兔瘦素(leptin)酶联免疫分析检测范围:
使用目的:
本试剂盒用于测定兔血清、血浆及相关液体样本中瘦素(leptin)含量。
实验原理:
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中兔瘦素(leptin)。用纯化的兔瘦素(leptin)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入瘦素( leptin),再与 HRP标记的瘦素(leptin)抗体 ,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的瘦素(leptin)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中兔瘦素(leptin)浓度。
试剂盒组成:
标本要求:
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。
2.不能检测含NaN3的样品,因 NaN3抑制辣根过(HRP)活性。
操作步骤:
标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl,待测样品孔中先加样品稀释液 40μl,
然后再加待测样品 10μl(样品最终稀释度为 5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽
量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
温育:用封板膜封板后37℃温育30分钟。30倍稀释后备用。
配液:将 30倍浓
洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,重复 5次,拍干。
加酶:每孔加入酶标试剂 50μl,空白孔除外。
温育:操作同 3。
洗涤:操作同 5。
显色:每孔先加入显色剂 A50μl,再加入显色剂 B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟。
10.终止:每孔加终止液 50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。测定应在加终止液后 15分钟以内进行。
操作程序总结:
计算:
以标准物的浓度为横坐标, OD值为纵坐标,在坐标纸上,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的 OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。