Southern杂交技术1

Southern技术是指以Southern名字命名的DNA转移杂交技术。它可用于基因组特定DNA序列的定位，可以测定相关片段的同源性、可以从c库、基因组文库中筛选完整基因等。用一种或多种限制性内切酶对基因组DNA加以切割，通过琼脂糖凝胶电泳分离酶切片段，随后，使DNA在原位变性，并从凝胶转移至固相膜，用已知核苷酸片段加以标记作为探针，通过分子杂交来检测待测样品中是否存在互补的核酸序列。该技术已成为分子生物学中一类重要的检测手段。下面分别介绍利用光敏生物素试剂盒及DIG试剂盒进行杂交的方法。

十五－1:光敏生物素试剂盒杂交实验

一仪器：分子杂交仪、摇床、 烤箱、取液器、电泳仪、电泳槽

二试剂：硫酸葡聚糖钠盐(可不用)、聚乙烯吡赂啉酮（PVP）、聚蔗糖、牛血清白蛋白（BSA）、100mM EDTA、3MnaAC、无水乙醇、电泳缓冲液、切变性鲱鱼精DNA（100ug/ml）

20×SSC溶液 氯化钠 ３Ｍ 预杂交液 ６×SSC

柠檬酸三钠 0.3M （含100ug/ul变性鲱鱼精DNA）

pH 7.0 ５×Denhardt's 溶液

0.5%SDS

变性液 0.5M NaOH 中和液 1M Tris-HCL pH 7.4

1.5M NaCL 1.5M NaCL

封闭液 3gBSA溶于70ml水中，浓盐酸调pH至3.0,煮沸20分钟后，冷至室温，NaOH调pH至7.5,加入10ml以下缓冲液（1M Tris-HCL pH7.5, MgCL2 0.19%, NaCL 5.8%, Triton X-100 0.05ml）定容至100ml

５０×Denhardt's 溶液 1％PVP 1M PBS NaCL 0.8% pH 7.4

1%BSA KCL 0.02%

1%聚蔗糖 Na2HPO4 0.144%

KH2PO4 0.024%

洗涤液

Ａ:２×SSC,250ml中含0.1%SDSＢ：0.1×SSC,250ml中含0.1%SDS

Ｃ：Tris-HCL 100mM pH 7.5 Ｄ：Tris-HCL 100mM

NaCL 1M NaCL 0.5M

MgCL2 2mM Tween 20 0.5% pH 7.5

Triton X-100 0.05%

亲和素－碱性磷酸酶溶液 Tris-HCL 100mM

NaCL 1M

MgCL2 2mM

Triton X-100 0.05%

pH 7.5

碱性磷酸酶2-3单位/ml

底物溶液 Tris-HCL 100mM pH 9.5 终止液

NaCL 100mM Tris-HCL 10mM

MgCL2 5mM EDTA 1mM