瘦素elisa试剂盒操作技巧

瘦素elisa试剂盒应用于双抗体夹心法测定标本中人瘦素（leptin）水平。用纯化的人瘦素（leptin）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入瘦素（leptin），再与HRP标记的瘦素（leptin）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的瘦素（leptin）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人瘦素（leptin）浓度。

操作技巧：

1、血清：操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。

2、细胞上清液：1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。

3、血浆：EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。

4、组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液。

5、脱镁叶绿素a氧化酶酶免ELISA试剂盒保存：如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

操作注意事项

1、当混合蛋白溶液时应尽量轻缓，避免起泡。

2、请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。

3、一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4、洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。

5、如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请最后乘以稀释倍数。

6、底物请避光保存。

7、在配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。