饲料中盐酸氨丙琳的测定高效液相色谱法

范围

本标准规定了以高效液相色谱法测定饲料中盐酸氨丙琳的方法，适用于配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料和精料补充料中盐酸氨丙琳的测定，最低检测浓度为1.0 m g/kg.

原理

饲料样品中的盐酸氨丙琳以含有离子对试剂的甲醇溶液超声提取，离心后过滤，用离子对反相液相色谱法测定。

试剂和材料

除特殊注明外，本法所用的试剂均为分析纯，水为蒸馏水，色谱用水符合GB/T 6682一级水的规定。

1.1 乙睛:色谱纯。

1.2 甲醇。

1.3 十二烷基磺酸钠。

1.4 二乙胺。

1.5 冰乙酸。

1.6 提取液:称取1. 36 g十二烷基磺酸钠(1.3),溶于适量2+1(V1+V2)的甲醇水溶液中，并用该混合液稀释至1 L.

1.7 盐酸氨丙琳标准品:纯度99.8%.

1.8 盐酸氨丙琳标准溶液

1.8. 1 盐酸氨丙琳标准储备液:准确称取盐酸氨丙琳标准品1. 7)0.0500g，置于100mL容量瓶中，用提取液(1. 6)溶解并定容至刻度，摇匀，其浓度为500ug/mL,贮于4--6℃冰箱中，有效期一个月。

1.8.2 盐酸氨丙琳标准工作液:准确吸取盐酸氨丙琳标准储备液(1.8.1)10.00 mL，置于50 mL容量瓶中，用提取液(1.6)溶解并定容至刻度，摇匀，其浓度为100 ug/mL。再以此稀释液配置50 ug/mL,10 ug/mL,5 ug/mL的标准工作液。

1.9 HPLC流动相:称取1.09g 十二烷基磺酸钠(1.3 )，溶于适量体积分数为30%的乙睛水溶液中，加入3 mL二乙胺(1.4)和10 mL冰乙酸(1.5)，用体积分数为30%的乙睛水溶液稀释至I L混匀，用0.45mm滤膜过滤，使用前超声脱气。

仪器

分析天平:感量为0.0001g 和0.001g ，各一台。

超声水浴。

离心机:4000r/min-5000r/min,

GE-200液相色谱仪:具有GE-200紫外检测器或二极管阵列检测器。

试样制备

按GB/T 14699.1采取有代表性的样品200g -500g ，用四分法缩至100g ，粉碎，使全部通过0.45mm孔径的筛，充分混匀，贮于磨口瓶中备用。

分析步骤

4.1 提取

称取饲料样品5g(准确至0.0 01g )，置于50m L离心管中，准确加人提取液(4.6)50.00m L，加塞，充分摇动1min，再置超声水浴中超声提取20min，其间用手充分摇动两次。取出后于离心机上4000r/min离心10min，将上清液用0.45um滤膜过滤，滤液作为试样溶液。

4.2 测定

4.2 .1 HPLC测定参数的设定

色谱柱:C18柱，柱长150mm，柱内径4.6mm,粒度5um，Vertex C18分析柱。

柱温 : 室温。

检测器 :紫外检测器，检测波长267nm,

流动相流速:1.5m L/min

进样量 : 10ul-20ul。

4.2.2 定f测定

取 适 量 由7.1获得的试样溶液和相应浓度的盐酸氨丙琳标准工作液(4.8.2)进行测定，以色谱峰峰

面积做单点校准定量。

结果计算与表述

分析结果表示为盐酸氨丙琳在饲料中的质量分数X，以毫克每千克(mg/kg)表示，用式(1)计算:X=P2*V1*c*V2/P1*m*V3……………………(1)

式中:

V1— 加人提取液的体积，单位为毫升(mL) ;

V2 盐酸氨丙琳标准溶液的进样体积，单位为微升(uL);

V3— 试样溶液的进样体积，单位为微升(uL) ;

P1 盐酸氨丙琳标准溶液对应的色谱峰面积响应值;

P2— 试样溶液对应的色谱峰面积响应值;

c— 盐酸氨丙琳标准溶液的浓度，单位为微克每毫升(ug/mL);

m— 试样质量，单位为克(g)。

平行测定结果用算术平均值表示，保留至小数点后1位。

重复性

在同一实验室，由同一操作人员使用同一台仪器完成的两个平行测定的相对偏差不大于7%

本标准是在查阅了大量国内外文献的基础上，根据我国的技术发展水平研究制定的。

本标准由国家质量监督检验检疫总局提出。

本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口。

本标准起草单位:国家饲料质量监督检验中心(北京)。

本标准主要起草人:林东下、赵根龙、高生、李兰、魏秀莲、范理、苏晓鸥、靳松。