免疫细胞的分离:
(1)外周血单个核细胞的分离
外周血中单个核细胞(淋巴细胞和单核细胞)的比重与红细胞、多核白细胞及血小板不同,介于1.075-1.090之间,因而可利用一种比重介于1.075-1.092之间而近于等渗的溶液作密度梯度离心,使一定比重的细胞按相应密度梯度分布而加以分离。常用的分层液有Ficoll与Percoll两种。
(2)淋巴细胞的分离
1)纯淋巴细胞群的采集:利用单核细胞在37℃和Ca2+存在时,能主动粘附在玻璃、塑料、尼龙毛、棉花纤维或葡聚糖凝胶的特性,从单个核细胞悬液中除去单核细胞,从而获得纯淋巴细胞群。主要的方法有:①粘附贴壁法;②吸附柱过滤法;③磁铁吸引法。
2)淋巴细胞亚群的分离原则:选择纯化所需细胞的方法是阳性选择法,而选择性去除不要的细胞,仅留下所需的细胞为阴性选择法。常用的方法包括:①E花环沉降法;②尼龙毛柱分离法;③亲和板结合分离法;④磁性微球分离法及荧光激活细胞分离仪分离法。
(3)淋巴细胞的保存与活力测定
①短期保存技术:短期保存可置于4℃保存。
②长期保存技术:液氮深低温(-196℃)环境保存细胞,加入二甲亚砜作为保护剂。
③活力测定:最简便常用的为台盼蓝染色法,呈蓝色。
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