新型冠状病毒感染的肺炎疫情在国内已经得到了较好的防控，抗疫工作进入“外防输入，内防反弹”的关键阶段。4月22日，中共中央政治局常委、国务院总理、中央应对新冠肺炎疫情工作领导小组组长李克强主持召开领导小组会议。会议指出，做好常态化防控要加快提升检测能力，大规模开展核酸和抗体检测。现阶段无症状感染者对疫情防控带来了巨大的挑战，所以在这种背景下核酸和抗体检测更为的必要和紧迫。
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核酸+抗体，可以弥补核酸检测阴性易造成的漏诊
新冠核酸检测具有早期诊断、灵敏度和特异性高等特点，是确诊新冠肺炎的“金标准”。但是受取样、提取效率及检测条件要求较高的影响，需要快速便捷的检测方法作为核酸检测的补充。
新型冠状病毒血清抗体检测是在病毒侵入人体后，首先出现的是免疫球蛋白IgM抗体，该抗体大约需要5-7天产生，然后在10-15天出现IgG抗体。因此，IgM抗体增高提示近期急性感染，IgG抗体增高提示既往感染。新冠总抗体包含IgM、IgG、IgA等抗体。
血清学检测最大的优势在于方便快捷，检测时间较短，能够有效突破现有检测技术对人员、场所的限制，缩短检测用时。因此核酸+抗体协同作用，可以弥补核酸检测阴性容易造成漏诊的缺点。目前新冠抗体检测试剂主要有总抗体检测试剂、IgM抗体和IgG抗体检测试剂。
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新冠抗体检测的方法
根据试剂的来源和标本的情况以及检测的具体条件，免疫学检测抗体的模式主要分为：捕获法、间接法、双抗原夹心法等。双抗原夹心法，不受类风湿因子等因素的干扰，基于病毒两侧同时进行特异性的抗原抗体结合，从反应机制上有效的较少假阳性，特异性较捕获法、间接法都高，同时可以检测样本中各类型抗体（包含IgM和IgG）[1]。近年来，包含乙肝抗体、梅毒抗体[2]、艾滋病毒抗体[3]、丙肝抗体[4]等领域都已经成功的运用，艾滋病抗体检测更是实现了从间接法到双抗原夹心法的第四代检测。
通过双抗原夹心检测总抗体，既包含了IgM抗体检测早期诊断新型冠状病毒的优势，又有检测IgG抗体既往感染（包含处于恢复期IgM下降的患者）的特点，可以更好的防止漏检，缩短诊断窗口期，具有更高的特异性和灵敏度，同时节省操作时间和成本、方便快捷，减少交叉污染等优势，在新型冠状病毒检测中具有重要的价值！据报道，目前国际诊断行业巨头罗氏、西门子、伯乐、强生奥森多等纷纷研制总抗体检测试剂。
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研究证实：新冠总抗体诊断新冠肺炎优于IgM+IgG抗体联合诊断
近期，多篇国内研究发布了在新冠病毒感染疾病进程中新冠总抗体（Ab）、IgM抗体和IgG抗体与疾病感染时间关系的研究。新冠总抗体的检测采用双抗原夹心法，IgM抗体和IgG检测采用捕获法。3种检测方法中，总抗体检测均显示出比IgM更高的敏感性和特异性。与总抗体相比，单独IgM抗体、IgG抗体、IgM抗体+IgG抗体诊断新冠肺炎的敏感性均低于总抗体。特异性验证表明新冠总抗体、IgM抗体和IgG抗体的特异性分别为99.1%、98.6%和99.0%[5]。
新冠抗体与疾病感染时间关系的研究显示，在新冠肺炎发病后1-7天，新冠总抗体、IgM抗体和IgG抗体的敏感性分别为38.3%、28.7%和19.1%；发病后8-14天，新冠总抗体、IgM抗体和IgG抗体的敏感性快速升高，分别为89.6%、73.3%和54.1%；发病后15-39天，新冠总抗体、IgM抗体和IgG抗体的敏感性分别达到100%、94.3%和79.8%[6]。
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新冠总抗体+核酸可将诊断早期新冠（1-7天）的敏感性提高12%
在新冠肺炎患者发病后1-7天内、8-14天及15-39天，核酸（RNA）检测的敏感性分别是66.7%，54%和44.5%。新冠肺炎患者发病后1-7天内、8-14天及15-39天，总抗体+RNA联合诊断的敏感性可以提高到78.7%、97%和100%。在新冠肺炎发病早期（1-7天），总抗体检测联合核酸检测可以将单一核酸检测诊断新冠的敏感性提高12%[6]。
针对核酸为阴性的新冠肺炎患者，新冠总抗体、IgM抗体和IgG抗体分别在新冠肺炎患者发病后不同时间均有一定的检出率。核酸阴性的新冠肺炎患者发病后1-3天，新冠总抗体、IgM抗体和IgG抗体的检出率均为28.6%；发病后4-7天，新冠总抗体、IgM抗体和IgG抗体的检出率分别为53.6%、42.9%和28.6%；发病后8-14天，新冠总抗体、IgM抗体和IgG抗体的检出率分别为98.2%、78.9%和70.2%；发病后15-39天，新冠总抗体、IgM抗体和IgG抗体的检出率分别为100%、93.3%和73.3%[6]。
基于双抗原夹心法在机制上的优势，总抗体检测能比单独检测IgM抗体和IgG抗体提前1-3天诊断出新冠感染，并且阳性结果更为明显，可以作为更好的早期诊断新冠肺炎的血清学诊断指标。在新冠感染的前1-7天，与IgM/IgG相比，总抗体检测+核酸检测能更有效提高新冠的检出率，是更有效的筛查策略。
总之，基于双抗原夹心法的新冠总抗体检测应该作为不同应用场景下核酸RNA检测的有效补充，可以提高新冠肺炎诊断的敏感型和特异性。同时，相对于IgM/IgG分别检测，总抗体检测可以节约医疗费用。建议总抗体检测的应用场景应包括：临床患者和密切接触者的筛查和管理、重点高危地区人群的筛查、流行病学的调查。
参考文献：
1. 冀敏, 郭新菊: 丙型肝炎病毒抗体双抗原夹心法的临床研究. 中国现代药物应用 2016, 10:21-22.
2. 孙强, 李艳琴, 何宝明: 双抗原夹心法和间接法检测丙型肝炎病毒抗体对比研究. 陕西医学杂志 2019, 48:1231-1234.
3. He H, Mao P, Hou J, Hong S, Zhu L, Hu Y, Bai Y: [Establishment of a double-antigen sandwich ELISA for detecting total antibodies to human immunodeficiency virus type 1/2]. Zhonghua Shi Yan He Lin Chuang Bing Du Xue Za Zhi 2002, 16:288-291.
4. He J, Xiu B, Wang G, Chen K, Feng X, Song X, Zhu C, Yang X, Bai G, Ling S, Zhang H: Construction, expression, purification and biotin labeling of a single recombinant multi-epitope antigen for double-antigen sandwich ELISA to detect hepatitis C virus antibody. Protein Pept Lett 2011, 18:839-847.
5. Xia, N.; Wang, G.; Gong, W. Serological Test is an Efficient Supplement of RNA Detection for Confirmation of SARS-CoV-2 Infection. Preprints 2020, 2020030184 (doi: 10.20944/preprints202003.0184.v1).
6. Zhao J, Yuan Q, Wang H, et al. Antibody responses to SARS-CoV-2 in patients of novel coronavirus disease 2019 [J]. medRxiv, 2020:2020-2023. DOI: 10.1101/2020.03.02. 20030189.
