MDx2021：新冠快检／HBV／结核等病原检测技术平台的升级

　　分析测试百科网讯 2021年5月20-21日，MDx 2021第七届中国先进分子诊断技术与应用论坛在上海新发展亚太JW万豪酒店开幕。本次论坛深度探讨分子诊断技术升级及产品申报与临床落地等前沿走向、基于测序的mNGS临床落地方案、纳米孔/单分子/固态纳米孔技术平台进展、PCR/RAA/dPCR等技术路线优化落地、MMCA/CRISPR/微流控/POCT等一体化、自动化核酸快检产品开发等分子诊断行业痛点与年度热门议题，与行业著名专家学者共同探讨先锋技术开发与产品应用，吸引了来自国内科研院所、临床医疗机构、生物医药企业等近500位业内同仁参与。

MDx 2021第七届中国先进分子诊断技术与应用论坛

　　上海交通大学生命科学技术学院副院长冯雁主持“新冠快检/HBV/结核等病原检测技术平台的升级”专场，中国科学院院士、微生物分子遗传学家邓子新上台致辞。

中国科学院院士、微生物分子遗传学家邓子新致辞

　　邓子新院士在致辞中介绍了微生物核酸检测的前沿之路，分享了分子诊断/个体化诊疗的发展历史和全球新冠病毒感染、控制和检测情况。

　　新冠疫情早期由于对新冠病毒认知不足，病毒检测试剂盒供不应求，RT-qPCR试剂盒覆盖位点少，容易出现“假阴性”问题，而新冠患者可能合并其他病原感染，单次检测无法全部覆盖。因此临床上经常需要更加准确、快速而全面的检测手段。

　　武汉战疫中的纳米孔靶向测序检测技术（NTS）是一种在发酵过程中对噬菌体及杂菌污染进行快速诊断的方法，继而开发出一套针对新冠病毒并兼查常见呼吸道病毒的NTS实时测序检测平台，具有快速、准确检测的优势。针对疫情早期疑似感染的门诊病例和临床确诊病例，NTS相对RT-qPCR显著提高检出的敏感性。NTS可以监测基因突变，进行S和L谱系分类，关联突变与患者临床表型及病情程度差异关系确定患者细菌真菌同步感染，指导合理科学治疗等。

厦门大学分子诊断教育部工程研究中心主任 李庆阁

报告题目：多色探针熔解曲线分析技术下的一体化新冠突变株检测方案

　　报告内容包括了新冠病毒（SARS-CoV-2）的生命周期、基因组与蛋白、SARS-CoV-2基因组变异分析、SARS-CoV-2变异分析与监测靶标选择、SARS-CoV-2的系统演化等。SARS-CoV-2核酸检测唾液样本检测中，唾液样本中的病毒载量较鼻咽拭子样本高，阳性率也高。

　　多色探针熔解曲线分析（MMCA）可鉴定新冠病毒变异株B.1.1.7，选择N501Y/D614G/HV69-70del和Y144del四个突变位点，可特异性鉴定B.1.1.7型。在鉴定B.1.617型时，选择L452R/P681R/E484Q三个突变位点鉴别B.1.617，并区分B.1.617.1和B.1.617.2。新冠病毒变异株鉴定试剂具有快速、简便、准确性高、灵敏度高、高效等特点，使用该方法在实时PCR平台上实现检测靶标数据达到10倍提升。该方法还可用于血培养阳性病原体识别和耐药基因鉴定，子宫颈炎预测模型等。

上海健康医学院专业（系）主任，国家药监局高级研修学院特聘专家 蒋海洪

报告题目：《医疗器械监督管理条例》修订与影响

　　报告介绍了《医疗器械监督管理条例》的立法思路和修订重点内容等。

　　《医疗器械监督管理条例》的立法思路，一是巩固审评审批制度改革成果，全面构建注册人制度；二是贯彻“放管服”改革精神，促进产业创新。2021年版《医疗器械监督管理条例》修订重点内容在产业创新方面，涵盖产业规划、创新体系、创新表彰奖励、未在境外上市创新器械、附条件审批、应急使用、鼓励医疗机构开展临床试验等；在构建注册人制度方面，涵盖产品全生命周期责任、质量管理能力审查、全生命周期义务、直接委托生产、生产过程管理、生产条件改变、注册人自销产品等。

　　违法IVD企业要承担严格的法律责任，包括违法产品、工具、设备、原材料的没收风险；违法货值金额5倍以上30倍以下罚款；行政许可证照的吊销、注销风险；追究刑事责任的风险；企业关闭、行业禁入的风险等。

Bio-Rad LSG基因产品线高级产品经理 赵云

报告题目：ddPCR技术在全球COVID-19疫情中的突破性应用

　　qPCR是间接且相对定量，依赖外部参照，单个样本的可用Cq并不是唯一确定的，Cq值易受PCR效率变化的影响，数据精确度低，CV%很容易超过50%。报告还介绍了使用RT-qPCR和RT-ddPCR在临床样本中的不同案例结果和差别。总的来说，ddPCR技术具有绝对定量（直接计算DNA分子并消除标准曲线），耐抑制剂（终点PCR使定量与扩增效率脱钩），高灵敏度（分区可以富集稀有靶标）等优势。

杭州禾骑士未来生物科技有限公司CEO 程奇

报告题目：基于重组酶介导链替换核酸扩增技术RAA的新冠核酸快检

　　报告中介绍了主要研究目标，包括Cas9或Cas13突变体筛选——建立定向突变基因库，筛选Cas9突变株，实现人体温度下高活性、单碱基编辑的改造酶，解决在体编辑难点；基因编辑关键新酶发现——采集特定环境细菌或古细菌，筛查Cas9新酶，寻找优于存在Off-target，稳定性差及在体编辑效率不足的原体系；CRISPR/Cas在体输运体系建立——通过外泌体包裹Cas酶系统，定向导入靶器官或病灶，降低副反应，提高治疗效率。

　　重组酶介导链替换核酸扩增技术（RAA技术）是一种在恒温核酸快速扩增技术，利用从细胞或真菌中获得的重组酶，在常温下该重组酶可与引物DNA紧密结合，形成酶和引物的聚合体，当引物在模板DNA结合蛋白的帮助下，打开模板DNA的双链结构，并在DNA聚合酶的作用下，形成新的DNA互补链，扩增产物以指数级增长。利用荧光探针标记，可以实现定时定量的结果分析，通常5-15分钟就可得到荧光检测结果。

博奥生物集团高级副总裁兼工程中心常务副主任、北京博奥晶典生物技术有限公司首席执行官 邢婉丽

报告题目：病原体检测体系的构建和应用

　　报告内容包括病原体检测市场需求，病原体检测手段，博奥晶典病原体检测体系构建等。

据BCC研究分析，2020年全球新冠检测市场高达603亿美元，预计至2027年将增至1951亿美元，CAGR为15%。国内病原体检测市场（非新冠类病原体）分析，中国感染性疾病市场规模预计将达到24亿美元，占整体IVD（非新冠检测类）体外争端市场的50%。其中，分子检测市场增速最快（年复合增长率可达15.3%）。

　　博奥推出了一种感染病原体检测手段（分子生物学）生物芯片法——全集成微流控芯片实验室技术，是真正意义上的全集成全自动芯片系统，具有创新微流控技术；样本加入芯片后可直接上机检测，无需其他试剂和操作；每张芯片2人份，每台仪器一次检测一张芯片；最快35分钟出阳性结果。针对病原体检测，博奥能够提供整体解决方案，包括乙肝病毒基因分型和耐药突变位点检测试剂盒、常见呼吸道病原体的鉴别诊断、人乳头瘤病毒（HPV）分型检测试剂盒（微阵列芯片法）等。

上海交通大学生命科学技术学院副院长 冯雁

报告题目：新型Argonaute核酸酶功能表征及在核酸检测中应用

　　报告内容主要介绍了研究背景、A-Star SNV检测技术和RADAR病毒检测技术。经济全球化下的感染性疾病流行使核酸检测成为焦点，核酸检测能够助力重大疾病筛查、早诊和伴随治疗。新型核酸酶的发现和应用必将推动基因检测领域变革，CRISPR/Cas核酸检测技术也面临一些挑战。

　　Argonaute（Ago）蛋白是新型可编程核酸酶，广泛存在真核和原核生物中，通常具有4个结构域，原核Ago催化与guide互补的靶标序列的剪切，对靶标序列无任何限制。A-Star低丰度SNV富集检测技术具有偶联PCR扩增特异性富集的技术优势：高温区分剪切，与常规PCR结合；对任意靶标序列设计、具有高特异性；单酶实现多重检测；模块设计可兼容多终端检测。A-Star体系对极低丰度样品集作用更显著，可高效、准确富集检测高背景临床样本中稀有突变基因，已实现一管式多重检测、多靶标之间无相互干扰。

　　等温扩增-雷达（RADAR）病毒检测技术是核酸酶检测新技术，是基于Ago可编程核酸酶的核酸快检技术，剪切产物作为“新生gDNA”，诱发对互补靶标ssDNA的次级剪切。RADAR可引入内标基因，防止假阴性；一管双重，检测灵敏度高；特异性试验结果表明，新冠核酸特异性分子在对21种常见呼吸道病原体均无交叉反应。

北京纳捷创始人兼首席科学家 王海滨

报告题目：临床对HBV DNA检测敏感性的需求及实现技术

　　磁珠“动态核酸提取方法”，是核酸纯化自动化、敏感性提高，相比传统核酸提取方法，磁珠法获得的核酸纯度和得率都有大幅度的提升。磁棒法提取核酸，通量通常有8/16/32/96通道，相对于抽吸法，磁棒法的优点是每一步的液体不残留，因为磁棒只带走磁珠，转移到下一个步骤相应的反应孔中。静态核酸提取具有多方面的技术优势：在扩增管纯化核酸，样本加样无需混匀，核酸裂解无需震荡，磁珠漂洗无需吹散，核酸扩增无需洗脱。

上海交通大学生命科学技术学院微生物代谢国家重点实验室研究员 贺新义

报告题目：sDNA-SBD核酸检测技术开发

　　报告中介绍了团队开展的项目，CRISPR应用于核酸检测中的技术特点，Cas13a特点是靶向和RNA反式切割的活性的一体化，具有恒温检测、特异性佳、灵敏度高等优势。SBD结构域可以和高活性反应器蛋白融合，提高检测灵敏性。反应器（X）和荧光探针（P）有更多更好的选择。量子点荧光的淬灭时长是有机荧光染料的24倍以上，信号具有累积效应。

　　研究团队首先建立NEARs恒温扩增体系（扩增与硫修饰DNA复性的融合），筛选适合核酸检测的SBD同源蛋白，筛选到有潜力进行RNA编辑的SBD同源蛋白。硫修饰核酸在反义寡核苷酸领域已经经过了几十年的研究，其安全性和有效性被充分证实；硫修饰RNA同时具有特异靶向和提高半衰期的作用；向导RNA的序列和长度可编程性高，编辑目标适用范围广。筛选SBD同时也进行改造适用于核酸检测的SBD，对用于核酸检测的SBD-X融合蛋白的构建及纯化，SBD融合蛋白无扩增信号检测。