赭曲霉毒素A的HPLC检测（一）

赭曲霉毒素A（OTA）是一种有毒并可能致癌的霉菌毒素，国家标准方法一般使用薄层色谱法对饲料中的OTA进行检测，但操作上人为因素影响大，重复性差，且使用的试剂毒性较大。本文使用安捷伦Bond Elut Plexa PAX混合型强阴离子交换固相萃取前处理方法结合LC荧光检测器对饲料中的OTA进行分析，同样具有很好的选择性以及低的检测限，完全满足国家标准中对于饲料中OTA检测的要求。不同的添加浓度（在1~100ppb的线性范围内）OTA在饲料中的添加回收率范围均在85%~99%左右，RSD均小于2.2%，方法具有很好的准确度和重复性。

赭曲霉毒素是一种有毒并可能致癌的霉菌毒素，不少食品都含有这种毒素。赭曲霉毒素属次级代谢物毒素组群，由曲霉菌属 （Aspergillus）或青霉菌（Penicillium）的几种真菌产生，属于弱有机酸，为异香豆素的衍生物。赭曲霉毒素分为A，B，C三种；三者在化学结构上只有细微差异，但在毒性方面却有很大差别。赭曲霉A，B，C三种毒素中以赭曲霉毒素A（OTA）最为常见，毒性也是最强的，主要影响肝脏和肾脏。OTA主要存在于谷物、谷物产品、水果、咖啡、婴儿食品、葡萄干、葡萄酒和啤酒中,欧洲在整体膳食评估中对食品中OTA进行了分析,结果发现欧洲人从谷物中摄取到的OTA占到总摄取量的50%,因此，OTA在饲料中的污染情况日益受到人们的关注。

国家标准方法一般使用薄层色谱法对饲料中的OTA进行检测，但操作上人为因素影响大，重复性差，且使用的试剂毒性较大。本方法使用安捷伦Bond Elut Plexa PAX混合型强阴离子交换固相萃取前处理方法结合LC荧光检测器对饲料中的OTA进行分析，同样具有很好的选择性以及低的检测限，完全满足国家标准中对于饲料中OTA检测的要求。不同的添加浓度（在1~100ppb的线性范围内）OTA在饲料中的添加回收率范围均在85%~99%左右，RSD均小于2.2%，方法具有很好的准确度和重复性。

图1. SPE操作过程。

实验部分

仪器与试剂

乙腈，甲醇，乙酸均为色谱纯，甲酸，氨水为分析纯，试验用水为高纯去离子水；OTA标准品，10μg/ml甲醇溶液；饲料为配合饲料。

1260 Infinity HPLC，配FLD检测器，安捷伦；液相色谱柱为Agilent Poroshell 120 SB-C18 （4.6×75mm，2.7μm） PN. 687975-902；安捷伦Vac Elut 12固相萃取装置，P/N. 5982-9110；安捷伦可控针阀，P/N.12131005；安捷伦PTFE 15mm直径2UM过滤膜：P/N. 5190-5084；安捷伦Bond Elut Plexa PAX 200mg，6ml，P/N. 12107206 ，美国安捷伦公司；IKA 干磨机，A11 Basic Analytical Mill，配A11.2剪切刀头；IKA涡旋机，MS 3基本型。

图2. 连续6针进样OTA色谱图。

实验方法

标准品配制

工作曲线的的配置，取10μg/ml OTA标准品作为母液，用乙腈-水（40:60，含1%乙酸）溶液稀释分别配制浓度为1ng/ml，2.5ng/ml，5ng/ml，10ng/ml，50ng/ml，100ng/ml OTA标液制作工作曲线。

图3. 1ppb浓度OTA灵敏度谱图。