尿液中儿茶酚胺和变肾上腺素进行快速、同步分析

临床研究者通常都很关注高浓度尿液中的儿茶酚胺及其O-甲基化代谢产物(变肾上腺素)的测定。但是，这些化合物(尤其是上腺素、肾上腺素和多巴胺）由于极性较大，利用反相LC-MS/MS对其进行分析是一项巨大挑战。因此，许多研究实验室仍采用离子对试剂与电化学检测(ECD)分析这类物质。虽然反相LC-MS/MS已得到成功应用，但由于尿液基质组分发生离子抑制、保留作用不足和异丙肾上腺素与肾上腺素未完全分离，致使挑战仍然存在。
 
亲水作用色谱(HILIC)已逐渐成为分析极性化合物的首选。通过对之前发表的方法进行扩展，本应用纪要介绍了尿液中单胺神经递质与儿茶酚胺的提取与分析方法。采用沃特世(Waters^®) ACQUITY UPLC BEH Amide色谱柱可实现基于HILIC的色谱分离。Waters Oasis WCX 96孔板可用来提取尿液中的这些化合物。将复合模式弱阳离子交换固相萃取(SPE)板，与用于HILIC色谱和Waters Xevo TQD质谱的色谱柱结合使用，可获得具有出色线性、准确度和精密度的快速、稳定方法，并且能最大限度减少基质效应。
 
用含有0.1%抗坏血酸的甲醇配制多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NE)、肾上腺素(EP)、3-甲氧酪胺(3-MT)、变肾上腺素(MTN)和异丙肾上腺素(NMT)的标准品混合储液(10 µg/mL)，以防止氧化。混标储液由10 µg/mL D3-变肾上腺素、D3-异丙肾上腺素、D4-多巴胺、D6-肾上腺素和D6-去甲肾上腺素组成，也使用含有0.1%抗坏血酸的甲醇配制。浓度为800 ng/mL的内标工作溶液应使用含有0.1%甲酸的5%甲醇当天配制。