或电荷的改变，这可能导致目标表位被掩盖，阻碍抗体的结合。
抗原修复指的是恢复表位-抗体结合的技术。分蛋白酶诱导的表位修复（PIER）和热诱导的表位修复（HIER）。
一般认为PIER作用机制是切割了可能遮盖表位的肽段。其缺点在于成功率低，且可能破坏组织形态和目标抗原。
HIER被认为能逆转一些交联，并实现表位二级或三级结构的重建。HIER的成功率比PIER要高得多。
HIER对时间（1-10min）、温度（95-99℃）、缓冲液和pH敏感，要根据经验或通过预实验确定。抗原修复液有中性（货号CTS015）、碱性（货号CTS013）和酸性（货号CTS014）三种。我们发现通常碱性抗原修复液的处理效果较好（如下图）。
内源性过氧化物酶失活
显色法常用辣根过氧化物酶（HRP）。在肾、肝或含有血管（包含红细胞）等组织都有内源性的过氧化物酶活性，会造成假阳性，用3% H2O2配制的试剂浸泡10min可将其失活。
