1、抗原: 蛋白质、多肽、细胞器、细胞、组织等。
2、免疫方式:皮下注射、腹腔注射、静脉注射、肌肉注射等。
3、不同动物免疫所需抗原量(以蛋白免疫为例)
>18-20kDa | <18-20kDa | |||
动物 | 抗原量 | 最佳抗原量 | 抗原量 | 最佳抗原量 |
兔子 | 20-200 | 100 | 50-400 | 200 |
小鼠 | 2- 40 | 15 | 4- 60 | 40 |
大鼠 | 10-50 | 30 | 20-150 | 50 |
绵羊 | 100-1000 | 200 | 200-1000 | 400 |
母鸡 | 20-200 | 100 | 50-400 | 200 |
单位:微克 |
4、免疫方案(以免疫兔子为例) :
天数 | 0 | 14 | 28 | 38 | 56 | 66 | 87 |
注射 | x | x | x | x | |||
采血 | 2ml | 2ml | 2+20ml | 2+50-70ml |
5、注意:
第一次免疫用完全佐剂与免疫原混合,以后加强免疫用不完全佐剂与免疫原 混合,采取多点,时间间隔式免疫法。
如果用细胞免疫兔子,那么每次免疫所需细胞量为 2-3 x 107cells。 在连续免疫完三次后,需要少量取血进行ELISA检测,检测所免疫动物的抗 体滴度,一般滴度能达到 1:10,000-50,000。在处死所免疫的动物前一周应加 强一次免疫。
如果用小鼠免疫,可以尾静脉小量采血(大约 50µ l) ,最后取眼球大量采血 (大约 500-1000µ l) ;如果用兔子免疫,可以耳缘静脉小量取血(大约 2mL), 最后心脏大量取血(50-100mL)。
按血清制备的标准方法将血清分离,并且分装成小份,储藏在- 80oC。
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