方法四：
1、将1ml过夜培养的细菌（如DH52、TG1、TM101）接种于100ml2×YT培养于500ml烧瓶。于37℃刷烈振荡，通常≥200rpm培养的细菌密度约OD550=0.2～0.5(5×107cells/ml),需2～4h。
2、将培养物放于冰上致冷10min，于4℃离心细菌培养物，10000rpm离心10min。
3、弃除上清，将细菌悬浮于原始培养体积的一半（约50ml）的50mMCaCl2和10mm Tris HCl（pH8.0）无菌冷冻液体中。
4、将细菌悬浮放在冰上约5min，然后将悬浮物于4℃10000/rpm离心10min。
5、弃上清，悬浮细菌于原始培养体积的1/15的50mMCaCl和10mMTris?HCl（pH8.0）无菌冷冻中。此时的细胞是感受态细胞，即可用于转化。200μl分装于无菌的1.5ml微量离心管中，贮存于-80℃冰箱中。
方法五：TSB法
实验试剂：
1M Mg2+ (1M MgSO4 和 1M MgCl2等体积混合)，用0.22um滤膜超滤除菌。
TSB液（30mL/ 80mL菌液）（现配现用）： PEG3350 3g ；Tryptone 0.3g ；Yeast extract 0.15g
；NaCl 0.3g ；以上 121℃, 15min 灭菌后，加入1M Mg2+600uL , 以及DMSO 3mL
实验步骤：
1、活化菌株 。
2、挑单菌落培养于5mL 的液笨培养基中。
3、取液体培养物50uL于80mL的液体培养基中进行扩大培养 。
4、370C培养3－4小时，OD600在0.4－0.6 。
5、离心，去上清 。
6、加入20mLTSB，重悬 。
7、离心，去上清 。
8、加入10mLTSB，再加入15－20%的甘油，分装保存。
注：整个操作过程均应在冰上进行。所用药品均需灭菌。
大肠杆菌电转化感受态细胞制备经验过程：
实验步骤：
1、将适合菌株（如XL1-Blue, DH5α）置于LB或其他营养丰富的培养基上，在37°C下过夜培养。
2、高温灭菌大的离心瓶（250-500ml）。准备几瓶灭菌水（总量约1.5升），保存于冷冻室中以备重悬浮细胞用。
3、转移0.2-1ml过夜培养物至装有500ml LB（或其他营养丰富的培养基）的1-2升挡板摇瓶中。
4、37°C下剧烈振荡培养2-6小时。
5、定时监控O.D.600值（培养1小时后每半小时测定一次） ，当O.D.600值达到0.5-1.0时，从摇床中取出摇瓶，置于冰上冷却至少15分钟（需要的话这种方式可以存放培养液数小时）。
6、细胞在4°C 5000g下离心15分钟，弃上清液（如需要，沉淀可在4°C的10%甘油中保存一两天）。
7、用灭菌的冰水重悬浮细胞。先用涡旋仪或吸液管重悬浮细胞于少量体积中（几毫升），然后加水稀释至离心管的2/3体积。
8、照上面步骤重复离心，小心弃去上清液。
9、照上面步骤用灭菌的冰水重悬浮细胞。
10、离心，弃上清液。用20ml灭菌的、冰冷后的10%甘油重悬浮细胞. 照上面步骤离心，小心弃去上清液（沉淀可能会很松散）。
11、用10%甘油重悬浮细胞至最终体积为2-3ml。
12、将细胞按150μl等份装入微量离心管，于-80°C保存。
转化方法：
1、在冰上解冻电感受态细胞添加1-10μl DNA ，冰上培育约5分钟。
2、添加1-3μl DNA ，冰上培育约5分钟。
3、转移DNA/细胞混合物至冷却后的2mm电穿孔容器（无泡）中。
4、加载P1000，准备好300μl LB 或 2xYT 。
5、对电穿孔容器进行脉冲（200 欧姆, 25μFd, 2.5 千伏）（检查时间常数，应该在3以上）。
6、立即添加300μl 的LB或2xYT至电穿孔容器中。
7、37°C下培养细胞40分钟至1小时以复原。
8、转移细胞至适当的选择培养基上培养。
