高架十字迷宫实验相关-复方抗焦虑胶囊对急性应激大鼠的抗焦虑作用
复方抗焦虑胶囊对急性应激大鼠的抗焦虑作用及对大鼠脑内ERK/CREB信号通路和BDNF表达的影响
摘要:目的研究复方抗焦虑胶囊对急性应激大鼠的药效及其对大鼠脑皮层及海马ERK/CREB信号通路、脑源性神经营养因子(BDNF)的影响。方法采用高架十字迷宫实验,观察了复方抗焦虑胶囊低、中、高剂量(0．75、1．5、3g·kg-1)给药7d对急性应激大鼠行为的影响,采用Westernblot免疫印迹法研究复方抗焦虑胶囊对ERK/CREB信号通路的影响,对急性应激大鼠脑皮层及海马BDNF表达的影响。结果高架十字迷宫实验显示,复方抗焦虑胶囊高剂量组可明显增加大鼠进入开臂时间的百分数(OT%)(P<0．05)和进入开臂次数的百分数(OE%)(P<0．05)。Westernblot实验显示,复方抗焦虑胶囊中剂量组明显减少了海马中p-ERK1/2的表达(P<0．05);高剂量组明显减少了大鼠皮层和海马中p-ERK1/2和p-CREB的表达(P<0．05)。高剂量组明显增加了大鼠皮层及海马中BDNF的表达水平(P<0．05,P<0．01)。结论复方抗焦虑胶囊在高架十字迷宫模型中具有抗焦虑作用,且其抗焦虑机制可能与影响ERK/CREB信号通路,增加BDNF表达有关系。
关键词:复方抗焦虑胶囊;急性应激;高架十字迷宫;ERK/CREB信号通路;脑源性神经营养因子(BDNF);Westernblot免疫印迹法
焦虑症是中枢神经系统常见的精神疾病,成为日益增长的全球健康问题。焦虑症以急性焦虑反复发作为特征,临床表现为广泛性焦虑和发作性惊恐状态2种形式。临床上以恐惧、紧张不安等精神障碍为主要表现,并伴有心悸、多汗、胸闷、呼吸窘迫以及睡眠障碍等。在精神障碍中,焦虑症的终生患病率最高,影响到30%人口的寿命。在我国,焦虑症已成为现代常见病和多发病,严重影响了人们的生活质量。因此,焦虑症的有效治疗成为亟待解决的问题。
苯二氮卓类药物已被证明是有效的抗焦虑药,如地西泮等,但这些化合物存在明显的副作用,如镇静、肌肉松弛、遗忘和依赖性。并且抗焦虑药物的服药时程长,易导致戒断反应、反跳和依赖。临床证实,中药治疗焦虑症不仅安全有效、副作用小,还具有改善其它相关症状的作用。因此,研究开发疗效好、副作用小的中药抗焦虑新药成为近些年来研究的热点。
复方抗焦虑胶囊(antianxieticcompoundprescriptioncapsule,ACPC)来源于临床经验方,由蜘蛛香、合欢皮、炒酸枣仁、灯心草组成,功能理气解郁、养血安神,主要治疗肝郁气滞、心神不宁型焦虑症。前期研究表明,该复方具有稳定的抗焦虑作用,且不影响动物的自主行为活动,其作用机制与调节GABAA受体[9-10]、Cdk5/p35通路的表达,抑制脑中单胺类神经递质的释放以及调节免疫功能紊乱相关。为了更加深入地对复方抗焦虑胶囊的药效进行评价,明确其作用特点,为其安全有效的应用提供实验和理论依据,本实验探讨了复方抗焦虑胶囊对急性应激大鼠的作用及其机制。
1材料
1.1动物SPF级SD♂大鼠,体质量150~170g,购自北京维通利华实验动物技术有限公司,动物许可证号:SCXK(京)(2012-0001)。
1.2药品与试剂①蜘蛛香药材购自云南省师宗县,炒酸枣仁、合欢皮和灯心草购于河北省安国市蔺氏有限责任公司,经北京中医药大学石晋丽教授鉴定,蜘蛛香为败酱科缬草属植物蜘蛛香ValerianajatamansiJones的干燥根茎及根;酸枣仁为鼠李科枣属植物酸枣ZiziphusjujubaMill.var.spinosa(Bunge)HuexH.F.Chou的干燥种子;合欢皮为豆科植物合欢AlbizziajulibrissinDurazz.的树皮;灯心草为灯心草科植物灯心草JuncuseffusesL.的干燥茎髓。蜘蛛香、炒酸枣仁、合欢皮、灯心草(均为干浸膏)按照12∶9∶9∶1的质量比混合,再加入0.5倍干膏量的糊精混匀,制成颗粒,干燥,分装,即得复方抗焦虑胶囊(含橙皮苷1．05mg·g-1、酸枣仁皂苷A7.50mg·g-1),实验前用氯化钠注射液将其制成溶液备用。②地西泮(diazepam,DZP),2．5mg×20片,国药准字H11020898,北京益民药业有限公司,批号20120305。③氯化钠注射液,国药准字H37020764,山东齐都药业有限公司,批号1012081004。④RIPA裂解液、Bradford蛋白浓度测定试剂盒、30%丙烯酰胺-双丙烯酰胺、膜再生液、封闭用脱脂奶粉均购自北京普利莱生物科技有限公司;过硫酸铵(ammoniumpersulphate,AP)为美国Amersco公司产品;甲叉双丙稀酰胺、四甲基乙二胺(TEMED)、十二烷基硫酸钠(sodiumdodecylsulfate,SDS)为美国Sigma公司产品;三氨基甲烷(Tris)、甘氨酸购自美国Novon公司;p-ERK1/2、ERK1/2、pCREB和CREB抗体为CellSignaling公司产品;β-actin单克隆抗体为SantaCruz公司产品;HRP标记山羊抗兔及兔抗山羊二抗均为中杉金桥公司产品;ECL发光检测试剂盒及光谱彩虹预染蛋白Marker均为康为公司产品;PVDF膜为美国Millipore公司产品;其它试剂为国产分析纯。
1.3仪器
1.3.1高架十字迷宫大鼠高架十字迷宫(XR-XG201型上海欣软公司)包括两个闭臂(50．225px,宽10．100px,高40．225px)与两个开臂(50．225px,宽10．100px),距地面74．75px。
1.3.2束缚管聚乙烯材料束缚管自制(规格:长22．150px,直径7．225px)。
1.3.3Westernblot免疫印迹实验仪器超声匀浆机(USASonic公司)、高速冷冻离心机(BeckmanAllegra64R)、移液器(1000、200、100、20μL)(德国Eppendorf公司)、UNIC7200型分光光度仪(上海UNIC公司)、-80℃低温冰箱(Forma,美国)、垂直板电泳转移装置(美国Bio-Rad公司)、恒温水浴摇床(上海比朗仪器有限公司)、多用脱色摇床、多功能酶标仪(美国MultiskanEXPRIMA-RYEIAV.2．3)。
