发布时间:2020-07-27 23:38 原文链接: 活体动物体内光学成像(四)

3. 标记细菌
(1) 细菌侵染研究
可以用标记好的革兰氏阳性和阴性细菌侵染活体动物, 观测其在动物体内的繁殖部位、数量变化及对外界因素的反应。
(2) 抗生素药物
利用标记好的细菌在动物体内对药物的反应,医药公司和研究机构可用这种成像技术进行药物筛选和临床前动物实验研究。

4. 基因表达和蛋白质相互作用
(1) 组织特异性基因表达
荧光素酶(luciferase)是一类生物发光酶,其中的renilla荧光素酶和firefly荧光素酶分别识别不同的底物, 一种细胞可被这两种荧光素酶标记: renilla 荧光素酶基因由一组成性稳定表达的启动子驱动, 作为内参,反应细胞数量的变化; firefly荧光素酶基因由要研究的组织特异性启动子驱动。这样firefly荧光素酶发光信号的变化,在消除细胞数量变化的影响后就可反应特定的启动子在动物体内的表达活性。
(2) 蛋白质相互作用
观察细胞中或活体动物体内两种蛋白质的相互作用,是将荧光素酶基因分成两段,分别连接所研究的两种蛋白之一的编码DNA,然后导入细胞或动物体内表达为融合蛋白。当两种蛋白有强相互作用时,表达的荧光素酶两部分相互靠近形成有活性的荧光素酶,在有底物存在时出现生物发光,反映出所研究的两种蛋白存在相互作用。应用此原理亦可用于研究细胞信号传导途径。
(3) 阻断RNA
通过对比生物发光的变化,验证在成年小鼠体内,注射双链siRNA可以特异地阻遏基因表达。

5. 转基因动物模型
(1) 基因表达
为研究目的基因是在何时、何种刺激下表达,将荧光素酶基因插入目的基因启动子的下游,并稳定整合于实验动物染色体中,形成转基因动物模型。利用其表达产生的荧光素酶与底物作用产生生物发光,反应目的基因的表达情况,从而实现对目的基因的研究。可用于研究动物发育过程中特定基因的时空表达情况,观察药物诱导特定基因表达,以及其它生物学事件引起的相应基因表达或关闭。
(2) 各种疾病模型
研究者根据研究目的,将靶基因、靶细胞、病毒及细菌进行荧光素酶标记,同时转入动物体内形成所需的疾病模型,包括肿瘤、免疫系统疾病、感染疾病等等。可提供靶基因在体内的实时表达和对候选药物的准确反应,还可以用来评估候选药物和其它化合物的毒性。为药物在疾病中的作用机制及效用提供研究方法。

6. 荧光成像功能
用RFP标记病毒,动态检测病毒在体内的复制过程。
例:In vivo Near-Infrared Fluorescence Imaging of Integrin _v_3 in Brain
Tumor Xenografts


活体动物体内成像技术常见问题解答
 关于细胞标记和荧光素酶的特性
 关于仪器的特性等问题
 关于生物发光与荧光及其它技术的比较
 关于技术应用

关于细胞标记和荧光素酶的特性
 1. 荧光素酶的发光是否需要激发光? 荧光素酶的发光是生物发光,不需要激发光,但需要底物荧光素(Luciferin)。
2. 荧光素酶的发光特性如何? 荧光素腹腔注射老鼠后约一分钟后表达荧光素酶的细胞开始发光,十分钟后强度达到稳定的最高点。在最高点持续约20-30 分钟后开始衰减,约三小时后荧光素排除,发光全部消失。最好的检测时间是在注射后15到35分钟之间