质量控制
每一试剂中均含有阴性和阳性质控血清,这些质控可接受的免疫指数(ISR)值会在以下的详细表格中说明,阴性质控和阳性质控是用于监测试剂的实质性错误,阳性质控并不保证试剂临界值的精确性。如果任一质控的ISR值不符合说明书,则本次实验是无效的必须重做,如果实验是无效的,病人的结果不能公布。质量控制的执行必须与地方的,国家的或联盟规则要求和你实验的质量控制程序标准相一致,建议使用者参照NCCLS C24A和42CFR493、1256作为质量控制实践的指引。以下的结果仅作为例子。
阴性质控的计算:计算DENRA和NCA的登革热病毒阴性质控值。
例如:登革热阴性质控
DENRA NCA
No 1 0.108 0.066
No 2 0.082 0.061
总和 0.190 0.127
平均值(DENRA)= 0.190÷2 = 0.095
(NCA) = 0.127 ÷ 2 = 0.064
计算DENRA/NCA的比例: 0.095÷0.064 = 1.48
登革热阴性质控的计算DENRA/NCA比例高于1.65,则实验必须重做。
阳性质控的计算:计算NCA和DENRA的登革热IgM阳性质控。
例如:登革热阳性质控
DENVRA NCA
No 1 0.635 0.105
No 2 0.655 0.115
总和 1.290 0.220
平均值(DENVRA)= 1.290÷2 = 0.645
(NCA) = 0.220 ÷ 2 = 0.110
计算DENVRA/NCA的比例: 0.645÷0.110 = 5.86
登革热阴性质控的计算DENVRA/NCA比例低于5.0,则实验必须重做。
为了能出具实验报告,实验结果必须满足下列表格的要求。如果实验结果不能完全满足下列要求,则说明试剂退化了或者实验步骤出现了问题,实验必须重做。
表1:
因素 | 可接受范围 |
DENRA中登革热阴性质控的平均OD值 | <0.300 |
DENRA中登革热阳性质控的平均OD值 | >0.350 |
登革热IgM阳性质控的ISR | >5.000 |
登革热IgM阴性质控的ISR | <1.650 |
结果计算:
ISR值的计算:如果样品是做双份检测,计算DENRA两个阴性质控的平均OD值,计算NCA两个阴性质控的平均OD值,并计算DENVRA/NCA的比率(ISR)。如果未知样品只做了一份,直接用DENVRA OD值除以NCA OD值
选择临界值和确定可疑范围:109个真阳性和97个真阴性样品用于优化ISR临界值,建立可疑范围。可疑范围由两个临界值决定,ISR≥2.84的为阳性,相应的特异性为99%,灵敏度为91%;ISR≤1.65的为阴性,相应的特异性为96%,灵敏度为94%,可疑范围为1.65-2.84.
结果说明
表2::
ISR | 结果 | 说明 |
≤1.65 | 阴性 | 没有可检测到的IgM抗体,这结果不能排除登革热感染。如果怀疑有早期感染,就应该在7-14天内对另外的样品进行检测。其它登革热测试方法也应用来排除急性感染。 |
1.65-2.84 | 可疑 | 可疑样品应重复检测。重复检测后如果结果还是可疑,就应用另外的方法来测试,或采集另一个样品。 |
≥2.84 | 阳性 | 说明样品中存在可检测到的IgM抗体,建议做证实实验。 |
期望值
疫区人群
此登革热IgM检测试剂盒在2009年被南美的一间诊所用于检测有登革热症状人群的血清样本.被筛查的66位个体在起初都有发烧的症状.样本中包含有初次和二次的感染.样本的反应关系见下面表3和表4.
表3:疫区人群患者的期望值
检测结果 | ||||||
年龄 | 男性人数 | 女性人数 | 无反应人数 | 可疑人数 | 反应人数 | 流行率 |
9-20 | 3 | 10 | 12 | 0 | 1 | 7.7% |
21-30 | 5 | 7 | 8 | 1 | 3 | 25% |
31-40 | 6 | 14 | 13 | 2 | 5 | 25% |
41-50 | 7 | 6 | 9 | 2 | 2 | 15.4% |
51-60 | 2 | 3 | 3 | 0 | 2 | 40% |
61-70 | 2 | 0 | 2 | 0 | 0 | 0% |
71-80 | 1 | 0 | 1 | 0 | 0 | 0% |
总共 | 26 | 40 | 48 | 5 | 13 | 19.7% |
a:所有反应的样品都经PRNT验证
非疫区人群
2004年3月期间,从佛罗里达州, 德克萨斯州, 宾夕法尼亚州收集无登革热症状的200份血清样本.样本覆盖男女的不同年齡阶段.被筛选的血清反应性见下表4
表4:非疫区无登革热症状人体的期望值
检测结果 | ||||||
年龄 | 男性人数 | 女性人数 | 无反应人数 | 可疑人数 | 反应人数 | 流行率 |
10-20 | 5 | 13 | 18 | 0 | 0 | 0.0% |
21-30 | 38 | 30 | 68 | 0 | 0 | 0.0% |
31-40 | 27 | 38 | 64 | 1 | 0 | 0.0% |
41-50 | 23 | 20 | 42 | 0 | 1a | 2.3% |
51-60 | 5 | 1 | 6 | 0 | 0 | 0.0% |
总共 | 98 | 102 | 198 | 1 | 1 | 0.5% |
a:此样品经PRNT验证为登革热阳性