关于噬菌体的培养和应用

可以用M13噬菌体展示系统来构建cDNA文库吗？

A: 通常M13不适合cDNA表达，因为M13噬菌体展示需要前导序列（分泌所需）和外壳蛋白pIII或pVIII的N末端之间的框内表达。为了将相应的蛋白质适当地融合到外壳蛋白中，插入物必须在两端的正确阅读框中并且不包含框内终止密码子。这导致M13 cDNA文库中产生的克隆数量极少。

Q: 培养噬菌体可以用什么培养基？

A: TSB / TSA可用于培养大部分噬菌体。然而，不同的噬菌体展示系统，适合的培养基可以是各种各样的。

Q: 噬菌体M13可以感染哪种大肠杆菌？ 它是否有机会污染我们实验室中的所有细胞株？

A: M13噬菌体是一种丝状噬菌体，它使用细菌F接合菌毛的尖端作为受体来促进感染过程。因此，它们仅对含有F质粒（F+）的大肠杆菌菌株具有特异性。对于实验室中的菌株，我们建议您检查它们是否含有F质粒。如果他们不具有，M13噬菌体就不能感染它们。

Q: 大肠杆菌TG1宿主菌是否含有抗生素抗性？

A: 大肠杆菌TG1菌株不含抗生素耐药性，而噬菌体感染的TG1菌株可通过2YT-AK培养基（2YT含100μg/mL氨苄青霉素、50μg/mL卡那霉素）筛选。

Q: PFU和CFU的区别？

A: pfu，指菌斑形成单位，是衡量单个感染性粒子数量的单位，通常用于计算噬菌体。cfu，指的是集落形成单位，是活细胞的量度，其中集落代表源自单个祖细胞的细胞集合，并且通常用于计数细菌（例如大肠杆菌）。

Q: 怎么判断构建的噬菌体文库的优劣？

A：从免疫文库中选择的抗体亲和力与文库的大小成正比，文库库容越大，抗体亲和力越好。通常，最终库容的大小应该达到10⁸。它足够大以分离高亲和力抗体。此外，作为一个优质文库，它应该具有高度的多样性。最终文库的QC结果表明，所有随机挑选的克隆均未发现共同的序列，表明文库的多样性处于很高的水平。